Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR OGaWa - продуцент внеклеточной нейтральной протеазы Советский патент 1992 года по МПК C12N9/52 C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения протеазы холерного вибриона.

Известен штамм Escherichia coli QD 5003 Т-1, используемый для получения протеазы холерного вибриона с активностью 2,6 условных единиц.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Vibrio eltor P-9898. образующий внеклеточную протеазу с активностью 2,5 условных единиц.

Недостатком известных штаммов является низкий уровень активности внеклеточной холерной протеазы, а также нестабильность активности фермента.

Цель изобретения - получение высокоактивного штамма-продуцента внеклеточной протеазы,

Штамм бактерий V.cholerae eltor Ogawa КМ-171 получен путем отбора чистых культур бактерий, способных к биосинтезу холерной протеазы.

Штамм депонирован в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-171 (Р2940).

Штамм V.cholerae eltor Ogawa КМ-171 характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грамотрицатель- ные.

На плотном агаре образуют гладкие, круглые, прозрачные с ровными краями колонии диаметром 2-2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку.

Физиологические признаки. Оксидазо- положительный, относится к 1 группе Хей- берга, ферментирует глюкозу до кислоты без газа, ферментирует маннит, не ферментирует лактозу, декарбоксилирует лизин и орнитин, не растет в 1 %-ной пептонной во- де с добавлением 7 и 10% хлорида натрия.

Агглютинируется холерными сыворотками О, Огава, не агглютинируется сывороткой Инаба.

Лизируется холерным бактериофагом эльтор, ХДФ 3, ХДФ 4, ХДФ 5, лизируется холерным бактериофагом.

Пример. Культуру штамма V. cholerae eltor Ogawa КМ-171 высевают в 1 %-ную пептонную воду, рН 7,6 в дозе 106 кл/мл и выращивают на качалке при 30°С 18 ч. Отделение клеток из культуральной жидкости проводят центрифугированием при 6000 д.

Активность протеазы штамма V.cholerae eltor Ogawa КМ-171 составляла 6,6 ед АС/мл, а штамма V.cholerae eltor Р2940 - 0,15 ед. АС/мл, т.е. в 44 раза выше, чем у прототипа.

Штамм V.cholerae eltor Ogawa КМ-171 стабилен при хранении.

Использование штамма бактерий V.cholerae eltor Ogawa КМ-171 возможно для получения очищенных препаратов внеклеточной нейтральной протеазы для изучения их роли в иммунитете при холере и создания на их основе противохолерных вакцин.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor Ogawa КМ-171 - продуцент внеклеточной протеазы.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению штаммов-продуцентов ферментов. Цель изобретения - получение штамма Vibrio cholerae eltor Ogawa KM-171(P2940) - продуцента внеклеточной нейтральной протеазы, обладающего более высокой активностью. Штамм получен путем селекции бактерий, способных к биосинтезу хо- лерной протеазы. Штамм бактерий Vibrio cholerae eltorP2940 депонирован в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного институ-i Микроб под № 171. Культу рал ьные свойства: на плотных питательных средах растут в виде прозрачных круглых колоний с ровными краями. В жидких средах вызывают равномерное помутнение, на поверхности пленку. Физиологические свойства: окси- дазоположительные, ферментируют и окисляют глюкозу до кислоты без газа, не ферментируют лактозу, ферментируют ман- нит , крахмал,относятся к 1 группе Хейбер- га, имеют декарбоксилазу лизина и орнитина, не растут в 1 % пептонной воде с добавлением 7 и 10 % хлорида натрия, обладают протеолитической активностью. Агглютинируются холерными диагностическими сыворотками 0, Огава и не агглютинируются сыворотками Инаба. Лизируются холерными бактериофагами эльтор, ХДФ 3.4,5 и не лизи- руются классическим холерным бактериофагом. Активность внеклеточной нейтральной протеазы Vibrio cholerae eltor P2940 в фер- ментсодержащем надосадке составляет 6,6 ед/мл (ГОСТ 202642-74) или 105 усл. ед. на 1 мл культуральной жидкости, что в 44 раза выше ранее применявшегося Vibrio eltor Р9899(0,15ед/мл). Штамм стабильно сохра- - няет в течение 4 лет ферментативную активность. Ё ел