Способ определения аскорбиновой кислоты в лейкоцитах Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к аналитической биохимии.

Цель изобретения - упрощение способа за счет устранения дополнительной очистки метанольного экстракта.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу обрабатьгеают раствором метанола, добавляют этилендиа- минтетраацетат (ЗДТА) в концентрации О,15-0,40 мг на мг лейкоцитов и разделяют метанольный экстракт на две пробы, одну из которых доводят до рН З,2-3,3, а другую - до рН 7,8- 8,0, затем спектрофотометрируют одну по отношению к другой при длинах волн 240 и 270 нм соответственно и по разнице оптических плотностей определяют концентрацию аскорбиновой кислоты.

Пример,К5мг выделенных сырых лейкоцитов добавляют 4 мл мета-иола, содержащего О,ОГ мл 1%-ной соляной кислоты и 0,15-0,40 мг на мг лейкоцитов ЭДТА, взбалтьшают и центрифугируют. Определяют верхний жидкий прозрачньй слой и разделяют на две пробы. К одной пробе добавляют 0,02 мл I%-но- го раствора соляной кислоты до , , а к другой добавляют 0,02 мл 1%-ный раствор едкого натра для доведения до рН 7,8. Образцы помещают в кюветы толщиной 1 см и спектрофотометрируют одну к другой в диапазоне 220-290 нм. Потом измеряют оптическую плотность при длинах волн 240 и 270 им, определяют их

Составитель М.Позняк Редактор Г.Гербер Техред И.Попович Корректор 0.Луговая

Заказ 7291/60 Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам- изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул. Проектная,4

разницу, которая составляет 0,0243. Стандартный раствор аскорбиновой кислоты 0,01 мг/мл при рН 3,2-3,3 и 7,8-8,0 и длинах волн 240 и 270 нм дает разницу оптической плотности 0,97. Содержание аскорбиновой кисло- - ты в данном образце 20,04 мг/100 г лейкоцитов.

Использование предлагаемого способа определения аскорбиновой кислоты в лейкоцитах по сравнению с известным упрощает определение, так как исключается очистка экстракта хрома- тографическим способом. Время анализа 30 мин (по известному 90 мин).

Формула изобретения

, Способ определения аскорбиновой кислоты в лейкоцитах, путем экстрагирования метанолом с последующим фотометрированием, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет устранения дополнительной очистки метанольного экстракта, в метанол добавляют эти- лендиаминтетраацетат в концентрации 0,15-0,40 мг на мг лейкоцитов мета- нольный экстракт разделяют на две пробы, рН одной пробы доводят до 3,2-3,3, рН другой пробы - до 7,8-8,0 и проводят спектрофотомет- рирование одной пробы против другой при 240 и 270 нм и по разнице оптических плотностей при 240 и 270 нм определяют концентрацию аскорбиновой кислоты.

Изобретение относится к медицине, а именно к аналитической биохимии. Цель изобретения - упрощение способа путем исключения дополнительной очистки метанольного экстракта хроматографическим способом. Для этого исследуемую пробу обраба- : тьтают 60%-ным раствором метанола, добавляют этилендиаминтетрацетат в концентрации 0,15-0,40 мг/мл и разделяют метанольный экстракт на две пробы, одну из которых доводят до рН 3,2-3,3, а другую - до рН 7,8- 8,0. Затем спектрофотометрируют одну по отношению к другой при длинах волн 240 и 270 нм соответственно и по разнице оптических плотностей , определяют концентрацию аскорбиновой кислоты. (Л с 1C СХ) to оо