СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПОЧЕК Российский патент 2012 года по МПК G01N33/52 G01N33/493 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии, и может быть использовано как для оценки функционального состояния почек, так и при контроле за эффективностью проводимого лечения.

Известно, что исследование мочи позволяет установить заболевания почек и нарушение их функции, а также изменения обмена веществ, не связанные с поражением других органов. Поэтому оно является обязательным при обследовании больного.

Известен общеклинический анализ мочи, проводимый всем больным и включающий изучение ее физических свойств, химического состава и микроскопическое исследование осадка. Известный способ включает определение количества мочи, цвета, прозрачности, реакции (или ph) мочи, удельного веса (В.В.Меньшиков. "Лабораторные методы исследования в клинике. М., Медицина, 1987, с.47-48).

К недостаткам вышеприведенного способа следует отнести его низкую селективность, так как при одинаковых физических характеристиках он не выявляет пул метаболитов, характеризующих токсические свойства мочи.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому способу является химическое исследование мочи, которое проводят тест-полосками, предназначенными для экспресс-определения компонентов мочи. При этом происходит специфическое окрашивание специальных индикаторных зон. Определяемые тест-полосками компоненты мочи включают: уробилиноген, билирубин, кетоновые тела, аскорбиновую кислоту, глюкозу, общий белок, нитриты, кровь (эритроциты), лейкоциты, удельный вес и ph (кислотность) мочи (Инструкция по использованию тест-полосок. Analyticon. Biotechnologies A.G. Германия).

Для осуществления известного способа первую утреннюю порцию мочи хорошо перемешивают, берут пинцетом тест-полоску и погружают ее в пробирку с мочой на 2-3 с так, чтобы все индикаторные зоны находились ниже уровня жидкости. Полоску извлекают, удаляют излишки мочи постукиванием ребром полоски о край пробирки. Через 1 минуту сравнивают окраску каждой из зон тест-полоски с цветом соответствующей зоны на контрольной шкале, нанесенной на внешнюю поверхность тубы.

К недостаткам вышеприведенного способа следует отнести его низкую специфичность, так как у пациентов, моча которых имеет щелочную реакцию, высокий удельный вес, а также у пациентов, принимающих лекарства, содержащие хинины или хинолины, получают ложноположительные или ложнозавышенные результаты. Заниженные результаты могут быть обусловлены присутствием детергентов на стенках посуды для сбора мочи.

Также к недостаткам известного способа следует отнести и обнаружение повышенного содержания белка, которое не всегда свидетельствует о нарушении работы почек, а может быть обусловлено высокой физической нагрузкой либо лихорадочным состоянием пациента (Справочник по лабораторным методам исследования под ред. Л.А.Даниловой. "Питер", 2003, с.485-509).

К низкой селективности известного способа, как и аналогичного, следует отнести то, что он не выявляет пула метаболитов, свидетельствующего о нарушении функции почек.

Задачей заявленного технического решения является разработка способа определения нарушений функционального состояния почек.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение его селективности за счет установления повышенного содержания общего пула метаболитов, оказывающих токсическое действие на организм.

Технический результат достигается тем, что способ оценки функционального состояния почек включает исследование пробы мочи.

Отличия предлагаемого способа заключаются в том, что суточную мочу перемешивают, определяют ее удельный вес и при удельном весе, равном или выше 1,020, пробу суточной мочи разводят дистиллированной водой до удельного веса менее 1,020. Затем полученную пробу суточной мочи центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут, к центрифугату добавляют ацетонитрил в объемном соотношении 1:1, перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 минут. После чего отбирают надосадочную жидкость, которую вносят в дистиллированную воду в соотношении 1:9, перемешивают и спектрофотометрируют в интервале длин волн 210-300 нм. Величину оптической плотности определяю при 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 и 300 нм, после чего устанавливают суммарную оптическую плотность по формуле:

где

- суммарная оптическая плотность в условных единицах,

- величина оптической плотности при λ 210 нм,

- величина оптической плотности при λ 220 нм,

- величина оптической плотности при λ 230 нм,

- величина оптической плотности при λ 240 нм,

- величина оптической плотности при λ 250 нм,

- величина оптической плотности при λ 260 нм,

- величина оптической плотности при λ 270 нм,

- величина оптической плотности при λ 280 нм,

- величина оптической плотности при λ 290 нм,

- величина оптической плотности при λ 300 нм.

При величине общей суммы оптических плотностей, равной и более 30 условным единицам, устанавливают нарушение функционального состояния почек.

Проведенный сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемый способ отличается от известного вышеперечисленными приемами и, следовательно, соответствует критерию изобретения "новизна".

Из анализа патентной и специальной литературы установлено, что предлагаемый способ имеет признаки, отличающие его не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях медицины. В доступной литературе авторами предлагаемого технического решения не выявлено способа определения нарушения функционального состояния почек вышеприведенными приемами.

Известно, что в диапазоне 210-300 нм определяются основные группы метаболитов мочи, присущие как практически здоровым, так и больным людям.

Авторами заявляемого способа установлено, что избыточное количество патологических компонентов, оказывающих токсическое действие и нарушающих гомеостаз внутренней среды организма, содержится в общем пуле метаболитов и выявляется по суммарной оптической плотности, равной и более 30 условным единицам. Это свидетельствует о нарушении функционального состояния почек.

Клинические исследования авторов заявляемого способа свидетельствуют о том, что использование предлагаемого технического решения позволяет повысить точность определения функционального состояния почек и обеспечить возможность контроля за эффективностью проводимого лечения.

Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии технического решения критерию "изобретательский уровень".

Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, а именно в клинической практике и биохимии. Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке примерами и, следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию изобретения "промышленная применимость".

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Собирают суточную мочу, хорошо перемешивают, определяют ее удельный вес. Если моча имеет удельный вес, равный или выше 1,020, то пробу мочи разводят дистиллированной водой до удельного веса менее 1,020. На исследование берут 5-7 мл мочи, центрифугируют при 3000 оборотах 10 мин. Затем забирают 1 мл центрифугата, добавляют 1 мл ацетонитрила (марки "ОСЧ"), перемешивают, центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин (для осаждения высокомолекулярных соединений). Отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости (супернатант мочи), которую разводят 4,5 мл дистиллированной воды (соотношение 1:9), перемешивают и спектрофотометрируют в диапазоне длин волн 210-300 нм против контроля, приготовленного аналогичным образом. В контроле вместо мочи добавляют 1 мл дистиллированной воды.

Величины оптических плотностей определяют в интервале длин волн 210-300 нм, после чего устанавливают суммарную оптическую плотность по формуле:

где

- суммарная оптическая плотность в условных единицах,

- величина оптической плотности при λ 210 нм,

- величина оптической плотности при λ 220 нм,

- величина оптической плотности при λ 230 нм,

- величина оптической плотности при λ 240 нм,

- величина оптической плотности при λ 250 нм,

- величина оптической плотности при λ 260 нм,

- величина оптической плотности при λ 270 нм,

- величина оптической плотности при λ 280 нм,

- величина оптической плотности при λ 290 нм,

- величина оптической плотности при λ 300 нм.

Авторами предлагаемого способа установлено, что суммарная оптическая плотность супернатанта мочи в интервале длин волн 210-300 нм больше или равная 30 условным единицам (у.е.) свидетельствует о нарушении функционального состояния почек. Время анализа составляет 40 минут.

Предложенный способ поясняется примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Больной В., история болезни 12461. Диагноз: болезнь Крона. Удельный вес мочи 1,030. Для исследования пробу мочи дистиллированной водой развели в 30 раз, после чего удельный вес пробы мочи составил 1,015. Величина суммарной оптической плотности =226,94 у.е., что свидетельствовало о нарушении функции почек. После проведенного лечения и контрольного анализа мочи: удельный вес мочи 1,010, =23,36 у.е., что указывало на эффективность проведенного лечения.

Пример 2. Больная Г., история болезни 13120. Диагноз: пиелонефрит. При поступлении: удельный вес мочи 1,030. Пробу мочи развели в 20 раз, до удельного веса 1,010. Суммарная оптическая плотность составила =254,13 у.е. Полученные данные указывают на нарушение функционального состояния почек. При выписке: удельный вес мочи 1,010, =146,15 у.е., что указывает недостаточную эффективность проведенного лечения.

Пример 3. Донор (практически здоровый человек). Удельный вес мочи 1,015, =24,12 у.е. Данные свидетельствуют об отсутствии нарушений функционального состояния почек.

Клинические исследования заявляемого способа проведены на базе НЦРВХ СО РАМН с 2007 года. Всего было обследовано 86 человек, из них: 46 пациентов - это больные с воспалительными заболеваниями толстой кишки (ВЗК - болезнь Крона, язвенный колит), 20 пациентов с пиелонефритом и 20 - практически здоровые люди.

Полученные данные спектральных характеристик супернатантов мочи всех обследованных представлены в нижеприведенной таблице.

Группы Суммарная оптическая плотность при 210-300 нм Больные воспалительными заболеваниями кишечника, n=46 640±32,3 р<0,001 Больные пиелонефритом, n=20 324±21,0 р<0,001 Доноры, n=20 24,89±3,9

На основании клинических исследований авторами заявляемого способа установлено достоверное увеличение суммарной оптической плотности у больных воспалительными заболеваниями кишечника и пиелонефритом, что свидетельствует о неспособности проксимальных отделов нефрона эффективно реабсорбировать проходящие через гломерулярный фильтр низкомолекулярные соединения.

Таким образом, заявленный способ позволяет установить нарушение функционального состояния почек и дает возможность осуществления контроля за эффективностью проводимого лечения. Способ не сложен в исполнении и не требует применения дорогостоящего оборудования и реактивов.

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано для оценки функционального состояния почек. Способ осуществляют следующим образом: суточную мочу перемешивают, определяют ее удельный вес, при удельном весе, равном или выше 1,020, пробу суточной мочи разводят дистиллированной водой до удельного веса менее 1,020. Затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут. К центрифугату добавляют ацетонитрил в объемном соотношении 1:1, перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 минут. После отбирают надосадочную жидкость, которую вносят в дистиллированную воду в соотношении 1:9, перемешивают и спектрофотометрируют в интервале длин волн 210-300 нм. Определяют величину оптической плотности при 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 и 300 нм, после чего устанавливают суммарную оптическую плотность по расчетной формуле. Нарушение функционального состояния почек устанавливают при величине суммарной оптической плотности, равной и более 30 условным единицам. Способ позволяет установить нарушение функции почек и дает возможность осуществления контроля за эффективностью проводимого лечения. 1 табл.

Способ определения функционального состояния почек, включающий исследование пробы мочи, отличающейся тем, что суточную мочу перемешивают, определяют ее удельный вес и при удельном весе, равном или выше 1,020, пробу суточной мочи разводят дистиллированной водой до удельного веса менее 1,020, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, к центрифугату добавляют ацетонитрил в объемном соотношении 1:1, перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин, после чего отбирают надосадочную жидкость, которую вносят в дистиллированную воду в соотношении 1:9, перемешивают и спектрофотометрируют в интервале длин волн 210-300 нм и определяют величину оптической плотности при 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 и 300 нм, после чего устанавливают суммарную оптическую плотность по формуле:
,
где - суммарная оптическая плотность в условных единицах,
- величина оптической плотности при λ 210 нм,
- величина оптической плотности при λ 220 нм
- величина оптической плотности при λ 230 нм,
- величина оптической плотности при λ 240 нм,
- величина оптической плотности при λ 250 нм,
- величина оптической плотности при λ 260 нм,
- величина оптической плотности при λ 270 нм,
- величина оптической плотности при λ 280 нм,
- величина оптической плотности при λ 290 нм,
- величина оптической плотности при λ 300 нм
и при величине суммарной оптической плотности, равной и более 30 условным единицам, устанавливают нарушение функционального состояния почек.