Способ количественного определения ксимедона в крови Советский патент 1991 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к области экс- периметральной медицине, в частности к количественному анализу лекарственного вещества пиримидинового ряда - ксимедо- на, и может быть использовано для контроля содержания препарата в крови человека и животных и для установления доза зависимых эффектов при клинических исследованиях для расширения показаний применения препарата.

Способ осуществляют следующим образом.

В центрифужную пластмассовую пробирку с предварительно налитой туда хлорной кислотой в объеме 4 мл (7,5%-ный раствор, приготовленный путем разбавления НСЮ4, ч, в 4 раза) по каплям добавляют 1 мл крови (сыворотки) стерильно взятой из вены донора, принимавшего ксимедок. В этот момент наблюдается коагуляция белка

и частичное разрушение клеточных элементов крови с образованием сгустка коричневого цвета и прозрачного надосадка с легким желтым оттенком. Далее содержимое пробирки перемешивают, а затем центрифугируют 15 мин при 15 тыс, об/мин. Надосадок фильтруют через шотовский фильтр Ns 2. Полученный прозрачный экстракт помещают в сантиметровую кварцевую кювету и регистрируют спектр в диапазоне 270-320 нм. Контролем служит проба крови (сыворотки), обработанная аналогичным образом, но полученная от донора до приема ксимедона. По спектру определяют оптическую плотность в max полосы (Dmax) и по известной формуле находят концентрацию ксимедона. Минимальная концентрация ксимедона, определяемая предлагаемым методом, составляет 0,1 мкг/мл. Следы ксимедона (качественно)

С 00

го ю со о

можно уловить вплоть до 0,001 мкг/мл. Определение проводят при комнатной температуре.

В связи с тем, что изменение концентрации хлорной кислоты в большую или меньшую сторону от предлагаемой отрицательно сказывается на чувствительности метод, необходимо строгое соблюдение рекомендуемой степени разбавления кислоты. Применение большего разведения приводит к недостаточной коагуляции белков цельной крови, из-за чего растет оптический белковый фон, ухудшающий условия регистрации анализируемой полосы. В случае применения более концентрированной -HCI04 растет оптический удельный фон путем усиления поглощения более концентрированной кислотой и пигментов как результата жесткого гемолиза эритроцитов.

П р и м е р 1. Определение ксимедона в растворах различной концентрации методом УФ-спектроскопии. Навески ксимедона растворяют в 7,5%-ном растворе НСЮд с учетом получения концентраций препарата в растворе кислоты, отличающихся на порядок, мг/мл: 1 , 1 , 1 -10, .

Определение проводят в кварцевых кюветах на двухлучевом саморегистрирующем спектрофотометре UV-Vis Specord M40. Полученные результаты представлены в табл,1.

П р и м е р 2, Количественное определение ксимедона в крови человека, получившего перорально препарат.

Навеску препарата растворяют в 50 мл дистиллированной воды из расчета 30 мг/кг веса, после чего донор принимает ее вовнутрь. Перед приемом препарата у донора из локтевой вены методом венепункции берут 1 мл крови, используемой в дальнейшем в виде контроля. После приема препарата через 20, 40, 60, 120 и 240 мин у донора аналогичным методом берут опытные пробы крови по 1 мл.

Далее пробу добавляют по каплям в центрифужную пластмассовую пробирку, с предварительно налитой в нее 7,5%-ной хлорной кислотой (4 мл).

В момент добавления наблюдают коагуляцию белка с частичным разрушением клеточных элементов крови в виде сгустка коричневого цвета и прозрачного надосадка с легким желтоватым оттенком.

Содержимое пробирки перемешивают

стеклянной палочкой, а затем центрифугируют 15 мин при 15 тыс об/мин.

Отфильтрованный после центрифугирования надосадок помещают в кварцевую кювету (1 1 см) и спектрофотометрируют в

диапазоне 270-320 нм. Данные опыта приведены в табл.2.

П р и м е р 3. Количественное определение ксимедона в сыворотке крови собаки после внутривенного введения препарата.

Навеску препарата растворяют в 10 мл дистиллированной воды из расчета 10 мг/кг веса, после чего собаке вводят препарат методом венопункции поверхностной вены передней лапы.

Через 30, 90, 180 и 280 мин этим же методом берут по 4 мл крови (возможен вариант, когда под внутрибрюшинным урета- новым наркозом собаке вставляют канюлю в наружную сонную артерию из которой

кровь получают многократно. Присутствие уретана в организме животного не мешает определению).

До введения препарата у этой же собаки аналогичным образом берут 4 мл крови, используемой в дальнейшем в виде контроля. Взятую кровь помещают в сухую центрифужную пробирку и центрифугируют ее 15 мин при 3 тыс. об/мин. Полученную сыворотку в объеме 1 мл обрабатывают как в

примере 2. При добавлении сыворотки к кислоте образуется осадок белого или кремового цвета, а надосадок прозрачен. Данные опыта приведены в табл. 3. Предлагаемый способ количественного

определения ксимедона прост, специфичен и не требует специальной подготовки донора.

Формула изобретения Способ количественного определения ксимедона в крови, включающий обработку крови 7,5%-ной хлорной кислотой, центрифугирование, далее супернатант спектрофотометрируют в диапазоне 270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание ксимедона.

Таблица

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности для контроля содержания препарата в крови и для установления дозазависимых эффектов при клинических исследованиях. Способ заключается в обработке 1 мл крови 4 мл 7,5%-ной хлорной кислотой, отделении образующегося осадка центрифугированием, фильтровании супернатанта и последующем спектрофотометрировании о диапазоне 270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание кси- медона. Способ позволяет определять ксимедон в крови в количестве 0,1 мкг/мл. 3 табл.

При расчете количества препарата учитывается коэффициента разбавления пробы кислотой, который равен 5

Таблица 3

Таблица 2