Способ культивирования лямблий Советский патент 1960 года по МПК C12N1/10 

Предлагается способ ку.:1ьт1 В11рования .-тмо., от.-щчающшкя тем, что их засевают и центрифугируют вместе е дрожжеподобными грибками рода Candida в недельную ку.чьтуру куриных фибропластов, содержащую пенициллин и стрецгомицин.

Способ осуществляется следующим образом. Содержимое двенадцатииерстной кищки (дуоденальное содержимое), взятое у больных, не лечивижхся акрихином, разводят равным объемом солевого раствора и центрифугируют при 600-1000 об/мин в течение 10 мин, отсасывают надосадочную жидкость, к осадку добавляют 2-3 лл культуральной жидкости из флаконов, где культивируются куриные фибропласты. Осадок взбалтывают и снова центрифугируют, повторяя эту операцию еще 2 раза.

После последнего центрифугирования снова добавляют 2-3 мл культуральной жидкости, осадок тщательно разбивают и засевают по 0,5-1 мл в инсулиновые флаконы с культурой куриных фибропластоа, выращенных на среде Л° 2, после чего в среду на кончике скальпеля вносят немного пенициллина и стрептомицина.

Флаконы плотно закрывают резиновыми пробками и укладывают в нaклoииo (5-7 к горизонтали) положении. Культивирование ведут в термостатах при 37.

В состав среды № 2, на которой выращивают куриные фибропласты, входят: 20% фильтрованной человеческой сыворотки, 5% куриного эмбрионального экстракта, 25% бульона Хоттингера и 50% солевого раствора Эрла. Реакцию питательной среды устанавливают путем пропускания углекислоты в пределах рН 7,4-7,6.

На второй день посте посева во флаконы с культурой лямблий добавляют по 1 мл питательной среды.

В дальнейщем заменяют лишь половину культуральной жидкости. Смену фазы производят ежедневно. Оптимальной реакцие питательной среды для выращивания лямблий является рН 7,2-7,4.

Через 4-5 дней, одновременно с дрожжеподобными грибками начинают размножаться лямблии: среди фибропластов появляются попарно расположенные паразиты.

Пересевы производят в культурах со сплошным ростом, когда количество лямблий в 1 мл культуральной жидкости содержится не менее 100 тысяч. За 2-4 час до пересева необходимо заменять иоловииу культуральной жидкости новой фазой. Флакон с культурой энергично встряхивают, причем больидииство лямблий переходит в раствор. В каждый новый флакон засевают по 20-30 тысяч лямблий в 1 мл жидкости.

В старый флакон набирают новую порцию питательной жидкости и продолжают культивирование исходного штамма. Оиределенное количество лямблий (30-40 тысяч в 1 мл) находится в надосадочной жидкости. При ежедневных сменах фазы надосадочную жидкость не выбрасывают, а засевают в новые флаконы.

Предмет и з о б р е т е и и я

Способ культивирования лямблий, отличающийся тем, что, с целью облегчения их исследования, лямблии центрифугируют и засевают вместе с дрожжеподобными грибками рода Candida в культуру куриных фиброплаетов, в которую добавляют затем пенициллин и стрентомнцин.