Способ диагностики нефротического синдрома Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к урологии и нефрологии.

Цель изобретения - повьшение точности способа. i

Способ осуществляют следующим образом.

Собирают мочу за сутки, хранят в холодильнике. Отбирают 20-25 мл мочи из суточного объема, заморажи

вают, затем дают оттаять и сразу же

фильтруют через бумажный фильтр с диаметром пор 1-25 мкм. 5-10 мл профильтрованной мочи наливают в химический стакан объемом 50 мл и измеряют в нем исходный рН мочи на по- тенциометре любой марки. Далее под контролем показаний потенциометра осторожно добавляют по каплям 1 н. раствор соляной кислоты, доводя рН до показания, равного 4,1-4,6.

Затем в химическую пробирку помещают 0,2 мл мочи с рН 4,1-4,6J добавляют 2мл 0,025 М раствора хлористог кальция. Измеряют оптическую плотность полученного раствора (Е) на фотоэлектроколориметре любой марки в кювете толщиной слоя 0,5 см против дистиллированной воды при красном светофильтре (длина волны 597 нм) . Далее в кювету добавляют 0,04 мл 1%-ного раствора гепарина (1000 МЕ/мл), перемешивают и точно через 4 мин производят второе определение оптической плотности раствора (Е).

Разница (Е - Е,) приходится на оптическую плотность раствора, обусловленную нерастворимым комплексом липопротеидов низкой плотности (ЛНП) с гепарином в присутствии ионов кальция в данном образце мочи..Расчет концентрации ЛНП в моче (С, г/л) производится по калибровочной кривой. Расчет суточной экскреции ЛНП с мочой производится по формуле

С X V г/сут,

где С - найденная по калибровочному графику концентрация ЛНП, г/л; V - объем вьщеленной мочи за

сутки, л.

С целью построения стандартного калибровочного графика для количественного определения ЛНП выполняется препаративное выделение ЛНП из сыво- ротки крови в соответствии с методом

Способ выделения ЛНП основан на способности ЛНП образовьгоать нерастворимые комплексы с гепарином в при

5

0

5

5

0

5

сутствии ионов кальция. Используют сыворотки крови человека; неразнеден- ная - I проба; разведенная в 2 раза - II проба; разведенная в 3 раза - III проба; разведенная в 4 раза - IV проба.

Определение разности оптической плотности (Е - Е,), обусловленной ЛНП, в пробах.

0,2 мл каждой пробы отбирают в отдельную пробирку, добавляют 2 мл 0,025 М раствора хлористого кальция и определяют оптическую плотность (Е,) на фотозлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 0,5 см против дистиллированной воды при длине волны 597 нм. Затем содержимое кюветы сливают в ту же пробирку и добавляют 0,04 мл гепарина (1000 МЕ/мл). Через 4 мин от момента добавления гепарина снова определяют оптическую плотность раствора (Е„). Для каждой из четырех проб находят разницу (Е Е;|), обусловленную нерастворимыми комплексами ЛНП с гепарином в присутствии ионов кальция. I

Препаративное осаждение ЛНП из

сыворотки крови.

Используют по 10 мл каждой из проб, которые помещают соответственно в четыре отдельные конические колбы. Затем -в каждую из колб добавляют 100 мл дистиллированной воды, 2,5 мл 2 М раствора хлористого кальция и 0,8 мл раствора гепарина (5000 МЕ/мл). Смесь тщательно перемешивают и помещают в холодильник при 2-5°С на ночь. Содержимое каждой колбы центрифугируют в центрифужных пробирках 45 мин при ЗООО оборотах в минуту при 2-5°С. В результате на дне пробирок образуется плотный осадок ЛНП. Над- осадочную жидкость сливают, а осадок растворяют в 2 1ЧЛ 5%-ного NaCl и переносят количественно в стаканчик для диализа с фиксированной на дне целлофановой мембраной. Диализ проводится против дистиллированной воды в течение 48 ч при 2-5°С, меняя воду 2-3 раза.

Затем содержимое стаканчиков количественно переносят во взвешенные бюксы, высушивают при 70-80 с до .постоянного веса и определяют вес осажденных ЛНП в исследуемых пробах.

На основании полученных данных вычерчивают калибровочньй график для количественного определения ЛНП. По оси ординат откладывают показатели

ФЭКа (Е - Ej) для каждой из проб, а по оси абсцисс - соответствующий вес осажденных ПИП в граммах в расчете на 1 л.

П р и .м е р 1. Больной В., клинический диагноз: .гломерулонефрит, неф- ротический синдром. Суточный диурез 1,4 л, суточная потеря белка с мочой 6,72 г. Исходное рН мочи 7,5.

Согласно предлагаемому способу в порциях мочи создали градиенты рН, равные 7,5; 5,2; 4,1 и 3,1. Каждьш раз при достижении указанных градиентов рН отбирали по 0,2 мл мочи в отдельные пробирки: I, II, III и IV пробы. В каждой из этих проб производили определение содержания ЛНП (табл,1). В III пробе мочи с рН 4,1 степень выявления ЛНП была максимальной и суточная экскреция ЛНП составила 15,4 г. Таким образом, количественное определение ЛНП в моче с помощью предлагаемого способа более информативно характеризует качественный состав экскретируемых крупнодисперсных белков, что является существенным дополнением в диагностике нарушения экскреторной функции почек

П р и м е р 2. Больной К., клинический диагноз: хронический гломер- улонефрит. Суточное вьщеление мочи 0,5 л. Экскреция белка с мочой 5,25 г/сут. Исходное рН мочи 6,9.

Согласно предлагаемому способу в порциях мочи создавали градиенты рН, равные- 6,9; 6,0; 5,1; 4,6; 4,1; 3,2 и 2,2. При указанных показателях рН отбирали по 0,2 мл мочи в отдельные пробирки: I-VII пробы. В каждой из них определяли содержание ЛНП. Результаты определения ЛНП в моче больного К. в зависимости от показателя рН представлены в табл.2. Наиболее высокая степень выявления ЛНП. была в IV и V пробах мочи с рН 4,1 и 4,6, а именно 5,36 г/сут, что дополнительно характеризует состояние экскреторной функции почек.

Л р и м е р 3. Больной Ч., клинический диагноз: гломерулонефрит, мочевой синдром. Суточное вьщеление мочи 0,5 л. Суточная потеря белка с мочой 1,1 г. Исходное рН мочи 5,6.

В порциях мочи создавали градиен10

15

20

25

30

35

40

45

50

пробы, и определяли липопротеиды. Результаты определения экскреции ЛН с мочой у больного Ч. в зависимости от показателя рН представлены в табл.3. Во II и III пробах мочи с рН 4,1 и 4,6 обнаружена максимальная концентрация ДНИ и суточная их экскреция, равная 0,95 г. Таким образо наиболее полное выявление ЛНП в моч имело место при рН мочи, равном 4,1-4,6.

П р и м е р 4. Обследуемый М. На рушени я экскреторной функции почек не выявлено. Исследование мочи производилось 30.05.84 г. Суточный диу рез 1 л мочи. Белок в моче отсутст- вует. Исходное рН мочи 6,93.

В табл.4 представлены данные опр деления ЛНП в моче обследуемого М. в зависимости от градиента рН мочи, создаваемых согласно предлагаемому способу. Установлено, что при отсут ствии нарушения экскреторной функци почек и белка в моче ЛНП в ней не обнар живается при показаниях рН 4,1-4,6.

Пример5. У больного гломер улонефритом В. относительный процен глобулинов 51%, из них бета-глобули нов 10%, суточная экскреция ЛНП 15,4 г

Примерб. У больного гломер- улонефритом Е. относительный процент глобулинов 52%, из них бета-глобулинов 12%, суточная экскреция ЛНП 0,95 г

Согласно известному способу точность -определения крупнодисперсных белков плазмы и, в частности, относящихся к |Ь -фракции глобулинов составляет 50%, а согласно предлагаемом способу точность повышается до 95-98%

Формула изобретения

Способ диагностики нефротического синдрома путем фотометрического исследования мочи при 597 нм, о т л и чающ ийся тем, что, с целью повышения точности способа, в моче определяют липопротеиды низкой плотности, при этом пробу обрабатывают раствором соляной кислоты, доводят рН мочи до 4,1-4,6, далее обрабатывают хлористым кальцием и гепарином и по появлению липопротеидов низкой

ты рН 5,6; 4,6; 4,1; 3,2 и 2,2, после плотности.диагностируют нефротичес- чего отбирали по 0,2 мл мочи: I-V кий синдром.

0

5

0

5

0

5

0

5

0

пробы, и определяли липопротеиды. Результаты определения экскреции ЛНП с мочой у больного Ч. в зависимости от показателя рН представлены в табл.3. Во II и III пробах мочи с рН 4,1 и 4,6 обнаружена максимальная концентрация ДНИ и суточная их экскреция, равная 0,95 г. Таким образом, наиболее полное выявление ЛНП в моче имело место при рН мочи, равном 4,1-4,6.

П р и м е р 4. Обследуемый М. На- рушени я экскреторной функции почек не выявлено. Исследование мочи производилось 30.05.84 г. Суточный диурез 1 л мочи. Белок в моче отсутст- вует. Исходное рН мочи 6,93.

В табл.4 представлены данные определения ЛНП в моче обследуемого М. в зависимости от градиента рН мочи, создаваемых согласно предлагаемому способу. Установлено, что при отсутствии нарушения экскреторной функции почек и белка в моче ЛНП в ней не обнаруживается при показаниях рН 4,1-4,6.

Пример5. У больного гломер- улонефритом В. относительный процент глобулинов 51%, из них бета-глобулинов 10%, суточная экскреция ЛНП 15,4 г.

Примерб. У больного гломер- улонефритом Е. относительный процент глобулинов 52%, из них бета-глобулинов 12%, суточная экскреция ЛНП 0,95 г.

Согласно известному способу точность -определения крупнодисперсных белков плазмы и, в частности, относящихся к |Ь -фракции глобулинов составляет 50%, а согласно предлагаемому способу точность повышается до 95-98%.

Формула изобретения

Способ диагностики нефротического синдрома путем фотометрического исследования мочи при 597 нм, о т л и- чающ ийся тем, что, с целью повышения точности способа, в моче определяют липопротеиды низкой плотности, при этом пробу обрабатывают раствором соляной кислоты, доводят рН мочи до 4,1-4,6, далее обрабатывают хлористым кальцием и гепарином и по появлению липопротеидов низкой

плотности.диагностируют нефротичес- кий синдром.

Таблица 1

Таблица4

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и нефрологии. Цель изобретения - повышение точности способа. Для этого у пациента исследуют мочу фотометрическим методом при красном светофильтре с длиной волны 597 нм, предварительно обработав пробу мочи 0,025 М раствором КС1. Измеряют оптическую плотность раствора (Ej). Пробу обрабатывают раствором НС 1 , доводя рН мочи до 4,1-4,6. Затем добавляют 1 %-ный раствор гепарина (1000 МЕ/мл), повторно измеряют оптическую плотность (Ej). По разности Е ( - Ej определяют липо- протеиды низкой плотности-(ЛНП). При появлении ЛНП диагностируют нефроти- ческий синдром. 4 табл.