Способ диагностики стирольной интоксикации Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медигцине, в частности к профессиональной патологии, конкретно к токсикологии хими- ческими веществами.

Целью изобретения является диагностика на доклинических стадиях за счет нанесения сыворотки крови на культуру клеток и культивирования в течение 4-5 дней.

Способ осуществляется следующим образом.

Материалом для изучения токсического действия стирола служит сьторот- ка крови исследуемых лиц. Кровь забнобследование на профосмотре спустя 7 ч от начала работы. Проводилось взятие крови из локтевой вены в асептических условиях в количестве 3 мл

5 в стерильную пробирку без консерванта. Пробирка с кровью центрифугировалась со скоростью 3000 об/мин в течение 10 мин. Сыворотка отсасывалась стерильной пипеткой и в количестве

0,2 мл вносилась в культуру амниоти- ческих клеток (это минимальное количество сыворотки, которое при наличии токсических веществ может вызвать изменение в клетках). Затем сыворотрают из локтевой вены в асепп ческих ку удаляли и клетки заливали питаусловиях, помещают в стерильные про-тельной средой 199 в количестве 1мл.

бирки без консерванта. Если обследу-Пробирки помещали з наклонном положеются работницы цеха по синтезу стиро-нии в термостат при 37 С и культиви- ла, забор следует производить через

20

7 ч после начала работы. Пробирки с кровью центрифугируют со скоростью 3000-3600 об/мин в течение 10-15 мин;. Сыворотку отсасьшают стерильными пипетками и вносят в пробирку с культурой клеток. Каждую пробу исследуют на четырех пробирках. Используют однодневную культуру амниотических клеток. В каждую пробирку с культурой. клеток вносят 0,2-0,3 мл сыворотки крови, оставляют в контакте в тече ние 1,5-2 ч при 18-20 С,затем сыворотку удаляют и клетки доливают питательной средой 199 в количестве 1- 1,5 мл, пробирки помещают в наклонном

25

ровали в течение 4 дней. В течение этого времени наблюдалось повреждение клеток или полная их гибель. Ежедневно проводился учет цитотоксического действия сыворотки крови, для чего клетки, выращенные на стенках пробирок 5 рассматривали под микроскопом и степень деградации клеточного монослоя оценивали в баллах.

В качестве контроля использована кровь из локтевой вены донора В., - года 5не имеющего комтакта со стиролом. Обследование проводилось по описанной методике, изменений в культуре клеток не отмечалось.

Предлагаемый способ относительно прост, доступен, характеризуется значительной быстрой в проведении исследования. При его гдспользовании не требуется дорогостоящего и громоздкого оборудовайико Кроме того, на этой модели можно выявить глубину и направленность патологического про- цесса - изменений в ядре, в хромосомном аппарате клетки. Способ позволяет выявить степень нарушения дез- 45 интоксикационной функции печени, так как стирол метабслизируется в печени до нетоксичных соединений.

положении в термостат при 37-37,5 С. Ежедневно в течение 4-5 дней проводят учет цитотоксического действия сыворотки по степени деградации клеточного монослоя, С этой целью клетки, выращенные на стенках пробирок,, просматривают под микроскопом с малым увеличением, сравнивая с контрольными. В качестве контроля берут сыворотку здоровых людей, не имеющих контакта с химическими веществами (доноры).

Специфическую дегенерацию отмечаю по четырех балльной системе: 1 балл дегенерация 1/4 клеток слоя поля зрения; 2 .балла - 1/2 клеток слоя; 3 балла - 3/4 клеток слоя; 4 балла дегенерация всех кле.хок. Дегенерация выражается в сморщивании клеток уменьшении ядра измененных киктуров клеток, гибели их, замедлении роста.

Пример. Больная С,, аппаратчица цеха по синтезу стирола, сталс работы 2 года, страдает бесплодием.

обследование на профосмотре спустя 7 ч от начала работы. Проводилось взятие крови из локтевой вены в асептических условиях в количестве 3 мл

в стерильную пробирку без консерванта. Пробирка с кровью центрифугировалась со скоростью 3000 об/мин в течение 10 мин. Сыворотка отсасывалась стерильной пипеткой и в количестве

0,2 мл вносилась в культуру амниоти- ческих клеток (это минимальное количество сыворотки, которое при наличии токсических веществ может вызвать изменение в клетках). Затем сыворотку удаляли и клетки заливали пита-нии в термостат при 37 С и культиви-

20

. й. м

25

т - ,

ровали в течение 4 дней. В течение этого времени наблюдалось повреждение клеток или полная их гибель. Ежедневно проводился учет цитотоксического действия сыворотки крови, для чего клетки, выращенные на стенках пробирок 5 рассматривали под микроскопом и степень деградации клеточного монослоя оценивали в баллах.

В качестве контроля использована кровь из локтевой вены донора В., года 5не имеющего комтакта со стиролом. Обследование проводилось по описанной методике, изменений в культуре клеток не отмечалось.

Предлагаемый способ относительно прост, доступен, характеризуется значительной быстрой в проведении исследования. При его гдспользовании не требуется дорогостоящего и громоздкого оборудовайико Кроме того, на этой модели можно выявить глубину и направленность патологического про- цесса - изменений в ядре, в хромосомном аппарате клетки. Способ позволяет выявить степень нарушения дез- 45 интоксикационной функции печени, так как стирол метабслизируется в печени до нетоксичных соединений.

Предлагаемый способ имеет преимущественно по сравнению с известными методами токсикологических исследований, на животных. Он дает возможность быстрого получения ориентировочных результатов по токсическому воздействию некоторых химических веществ на живую . Кроме того, он позволяет дать предвауктс-льн то оценку степени токсичности некоторых веществ, в частности органических соединений

40

50

55

313

ненасыщенных углеводородов. Вещества этой группы плохо растворяются в воде, при стерилизации (кипячение, рентгеновское излучение и др.) поли- меризуются, и поэтому наиболее цела- сообразно проводить исследования сыворотки крови, в которой стирол растворяется в 84 раза лучше, чем в воде, а кровь обладает актерицидны- ми свойствами, и ее не надо подвер- гать стерилизации. Способ может найти применение для решения целого ряда вопросов по изучению механизма действия химических веществ на живую клетку. В связи с этим перспективным является его внедрение в практику изучения токсичности химических соединений плохо растворимых в воде и изменяющих свою структуру по стерилизации.

Клинические испытания способа проведены на 45 больных.

Результаты исследования приведены в табл. 1 и 2.

Что касается режима культивирова- ния, то согласно биологической закономерности созревания культуры клеточного монослоя она является наиболее пригодной для опыта в качественПримечание. В результате дисперсионного анализа, который был применен для овравот- ки пол}гченных результатов, установлено существенное влияние стажа ре- . боты на изменение.в культуре ткани, уровень значимости «t равен 0.0001Я, т.е. ок 0,01.

974

ном и количественном отношении с 3-А-дневного возрас та.

Действующая доза токсического вещества сыворотки крови работниц сти- рольного производства обычно вызывает дегенерацию клеток через 24-36 ч в последующем происходит нарастание дегенеративного процесса прямо пропорционально концентрации токсического вещества, 4 и 5-й дни наблюдения позволяют выявить пороговую и недействующую концентрации.

Таким образом, указанные параметры являются наиболее инфррмативными.

Формула изобретения

Способ диагностики стирольной интоксикации путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью диагностики на доклинических стадиях, исследованию подвергают сывйротку крови, наносят ее на культуру клеток, культивируют в течение 4-5 дней и по наличию патологического изменения клеток моносло диагностируют стирольную интоксикацию.

Таблица J

Прям ч «вне. В результате дисперсионного анализа установлено влияние воэрасга работниц на изменения в культуре ткаин. Уровень значимостиrf- 0s0036j т.е. 01.0,01. Возраст работниц находится в прямой зависимостя от стажа работы (r-tOjee).

Тавяипа2