Способ иммунизации бактериальными препаратами,содержащими эндотоксин Советский патент 1987 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к медицине, а точнее к микробиологии и может быт использовано для получения антибактериальных сьгоороток, не содержащих аутоантител, в частности антител к нативной ДНК.

Целью изобретения являetcя снижение токсических-свойств бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин.

Способ осуществляется следующим образом.

Коклюиньй гамма-глобулин (титр в реакции агглютинации :64 т) выделяют из ослиной стандартной коклюшной сыворотки серии 143, полученной путем спиртового осаждения на холоду. Полученный таким образом коклюшный гамма-глобулин вводят подкожно белым беспородным мьшам массой 16-18 г в разведении 1:25. Через 4 ч мышей иммунизируют внутримышечно коклюшными бактериями в дозе 1x10 м.г., другую группу - S-брюшно-тифозными бактериями в дозе 1x10 М.Т., третью группу мышей - эндотоксином E.coli

в дозе 50 мкг. I

Три контрольные группы животных

иммунизируют теми же бактериальными препаратами, но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. Каждая группа животных состояла из 10 мьштей. Кровь дли анализа забирают общепринятым методом на сутки после иммунизации, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин, адсорбируют 50%-ными формалини- зированными эритроцитами барана и прогревают при в течение 30 мин Затем с обработанной таким образом сывороткой ставят РПГА с эритроцитами, сенсибилизированными формализи- рованлой ДНК с последующим торможением формилинизированной и нативной ДНК для дифс})еренциации антител к нуклеиновым кислотам. Иммунизация животных коклюшными, брюшно-тифозными бактериями и эндотоксином E.coli без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в 100% случаях приводит к появлению в сыворотке крови экспериментальных животных антител к нуклеиновым кислотам, причем эти антитела в 68-90% случаях специфически реагируют с нативной ДНК. Предварительное введение коклюшного гамма- глобулина перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержагдими

5

0

5

0 c 0 5 0

эндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотам, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК, в сыворотке крови экспериментальных животных не обнаружены.

Пример I. Перед введением бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, в организм мышей подкожно вводят коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:5, затем 1-ю группу животных иммунизировали коклюшной вакциной, 2-ю группу животных - брюшно-тифозной вакциной, 3-ю группу - эндотоксином E.coli. Контрольными группами являлись животные, иммунизированные бактериальными прена- ратами без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. Полученные результаты приведены в табл.1.

Антитела к ДНК определяли на 14-е сутки в РПГА. Как видно из табл.1, предварительное введение коклюшного гамма-глобулина в организм животных перед иммунизацией бактериальными препаратами в разведении 1:5 приводит к значительному, снилсению уровня антител к ДНК в сыворотке крови опыт нык мьшгей, а антитела, специфически реагируюш;ие с нативной ДНК, в этих сыворотках практически не выявлены.

Пример 2.Перед введением бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, в организм мьш1ей подкожно ввели кокльэшный гамма-глобулин в разведении 1:25 и объеме 0,2 мл. Через 14 сут в сыворотке крови животных определяли антитела к ДНК. Контрольные группы животных иммунизировали бактериальными препаратами без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина.

Результаты исследования свидетельствуют о том, что предварительное введение в организм коклюпгного гамма-глобулина в разведении I:25 перед иммунизацией бактериальнььчи препар.а- тами приводит к снижению их токсических свойств. В сыворотке крови экспериментальных животных антитела к нативной ДНК не обнаружены.

Пример 3. Перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, мышам подкожно вводили коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:125. Затем на 14-е сутки исследовали сыворотку крови мьшшй в .

РПГА на наличие антител к ДНК. Результаты приведены в табл.2.

Как .видно из табл.2, введение коклюшного гамма-глобулина в разведении 1:125 не приводит к выраженному снижению токсических свойств бактериальных препаратов. В сыворотке крови иммунизированных животных обнаружены в 20-35% случаях антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК.

Таким образом, коклюшньш гамма- глобулин снижает токсические свойства бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, и используемых для получения антибактериальных сывороток, в пределах от цельного препарата до разведения его 1:5 - 1:25. Использование гамма-глобулина в максимальной дозе (цельньй) считается неэкономичным ввиду повышенного его расхода, что влечет лишние затраты.

Формула изобретения

Способ иммунизации бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, путем их внутримышечного введения, отличающийс я тем, что, с целью снижения токсических свойств бактериальных препаратов, перед иммунизацией в организм подкожно вводят 1СОКЛЮШНЫЙ гамма-глобулин

в разведении 1:5 - 1:25 в обьеме 0,2 мл, выделенный из ослиной стандартной коклюшной сыворотки и соответствующий ее исходному титру. , Таблица 1

Таблица 2

Изобретение относится к медицине, точнее к микробиологии, предназначено для получения антибактериальных сывороток, не содержащих ау- тоантител, в частности антител к на- тивной ДНК. Цель изобретения - сниже ние токсических свойств бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин. Для этого коклюшный гамма-глобулин в реакции агглютинации 1:64 т) выделяют из ослиной стандартной коклюшной сыворотки серии 143, полученной путем спиртового осаждения на холоду. Препарат вводят подкожно б елым беспородным мьшам в разведении 1:25. Через 4 ч мышей иммунизируют внутримышечно коклюшными бактериями в дозе микробных тел (м.т.) , другую группу - S-брюшно-ти- фозными бактериями в дозе I-IO м.т., третью группу мьш1ей - эндотоксином E.coli в дозе 50 мг. 3 контрольные группы животных иммунизируют аналогично, но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. На 14-е сутки после иммунизации проводят анализ крови, центрифугируют при 5000 об/мин, адсорбируют 50%-ными формалинизированными эритроцитами барана, подогревают при 56 С 30 мин. Иммунизация животных бактериями и эндотоксином E.coli без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в 100% случаях приводит к появлению в сывороТке крови животных антител к нуклеиновым кислотам, причем зти антитела специфически реагируют с нативной ДНК. Введение предварительно коклюшного гамма-глобулина перед иммунизацией бaктepиaJiьными препаратами, содержащими эндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотам, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК в сыворотке крови животных не обнаружены. 2 табл. а S (Л