Способ получения экстрактов из тушек животных,обладающих противоязвенной,инсулиноподобной,антилипидической и способствующей усвоению питания активностью Советский патент 1987 года по МПК A61K35/60 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической промышленности .

Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта за счет испопьзования в качестве сырья животных, имеющих раковину или пан- 1щрь, с последующим нагреванием неразмельченного сырья.

Способ осуществляется следуюп им образом.

Непереработанную сырую рыбу или животнык, имеющих раковину или панцирь, нагревают до УЗ-ВО С для полной деактивагщи энзимов автолиза, до бавляют Bacillus subtilis, произво- протеиназу при 50-60 С и рН 6,0-7,0 для разложения протеинов до стадии протеозоза при температуре не ниже для полной дезактивахщи

Bacillus subtilis, а затем добавляют грибок вида Koji, производящий протеиназу при 40-50 С и рН 6,0-7,0 смесь выдерживают в течение 1-3 ч для более полного разложения на

пептидные аминокислоты, каждая из которых имеет молекулярный вес менее 3000, Затем повышают температуру до до полной дезактивации грибка Коji с последующим отделением и концентрированием полученного продукта.

Пример 1, Цельные тущки макрели в количестве 4 т без предварительной обработки загружают в реак- ционную емкость, оснащенную переме- щивающим устройством, вместе с 4 т воды и содержимое реакционной емкости нагревают до 80°С. Спустя 15 мин темпаратуру снижают до 50°С и добав- ляют 4 кг бацилл вида Bacillus subtilis, производящих протеиназу, содер- хсимое реакционно емкости подвергают реакции при рН 6,0 в течение 1,5ч Далее температуру содержимого реак- ционной емкости повьшшют до и вьщерживают на этом уровне 15 мин, а затем охлаждают до 40 С, при этом до .бавляют 2 кг грибков вида Koji, производящих протеиназу, содержимое ре- акционной емкости вьщерживают при этой температуре 3 ч при рН 6,0. Далее содержимое реакционной емкости нагревают снова до 80°С для дезактивации протеиназы. Полученный продукт реакции отделяют с помощью центробежного сепаратора (центрифуги) с получением слоя экстракта, слоя масла и слоя остатка, содержащего кусочки

костей и непрореагировавгаие материалы. Слой экстракта фильтруют и концентрируют при пониженном давлении и температуре . Экстракт макрели подвергают анализу. Он содержит %: вода 35,4; полупродукты протеина 57,4; полупродукты жиров 0,4; карбо- гидраты 0,5; зола 6,3, и характеризуется калорийной способностью 235 кал/ Хроматографический анализ этого продукта показал, что молекулярные массы имеют три пика 2500, 1300, 760, это указывает на то, что молекулярная масса аминокислотных компонентов существенно меньще 3000. Композиция из сгруппированных аминокислотных компонентов представлена в табл.1.

Пример 2. Целые тушки рыб и животных, имеющих раковину или панцирь, таких как сардины, устрицы, каракатицы, жемчужницы, скумбрия или желтохвост (Seriola quinqueradiata) загружают в количестве 4 т в реак- и;ионную емкость вместе с 4 т воды, после чего повьшгают температуру до для полной дезактиватдаи энзимов автолиза и для удаления рыбного запаха . Спустя 15 мин температуру снижают до 60 с и добавляют 4 кг ба1Ц1лл вида Bacillus subtilis, производящих протеиназу, и содерш мое реакгщ- онной емкости подвергают реакции при рН 7,0, вьщерживая 1,5 ч. Затем температуру содержимого реакционной емкости повьтшают до 80°С, выдерживают 15 мин с последующим охлаждением до и добавляют 2 кг грибка вида Koji, производящего протеиназу, выдерживая содержимое реакционной емкости при этой температуре в течение 1 ч при рН 7,0. Далее температуру вновь повышают до 80°С и центрифугируют с получением в результате слоя экстракта, слоя масла и слоя остатка, содержащего кусочки костей или непрореагировавшие материалы. Слой экстракта отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении и температуре .

В табл. 1 представлено содержание аминокислот в экстракте, полученном из тушек рыб или животных, имеющих раковину или панцирь, по примерам 1 и 2; в табл. 2 - результаты анализа различных экстрактов, полученнь х по примеру 2.

Экстракт из тущек желтохвоста и скумбрии имеет аминокислотньп состав

подобньш составу экстракта из макрели.

Экстракт из тушек жем гужницы характеризуется количеством энергии 152 ккал на 100 г, экстракт из тушек устриц - 225 ккал на 100 г.

Данный способ получения экстракта дает возможность получитг более чистый препарат за счет полной дезактивации протеиназы. Экстракты, полу- ченные предложенным способом из рыб и животных, имеющих раковину или панцирь, содержат много пептидных и свободных аминокислот, характеризуемых величиной молекулярной массы менее 3000, которые обладают также различными фармацевтическими функциями - инсулиноподобной, противоязвенной, антилипидической и способствующей усвоению питания.

Функция балансирования питания, Экстракт из макрепи, полученный по. примеру 1, подвергают 30-кpaтнo ry разбавлению водой, 10 см разбавленного экстракта вводят свиньям каждый день после прекращения кормления материнским молоком путем добавления этого раствора в пищу. После кормления в течение 6 мес. свиней умерщв- ляли и сравнивали со свиньями, которым не давали экстракт.

Результаты анатомических исследований следующие. Легкие у свиней, которьм давали экстракт, имеют чис- тую окраску и не имеют локальных поражений. Внешние стенки сердца не имеют налипшего слоя жира. Печень не имеет локальных поражений или от деленных частей, имеет коричневый цвет. Небольшое количество жиров окружает большие и малые кишки. Мясо свиней, которым давали экстракт, имеет хороший внешний вид и плотнуро массу с соответствуюш м количеством жи ров. Мясо свиней, которым давали экстракт, плотное и имеет хорош; ю текстуру и цвет. Жир таклсе имеет хороший цвет.

При сравнении с обычными свиньями которым не давали .экстракт, были об- наруткены четкие различия в количестве жиров, прилипших к органам (коли- чество жиров бьпто уменьшено) j кроме того, различие заключалось в том, что не было обнаружено заболеваний или отделенных частей.

O f 0

5

0

5

0

5

Противоязвенная функция.

Противоязвенная функция экстракта, полученного из макрели, была испытана применительно к язве Shay, которая является одной из моделей образования язвы. Для этих анализов использовали крыс. Впияние дозировки экстракта на секрецию желудочного сока исследовали по методу пилорической лигации.

Метод испытаний.

Противоязвенная функция (пилори-. ческая Лигационная язва) .

Самцов крыс породы Wistar весом 150-200 г привязывают на 24 ч, затем их пилорические области подвергают лигации в соответствии с методом, разработанным Shay, при применении эфирного наркоза. После того как крыс вьщерживают в течение 12 ч без какой- либо пищи и воды, желудки крыс удаляли, язвы проявлялись во фронтальной области желудка и оценивались по шкале для язв в соответствии с методом, предложенным -S Namuri et al., Res. Lab, 29, 85, 1970,

Каждой из обработанных крыс вводят 500 мг/кг животного веса экстракта, полученного из макре-ли, растворенного в воде, ввод осуществляют через рот за 1 ч до пилорической лигации.

Активность по ингибированию секреции желудочного сока.

Эта активность была определена в соответствии с методом, описанным H.Shay et al. Gastroenterology, 5, 43, 1945. Этот метод заключается в следующем: самцов крыс породы Wistar привязывают на 48 ч и затем их пилорические области подвергают лигации. Спустя 4 ч из жалудка отбирают желудочный сок и измеряют объем желудочного сока, общий, выход кислоты и рбщь ю пептическую активность.

Обш;ий выход кислоты бьт определен путем титрования 0,02 н.МаОН с использованием фенолфталеина в качестве индикатора, общая пептическая (пищеварительная, пепсиновая) активность была определена в соответствии с методом M.L.Anson, I,Gen. Phisiol, 29. 79, 1938 при использовании казеина в качестве основного материала. Каждой из исследуемых крыс вводят экстракт через рот за 1 ч до пилоричес-- кой лигации.

Результаты испытаний представлены в табл, 2. Как видно из данных, пред513

ставленных в табл. 3, значительные различия в ингибировании объема желудочной кислоты и общем выходе кислоты говорят о том, что есть тенденция к образованию язвы, когда экст- ракт, полученный из макрели, в соответствии со способом вводится в количестве 500 мг/кг живого веса.

Функцияi подобная инсулину.

Инсулиноподобную функцию экстрак- та из макрели, приготовленного по примеру 1, испытывали с использованием в качестве индекса эффекта экстракта макрели на липолиз свободных жировых клеток, вызванный адренали- ном.

Метод испытаний.

Из организма крыс извлекают жировые клетки и обрабатывают их колле- геназой, их используют для изучения эффекта ингибирования эмиссии свобод- ных кислот жирного ряда из жировых клеток, вызванной липолизом вследствие присутствия адреналина. Полученные результаты испытаний представлены на чертеже.

Результаты испытаний.

Как показано на чертеже 5,5ju.Eq/g свободных жирных кислот изолируется после того, как к ним добавили 1 мг/мл адреналина. Количество изолированных свободных жирных кислот снижается до 2,3 fiEq/g, когда к ним добавляют 1 mlU/ml инсулина.

Когда экстракт, полученный из макрели, используют вместо инсулина, наблюдается заметный эффект ингибирования отделения свободных жирных кис- .лот в тех случаях, когда концентрация экстракта из макрели, присутствующего в исследуемой системе, увеличивается до 500 мг/мл.

Из данных, приведенных на чертеже.

следует, что экстракт макрели, полученный с помощью предлагаемого способа, характеризуется функцией, подобной инсулину, и может быть использован в качестве эффективного лекарственного г 1епарата для лечения диабета.

Функция снижения холестерина.

Экстракт, полученнъй из макрели по примеру 1, использовали для сни- жения содержания холестерина в крови или для лечения незначительных расстройств печени, вызванных употреблением жирной пищи.

5

0 . -

0

5

0

5

0

836

Метод испытаний.

Прованское (салатное) масло нагревали до 170-180 С в течение 2 ч при одновременном барботировании через него кислорода, в результате образовывались перокисленные жиры. Перемешанная пища была получена путем смешения порошкообразных пищевых материалов, содержащих холат холестерина натрия с прованским (салатным) маслом, содержащим перокисленные жиры, и ее использовали для кормления: группы крыс. Спустя 5 недель крысы имели высокое содержание холестерина и незначительные поражения печени,

Одной из групп крыс давали экстракт, полученньй из макрели, с тем, чтобы исследовать гематологически функцию экстракта по снижению содержания холестерина. Внутренние органы крыс исследовали с точки зрения паталогически-морфологических изменений. Экстракт вводили крысе один раз в день через рот.

Результаты испытаний представлены в табл. 4 и 5. Как видно из табл. 4 и 5, значительный эффект снижения свободных жирных кислот, образовавшихся из пищевых жиров приводящих к заболеванию, связанному с высоким содержанием холестерина, имеет место в тех случаях, когда производится добавле-т ние 500 мг/кг живого веса экстракта, произведенного из макрели.

Выпи проведены эксперименты с различными экстрактами рыб, моллюсков и ракообразных. Результаты показали, что экстракты содержат те же аминокислоты, что и экстракт макрели. Таким образом, эти экстракты характеризуются такими же фармацевтическими функциями.

Формула изобретения

Способ получения экстрактов из тушек животных, обладаюш 1х противоязвенной, инсулиноподобной, антилипиди- ческой и способствующей усвоению питания активностью, путем нагревания тушек в воде, ферментной обработки с последующим отделением полученного экстракта центрифугированием, фильтрованием и концентрированием продукта, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения чистоты целевого про7 1308t838

дукта, в качестве сьтрья используютси бациллы вида Bacillus sub til is

тушки макрели, сардин, устриц, кара-.при ЗО-бО С и рН 6,0-7,0, затем грикатиц, жемчужниц, скумбрии и желто-бок вида Koji при 40-50 С и том же

хвоста (Seriola quinqueradiata), арН и вьщерживают в течение 1-3 ч с

нагревание неразмельченного сырья5 последующим повьппением температуры

.проводят до 75-80 С, добавляют к сме-до 80 С.

Определяли по методу окисления надмуравьиной кислоты.

Таблица 1

Контроль 0,2% карбо- ксиметил- целлкхпоза

Зава-экстракт

Сульфат атропина

500

10

83,18±0,55 4,24tO,36 470,8142,5 217,7138,2

82,63+0,46 2,75tO,5(..9t7 6,1 157,3+43,6

В0,0010,00 0,62tO, 43,7t17,,6t7,

р 0,, р :0,005; Ар «СО,001.

Таблица 2

Таблица 3

jubfme . ImYoime

100 т 900 500

Изобретение относится к фарма- цевтическор промьшшенности. Для повышения чистоты целевого продукта непереработанную сырую рыбу или животных, имеющих раковину или панцирь, нагревают до 75-80°С для полной дезактивации энзимов автолиза, добавляют бациллы вида Bacillus sub til is, производящие протеиназу при 50-60 С и рН 6,0-7,0, затем вносят грибок вида Koji, производящий протеиназу при температуре 40-50 0 и рН 6,0-7,0. Смесь вьщерживают 1-3 ч для полного разложения на пептидные аминокислоты, каждая из которых имеет м.в. менее 3000. Затем повьшают температуру до 80 С до полной дезактивации грибка Koj i с последующим отделением и концентрированием полученного продукта. 4 та бл. i W с/о о 00 оо со ы