Способ количественного определения гиббереллинов Советский патент 1960 года по МПК G01N21/79 C05G3/00 

Гиббереллины - мощные стимуляторы роста и развития растений - находят все более широкое применение в практике сельского хозяйства. Применение гиббереллинов обеспечивает высокие прибавки урожая на винограде, томатах, цитрусовых и других высокоценных культурах. Известны биологические, хроматографические и флуорометрические методы количественного определения гиббереллинов.

Найден новый способ количественного определения гиббереллинов, заключающийся в том, что, с целью повыщения точности анализа, о содержании гиббереллинов в исходном веществе судят по интенсивности окраска их с фосфорно-вольфрамо-молибденовым комплексом, которая фиксируется колориметрическим методом.

Сущность описанного метода состоит в том, что в сильно солянокислой среде разведенные растворы гибберелловой кислоты дают характерное зеленое окрашивание с фосфорно-вольфрамо-молибденовым комплексом (фенольный реактив Фолина-Чиокальто); последний был ранее предложен для определения аминокислот тирозина и триптофана. Интенсивность окращивания прямо пропорциональна концентрации гибберелловой кислоты, что указывает на возможность ее количественного определения.

Испытанные в отдельности фосфорно-вольфрамовый, фосфорно-молибденовый и вольфрамово-молибденовый компоненты реактива не дали окращивания е гибберелловой кислотой. Без добавления концентрированной соляной кислоты или при добавлении соляной кислоты, разведелной вдвое, зеленая окраска не развивается; не идет реакция и в щелочной среде, как это имеет место при определении фенольнь х соединений и выщеупомянутых аминокислот с реактивом Фолииа.

Приготовление реактива. Смесь, состоящую из 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия, 700 мл дистиллированной воды, 50 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл концент№ 131133

рированной солядой кислоты, кипятят с обратным холодильником в течение 10 час, дают ей остыть и доводят водой до 1 л. Реактив вначале желтый, но мере кипячения становится оливково-зеленоватым (окраска реактива в значительной степени зависит от чистоты исходных реактивов, особенно фосфорной кислоты). Для определения гибберелловой кислоты можно использовать и зеленоватый реактив, в этом случае контрольное определение с водой будет иметь светло-желтовато-зеленую окраску; реактив желтого цвета дает с водой зелегювато-желтую окраску.

Ход определения. К 1,0 мл исследуемого раствора прибавляют 0,5 мл реактива Фолина, затем после тщательного перемешивания прибавляют 2,5 мл концентрированной соляной кислоты и смесь вновь перемешивают; время начала реакции отмечается с момента приливания реактива Фолина. Постепенно развивается зеленая окраска, которая измеряется точно через 15 мин на электрофотоколориметре с красным светофильтром в кюветах шириной 10 мм. В контрольное определение вместо исследуемого раствора приливают равный объем воды; контроль берется в двойном количестве по сравнению с опытом (2,0 мл воды + + 1,0 М.Л реактива Фолина -1-5 мл концентрированной соляной кислоты). Описанный метод дает возможность определить от 10 до 200 гиб берелловой кислоты в 1 мл исследуемого раствора (в кюветах шириной 10 мм. Лучше работать с концентрациями 10-80 Мл так как в этих пределах получаемая экстинция укладывается в размеры шкалы правого барабана электрофотоколориметра. Концентрации выше 80 т 1мл дают интенсивную изумрудно-зеленую окраску, которая промеряется лишь на левом барабане прибора. Концентрации ниже 10-;/лгуг уже не вполне соответствуют закону Ламберта-Бера.

Предмет изобретения

Способ количественного определения гиббереллинов, отл и ч а ющийся тем, что, с целью повышения точности анализа, о содержании гиббереллинов в исходном веществе судят по интенсивности окраски их. с фосфорно-вольфрамо-молибденовым комплексом, которая фиксируется колориметрическим методом.