Способ выявления факторов адгезии у бактерий рода @ Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/37 

113

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления этиологической значимости бактерий рода Proteus.

Цель изобретения - повышение специфичности способа.

Пример. Выращивание исследуемой культуры проводят на скошенном агаре, которьй готовят на основе бульона Хоттингера (рН 7,4-7,6) с добавлением к 98 мл бульона 1.,5 г промытого вымороженного дальневосточного агар-агара и 0,5 г дрожжевого экстракта. Выращивание проводят в течение 24 ч при ZS-aO C.

Для приготовления суспензии эритроцитов используют эритроциты цыпленка, из которых готовят 3%-ную взвесь на физиологическом растворе с добавлением 0,6% D-маннозы. Концентрация эритроцитов 250 млн/мл.

Постановка D-маннозорезистентной реакции гемагглютинации (ДМГ).

На чистое предметное стекло наносят по 0,05 мл суспензии эритроцитов И 0,05 мл суспензии исследуемой культуры протея с концентрацией 1 млрд/мл Осторожно перемешивают при комнатной температуре. По образованию агглюти- национных хлопьев в течение 1-2 мин судят о способности культур давать В-маннозорезистентную реакцию гемагглютинации.

Для определения степени адгезивной активности бактерий реакцию ДМГ ставят с культурой различной оптической плотности (1 млрд/мл - 250 тыс./мл) и результаты оценивают следующим образом. Наличие агглютинационных хлопьев при смешивании суспензии эритроцитов и культуры с оптической плотностью 1 млрд/мл - 25 млн/мл считается слабо положительной реакцией, 25 млн/мл - 15 млн/мл - положительной активности реакция, 15 млн/мл - 5 млн/мл - средней положительной активности реакция, 5 ыпн/ыл - 500 тыс./мл - высокой активности реакция. Отсутствие хлопьев свидетельствует об отрицательной реакции.

В качестве контролей проводят реакцию с интактной культурой и без культуры.

Изучают 112 штаммов протея, выделенные от больных с гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями, среди которых Pr.vulgaris 14, Рг. miraи

10

15

20

25

20982

bills 86, M.morgani 11 штаммов и Рг. stuartii 1 штамм.

Параллельно для сравнения с известным методом ставится D-маннозо- 5 резистентная реакция гемагглютинации с 3%-ной взвесью бычьих эритроцитов и с 3%-ной взвесью эритроцитов человека II группы крови.

Результаты опытов представлены в таблице.

Из таблицы видноJ что с помощью предлагаемого способа выявлено 32 штамма с положительной реакцией D-маннозорезистентной гемагглютинации, а по известному не выявлено ни одного такого штамма, что свидетельствует о более высокой специфичности пре;щагаемого способа.

Из выявленных 32 штаммов 18 обладают высокой, 7 средней, 6 положительной и 2 слабой активностями.

Специфичность способа подтверждается также следующими опытами.

Б одном из опытов получают сыворотки от кроликов, шестикратно иммунизированных внутривенно культурами протея с положительной реакцией D- маннозорезистентной гемагглютинации и с отрицательной -реакцией ДМГ и проверяют их действие на D-маннозо- резистентную гемагглютинацию. Установлено, что сыворотки, полученные от иммунизации культурой с положительной ДМГ, тормо зят реакцию D-маннозорезистентной гемагглютинации, а вторые не оказывают никакого действия на эту реакцию, что свидетельствует об антигенном характере фактора адгезии бактерий рода Proteus.

В другом опыте исследуют корреляцию свойств штаммов давать реакцию ДЖ с их способностью вызывать острую токсическую пневмонию у экспери-- ментальных животньсс, (мъш1И весом 1 7- 18 г). Устанавливают, что все исследованные 23 штамма протея, вызывающие острую токсическую пневмонию у животных, дают с эритроцитами цып- 5Q ленка, положительную реакцию ДМГ.

Применение для выявления адгезионных свойств бактерий рода Proteus эритроцитов цыпленка повьш1ает специфичность способа, дает возможность получить количественную характеристику адгезии, что позволяет достоверно определить этиологическую значимость бактерий рода Proteus в возникновении гнойно-септических и кишечных

30

35

40

45

55

заболеваний и проводить целенаправленную профилактику и лечение.

Формула изобретения

Способ выявления факторов адгезии 5 у бактерий рода Proteus путем выращивания исследуемой культуры на плотной питательной среде с последующей постаПримечание

-реакция полохнтельяая,

-реакция отрицательная.

новкой с ней D-маннозорезистентной реакции гемагглютинации с 3%-ной взвесью эритроцитов и учетом получен- ньк результатов, отличающий- с я тем, что, с целью повышения специфичности способа, реакцию гемагглютинации проводят с эритроцитами цьтленка.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения - повышение специфичности способа. Сущность способа сводится к тому, что исследуемую культуру протея выращивают на плотной питательной среде в течение 24 ч при 28-30 С. Для постановки реакции гемагглютинации используют 3%-ную взвесь эритроцитов цыпленка на физиологическом растворе с добавлением 0,6% D-маннозы. Полученную суспензию эритроцитов смешивают в равном соотношении с суспензией исследуемой культуры протея концентрацией 1 млрд/мл. По образованию агглютинационных хлопьев в течение 1-2 мин определяют способность культуры протея давать D-маннозорезис - тентную реакцию гемагглютинации, т.е. наличие факторов адгезии. 1 табл. (Л