Способ определения гетерогенных антигенов бактерий, сходных с группой АВО человека Советский патент 1987 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к медицине, преимущественно к медицинской микробиологии, и может быть исиользовано в бактериологических исследованиях, направленных на идентификацию бактерий.

Цель изобретения - упрощение способа и сокращение времени исследования.

Способ осуществляется следующим образом.

В 8-лунках нолистиро.човых пластин раститровывают в объеме 0,25 мл на основе 0,85%-ного (рН 7.2) раствора NaCl выращенную на минималыюй нктателы-юй среде, инактивированную нагреванием культуру бактерий, начиная с 1-го млрд взвеси в 1 мл. Затем во все лунки добавляют 0,25 мл известной антигрупповой (антиэритроцитар- ной) сыворотки в количестве 1,5-2 гемаг- глютинируюпдих доз (одна доза наиболь- щее разведение ci iBOpOTKH, вызываюп ее агглютинацию 5,0-7,5% взвеси эритроцитов человека соответствующей грунны крови - устанавливается неносредственно перед опытом). Смесь осторожно встряхивают и инкубируют ири комнатной температуре в течение 15 -20 мин. Затем во все лупки в объеме 0,25 мл вносят 5,0-7,5% взвеси от- в 0,85%-ноы (рН 7,2) растворе NaCl донорских эргггроцитов человека соответствующей группы крови. Пластины осторожно встряхивают. Учет реакции осуществляют через 20-30 мин. Лунки, где еще отсутствует гема1 1 чютинация, показывают в исследуемой ку;|ьтуре наличие гетерогенного антигена, а о его количестве судят по титру реакции, т. е. по наименьшему числу бактерий в лунке с отрицательной гемап лютинацией.

Контролями служат 9 н 10 лунки ряда, в которых к 0,5 мл 0,85%-ного (рН 7,2) раствора NaCl (9-я лунка - контроль эритроцитов) и опытной дозе сыворотки (0-я лунка контроль сыворотки) добавляют 0,25 мл 5,0-7,5% взвеси отмытых эритроцитов.

Пример. Три (oNW 231, 259 и 107) нп амма брюн1нотифозных бактерий, содержащих соответственно 0(1), А (И) и В(1И) изогемагглютиногеиы, выращивают на минимальной безбелковой синтетической среде (I). Вырос1ние бактерии инактивируют прогреванием, концентрируют центрифугированием до 1 млрд взвеси в 1,0 мл 0,85%-ного раствора NaCl с рН 7,2 (физиологический раствор). .Затем в объеме 0,25 мл взвесь раститровывают в 10 лупках нолистироловых пластин но 4 ряда (новторность оныта) на каждый режимный нараметр. Для определения А(11) и В (III) изогемагг;потиногенов иснользуют судебно-медицинские моноснеци- фические иммунные анти-А и В-сыворотки, а для 0(Н) антигена - лектин анти-Н, приготовленный из плодов бузины.

С целью изучения влинь1ня дозы сыворотки ноеледнюю в количестве 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 и 4,0 гемагглютипирующих доз в объе0

ме 0,25 мл добавляют к раститрованным взвесям бактерий. Пластины осторожно встряхивают и носле 30 мнн инкубации при комнатной темнературе во все лунки вносят

по 0,25 мл 5% взвеси соответствующих донорских эритроцитов, предварительно отмытых в физиологическом растворе. Учет реакции осуцд,ествляют через 15-20 мин. Титром реакции считают наименьщее количество бактерий во взвеси, где отсутствовала агглютинация эритроцитов.

Статистически достоверной разницы в колебаниях величин титров реакции для всех трех штаммов бактерий нри 1,5 и 2,0 гемаг- глютинирующих дозах сывороток выявить не

5 удалось (,05). При нарастании дозы сывороток с 2,5 до 4,0 значительно (,001) возрастали концентрации всех трех щтаммов бактерий, необходимые для выявления гетерогенных антигенов. Следовательно, оптимальными для постановки реак0 ции выявления гетерогенных антигенов являются дозы антиэритроцитарной сыворотки, равные 1,5-2,0 гемагглютинирующим единицам.

Предлагаемый снособ в отличие от известного является менее трудоемким (отпадают этапы центрифугирования взвеси бактерий после контакта с сывороткой и переноса на стекло канли каждого разведения сыворотки, нет необходимости соблюдения соответствующих условий контакта -

Q 37°С), сокращается время постановки реакции в 4 раза (по известному способу оно составляет 3,5-4,0 ч, а но предлагаемому - 50-60 мин.), уменьшается в 40-65 раз расход антиэритроцитарной сыворотки. Возможно но титрам реакции (по количеству

г бактерий в лунке) количественно характеризовать содержание гетерогенных антигенов у бактерий.

Кроме того, установлено, что в нря.мом агглютинационном тесте (РА) гетерогенные антигены определялись у 38,8%

0 изученных Н-1таммов бактерий, в реакции адсорбции снецифических изогемагглютини- нов РАСИГА - у 47,2% и но предлагаемому способу реакции нейтрализации изоге.маг- глютиннинов (РПИ) - у 52,7%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить эффективность определения гетерогенных антигенов по сравнению с РА и РАСИГА на 13,9 и 5,5% соот- ветствеино.

5

50

Формула изобретения

Снособ определения гетерогенных антигенов бактерий, сходных с группой АВО человека, заключающийся в выращивании бактерий, приготовлении их взвеси и добавлении соответствующей антиэритроцитарной сыворотки, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и сокращения времени исследования, к раститрованной смеси бактерий добавляют 1,5-2,0 гемагглютинирую313371024

щие дозы антиэритроцитарной сыворотки,щей группы эритроциты человека и по отсмесь инкубируют 15-20 мин при комнат-сутствию агглютинации определяют колиной температуре, добавляют соответствую-чество гетерогенных антигенов.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения - упрощение способа и сокращение времени исследования. В лунки добавляют культуру бактерий и антигрупповую сыворотку в количестве 1,5-2 гемагглютинирующих доз. Смесь инкубируют. В лунки вносят взвесь отмытых донорских эритроцитов и встряхивают. Через 20-30 мин учитывают реакцию. Лунки, где еще отсутствует гемагглютина- ция, показывают в исследуемой культуре наличие гетерогенного антигена, а о его количестве судят по титру реакции, то есть по наименьшему числу бактерий в лунке с отрицательной гемагглютинацией. со со