Способ оценки реакции гемагглютинации Советский патент 1987 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине н может быть использовано для быстро го обнаружения и идентификации микробных и немикробных антигенов, а также антител к ним.

Цель изобретен12я - ускорение и повьшение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Для оценки реакции гемагглютина- ijfm (РГА) и непрямой гемагглютина- ции (РИГА) применяют установку для получения спектра рассеянного света, которая состоит из фотооптической части, усилителя и анализатора спектра. В качестве источника излучения используют лазер ЛГ-38, луч от которого фокусируют линзами на исследуемом объеме (гелий-неоновый лазер с длиной волны 0,63 мкм). Рассеянный свет регистрируют под углом 10 фотометрической приставкой типа ФМЭЛ-1 После усиления сигнала усилителем типа 1У14 он поступает в анализатор спектра СК4-72 (ширина полосы обзора 50 Гц, ширина полосы пропускания филтра 0,25 Гц). Затем сцектр обрабатывают на ЭВМ Электроника ДЗ-28, при этом С высокой точностью определяют полуширину спектральной функции Г из формулы

L(3)

АГ

() + /5

где (f/2 - полуширина частотной характеристики фильтра анализатора по полувысоте; - центральная частота филь- ю

тра-,

А и Г - подгоночные параметры, Г - полуширина сггектральной

функции.

Пример 1. Обнаружение вирус- 45 ных антигенов при помощи РГА.

В качестве объекта исследования взяли аллантоисную жидкость куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа А (Свердловск) 7862/82-H3N2. 50 Реакцию ставили в лунках полистироловых пластин, где вируссодержащий материал двукратно разводили физиологическим раствором от 1:25 до 1:409600 в объеме 0,5 мл. Затем в gg каждую лунку добавляли по 0,5 мл 1%- ной взвеси куриных эритроцитов. После оседания эритроцитов в контроле (через 40. мин) результат реакции учиты0

5

0

0

5

0 g

вали общепринятым визуальным способом. Визуально положительная реакция регистрировалась до разведения 1:800.Измерение параметров спектра методом сое делали через 10 мин после постановки реакции, для этого брали по 0,1 мл пробы из каждой лунки и разбавляли 2 мл физиологического раствора. В тех образцах, где происходило склеивание эритроцитов, наблюдали сужение спектральных кривых вплоть до разведения 1:204800 (при этом Г PJ-/1 4, 7 to, 2), для разве- 5 дения 1:800 Г 3., 310,2). Для контрольного образца (эритроциты с физиологическим раствором) полуширина спектра бьша стабильной и,составляла Г 3 5,110,2.

П р-и м е р 2. Титрование специфических антител при помощи РИГА.

В качестве объекта исследования взяли псевдотуберкулезную антисыворотку. К 0,4 мл двукратных разведений сыворотки на физиологическом растворе (с 1:100 до 1:204800) добавляли по О,1 мл 1%-ной взвеси стандартного эритроцитарного псевдотуберкулезного диагностикума. Реакцию сопровождали контролем сыворотки (сыворотка в начальном разведении и нормальные эритроциты барана) и контролем диагностикума (сенсибилизированные эритроциты и физиологический раствор) , Визуальный учет результатов проводили после оседания эритроцитов в контролях (через 1,5-2 ч), а реакцию методом СОС начинали уже спустя 10 мин после постановки реакции. Титр РИГА при визуальном учете составил 1:12800, при учете методом СОС - 1:409600 (,6 1 О,2). Полуширина спектра для контрольных образцов оставалась на уровне ,2±0,2).

Как видно из обоих примеров, цель изобретения достигается тем, что чувствительность способа регистрации реакции методом СОС была существенно вьш1е, чем при оценке РГА и РИГА обычным визуальным способом. Кроме того, регистрация предлагаемым способом осуществляется значительно раньше (через 10-15 мин), чем при визуальном способе (через 1--2 ч). Таким образом, регистрация РГА и РИГА по изменению полуширины спектров рассеянного света методом СОС обеспечивает одновременно экспрессность учета и высокую его чувствительность.

Ь

31327004.

Формула изобретениявышения то чности способа, регистрацию

осуществляют в пучке когерентного изСпособ оценки реакции гемагглюти- лучения, измеряют полуширину спектра нации путем регистрации образования рассеянного света, при уменьшении ее гемагглютинатов, отличающий- по сравнению с контролем определяют - с я тем, что, с.целью ускорения и по- наличие гемагглютинатов.

Составитель В. Фролова Редактор М. Петрова Техред И.Попович Корректор Т. Колб

Заказ 3382/40Тираж 776Подписное

. ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.

Изобретение относится к микробиологии. Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа. Для получения спектра рассеянного света используют установку, состоящую из фотооптической части, усилителя и анализатора спектра. Луч от лазера фокусируют линзами на исследуемом объеме. Рассеянный свет регистрируют под углом 10. После усиления сигнала он поступает в анализатор спектра. Спектр обрабатывают на ЭВМ и определяют полуширину спектральной функции. i С/)