Способ диагностики ревматоидного артрита Советский патент 1987 года по МПК G01N33/533 

11327006

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам диагностики заболеваний, в частности ревматоидного артрита (РА).

Цель изобретения - повышение точности диагностики

Пример. Мононуклеарные клетки выделяют из 5 мл дефибринированной венозной крови центрифугировани- ю торые обладают,специфическ им мембран

ем на градиенте плотности фиколл- верографина (,077 г/см), содержащем 0,05% азида натрия, при 400 в течение 40 мин. После трех отмьшок средой 199 с последующим центрифугированием при 1000 об./мин в течение 5 мин клеточную взвесь (30 млн/мл) в объеме 0,05 мл (всего 1,5 млн.клеток) обрабатывают 1%-ным раствором параформальдегида в фосфатном буфере с рН 7,4 в течение 30 с. После этого вновь производят две отмывки, только уже забуференным физиологическим раствором (ЗФР). После отмывок клеточную взвесь (1,5 млн. кле- ток) в объеме О,05 мл инкубируют с равным объемом (0,05 мл) раствора мо ноклональных антител BL-DR (ГДР) к мономорфным детерминантам HLA-DR. После 60 мин инкубации на шейкере (200 цикл/мин) и последующих двух отмывок ЗФР клеточную взвесь обраба- тывают кроличьей антисывороткой против глобулинов мыши, меченной ФИТЦ, в объеме 0,05 мл в течение 60 мин на шейкере. После окончательных двух отмывок ЗФР с последуюй им центрифугированием при 1000 об,/мин в течение 5 мин клеточную взвесь переносят на предметное стекло для учета результатов. Для моноклональных антител BL-DR конечное разведение составило 1:40, а для кроличьей антисыворотки - 1:4. Учет HLA-DR - позитивных клеток

Редактор М. Петрова

Составитель В. Фролова Техред И.Попович

Заказ 3382/40Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. А/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул„ Проектная, 4

и измерение величины их свечения проводят на микроскопе-фотометре под масляной иммерсией при увеличении 6,3 X 63 с гЛпользовакием селективного для ФИТЦ блока фильтров 12.Идентифицируют 100 клеток по размерам и структуре в проходящем свете. Из числа клеток определяют клетки, ко

ным свечением или имеют флюоресцентные шапочки (в ультрафиолетовом режиме). Затем замеряют специфическое мембранное свечение единичного лим- фоцита в течение 0,25 с. Свечение всех 100 лимфоцитов отражают на гистограмме распределения свечения .клеток в диапазоне от О до 250 мА. Клетки с интенсивностью свечения свыше 150 мА говорят о наличии ревматоидного артрита, причем достаточно обнаружить хотя бы одну такую клетку.

Положительный эффект достигается за счет выявления неизвестного ранее для ревматоидного артрита маркера - количественного уровня свечения клеток, что позволяет поставить верный диагноз с достоверностью, близкой к 1.00%.

Формула изобретения

Способ диагностики ревмато- : идного артрита путем и 1мунофлуорес- центного определения HLA-DR антигена на лимфоцитах крови больного, о. т- личающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, определяют уровень свечения HLA-DR антигена на лимфоцитах и при величине его выше 150 мА диагностируют ревма- тоидньй артрит.

Корректор Т. Колб

Подписное

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики. Клеточную взвесь инкубируют с раствором моноклональ- ных антител к мономорфным детерминантам HLA-DR и обрабатывают кроличьей антисывороткой. После отмывания и центрифугирования клеточную взвесь на стекле исследуют под микроскопом фотометром. Наличие клеток с интенсивностью свечения свыше 150 мА подтверждает диагноз ревматоидного артрита. За счет использования маркера количественного уровня свечения клеток повьшается достоверность диагностики. Од г о о 05