Штамм бактерий BacILLUS Sp.,используемый для очистки сточных вод от оксалата Советский патент 1987 года по МПК C12N1/20 C02F3/34 C12N1/20 C12R1/07 C02F3/34 C02F101/30 

1331889

Изобретейие относится к микробиоогической промьппленности и касается ового штамма бактерий, который может ыть использован при биологической чистке сточных вод от оксалата.

Цель изобретения - штамм бактерий acillus sp.j способный к полному азложению оксалата при концентрации го в среде до 40 г/л и росту при емпературе до 41 С.

Штамм выделен из огородной почвы етодом накопительной культуры на инеральной среде следующего состаа, г/л:15 Аммоний щавелевокислый

КН2Р04

MgS04 7H O

12Н,0

46,86 3,0 6,0 0,05

Триосульфа .натрия 1,0 рН среды7,0

По 2 г почвы вносят в колбы объемом 250 мл, содержащие 50, мл среды, и вьщерживают при 28°С в течение 20 дней. Из тех колб, где происходит выделение аммиака, отбирают по 5 мл накопительной культуры и вносят в колбы со свежей средой. Культивирование проводят при 28°С на качалке (180 об/мин). Через 5 дней из колб, где наблюдают рост, потребление оксалата и вьзделение аммиака, делают пов- торньш пересев в колбы со свежей средой. Культивирование проводят в тех же условиях. Чистую культуру бактерий Bacillus -sp. ттамм ЛСМ-ОКС-1 выделяют из отдельной, наиболее быстрорастущей колонии, полученной путем рассева накопительной культуры на чашки с агаризованной минеральной средой с оксалатом аммония.

Штамм сохраняет жизнеспособность в течение трек лет при хранении под слоем минерального масла на агаризованной среде с оксалатом аммония и в лиофильно высушенном состоянии.

Штамм Bacillus sp ЛСМ-ОКС-1 депонирован Всесоюзной коллекцией микроорганизмов ИБФМ АН СССР под номером ВКМ В-1548Д и имеет следующие куль- турально-морфологические и физиолого- биохимические характеристики.

Клетки - одиночные, прямые, короткие палочки размером 1,63x0,92 - 1,21х хО,74 мкм, подвижные; движутся при помопщ перитрихально расположенных жгутиков. Грамположительные, Образуют эндоспоры.

20

25

30

35

40

45

50

55

н

5

0

5

0

5

0

5

0

5

На минеральной агаризованной среде с оксалатом колонии выпуклые гладкие, блестящие, с ровными краями, в центре светло ;;коричнавого цвета, по краям - прозрачные, 3-5 мм в диаметре. Пигмент в среду не выделяют.

На жидкой минеральной среде с оксалатом штамм растет, образуя муть, осадок, который при взбалтывании легко взмучивается. Пигмент в среду не выделяется.

Аэроб. Дает положительную оксидаз- ную реакцию, имеет каталазу. Ростна минеральной среде, содержащей окса- лат, ингибируется хлористым трифенил- тетразолием в конпентрации 0,02% и хлористым натрием в концентрации 5,0%. Растёт при , не растет при 9 и 41°С. Оптимальная температура для роста 28-35°С. Пределы рН для роста 6,8-9,0.

Ацетоин и индол не образует. Лакмусовое молоко не изменяет. Желатину не разжижает. Крахмал не гидролизует.

Отношение к источникам углерода: штамм является облигатным оксалотро- фом, т.е. использует в качестве источника углерода только оксалат. Этот вывод сделан на основании данных, полученных при изучении способности штамма использовать различные органические соединения в качестве единственного источника углерода. Проверено 65 соединений из группы Сахаров, спиртов, аминокислот, органических кислот. Ни одно из проверенных соединений, кроме оксалата, не обеспечивает рост штамма.

Штамм способен расти в среде, содержащей высокие концентрации оксалата, вплоть до насьщения, при этом разложение оксалата происходит в присутствии многих органических соединений.

Отношение к источникам азота: усваивает аммонийньш азот. Не усваивает нитритньй, нитратньй азот и мочевину.

Не нуждается в факторах роста. Не Цатогенен. Признаки штамма устойчивы.

Пример 1 о Разложение оксалата в условиях аэрации в колбах.

Культуру штамма Bacillus sp ВКМ В-1548Д, вьфащенную при 28°С в течение 3 сут на агаризованной среде следующего состава, г/л: ( (оксалат аммония) 10i NaHCOJ 9,8; NaH2P04-2H20 12,1j NaCl 0,7; KCIO.,57 MgCl2.-6H2,0 0,1; CaClo-6HtO 0,01;. тио 1331889

сульфат 1,6, петлей высевают в колбу

со во

емкостью 250 мл, содержащую 50 мл посевной среды того же состава. Колбу помещают на круговую качалку (180 об/мин). Посевной материал вьфа щивают в течение 30 ч при 28 С. Приготовленным посевным материалом в количестве 10 мл засевают колбы емкостью 500 мл, содержащие 90 мл среды того же состава. Выращивание культуры проводят на качалке (180 об/мин) при 28°С. Время полного разложения окса- лата в зависимости от его концентрации в среде приведено в табл.1.

Пример 2. Разложение оксалата в условиях аэрации в ферментере.

. Посевнвм материалом в количестве . 100 мл, приготовленным, как описано в примере 1,, засевают ферментер емко- стью 3,0 л, содержащий 900 мл среды. Режим культивирования: перемешивание --250 об/мин; аэрация - 1 л/л

среды, мин; температура . Время полного разложения оксалата в зависимости от концентрации его в среде приведено в табл.2.

П р и м е р 3. Разложение оксалата в условиях аэрации в ферментере при разных температурах.

Вьфащивание культуры проводят при различной температуре в Среде, содер жащей 7,1 г/л оксалат-иона. Остальные операции проводят так же, как в примере 2. Время полного разложения оксалата в зависимости от температуры выращивания приведено в табл.3.

Время полного

разложения 26-28 27-30 30-32 33-35. 36-38 40-42 43-45

оксалата, ч

Время полного

разложения 17-19 18-20 20-22 23-25 28-30 34-36 40-42

оксалата, ч

Q

о

5

0

5

Пример 4. Разложение юксалата, содержащегося в промьшшенных сточных водах.

Штамм выращивают на сточньпс водах гидролизного завода, содержащих следующие компоненты, г/л:

Редуцирующие вещества 1,2 Монокарбоновые кислоты (в пересчете на уксусную кислоту)2,0 Щавелевая кислота 7,0 Летучие кислоты 0,3 Азот 0,12 Фосфор 0,07 Сточную воду засевают посевным материалом в количестве 10%, полученным при вьфащивании штамма бактерий на качалке (180 об/мин) в течение 30 ч при 28°С в колбах объемом 250мл с 50 МП среды, следующего состава, г/л: NaHCOj 9,8j NaH2P04 2HjO 12,1; NaCl 0,7; KCl 0,57; MgClj-бН О 0,1; CaClj-SHjO 0,01; тиосульфат 1,6, ок- салат аммония 10. .

Культивирование осуществляют в колбах объемом 500 млj содержащих 100 мл сточной воды, на качалке (180 об/мин) при . В этих условиях штамм Bacillus sp ВКМ В-1548Д полностью разлагает 7,0 г/л оксалата . за 25 ч. Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-1248Д, используемый для очистки сточных вод от оксалата. Та б л и ц а 1

Время полного

разложения . 29-31 18-20 19-21 20-22 25-27 Нет роста

оксалата, ч

Редактор Н.Егорова

Составитель Л.Минеева

Техред В.Кадар Корректор В.Гирняк

Заказ 3770/23Тираж 99Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

ТаблицаЗ

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и касается нового штамма бактер ий, который может быть использован при биологической очистке сточных вод от оксала- та. Цель изобретения - штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-154вД, способный к полному разложению оксалата при концентрации его в среде до 40 г/л и росту при температуре до . В условиях аэрации при температуре 28 штамм разлагает 42,6 г/л оксалата за 40-42 ч. 3 табл. СО со сх 00