Способ диагностики ретинопатии Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для диагностики патологии сетчатки у больных сахарным диабетом.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Забор слезной жидкости проводят с помощью меланжера. Тканеспецифические антитела определяют в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Перед постановкой РПГА слезную жидкость инактивируют в водяной бане (30 мин при 56°С) и затем адсорбируют бараньими эритроцитами (18

ч).

РПГА проводят в микроимитаторе Такачи по общепринятой методике, диагностикум используют в виде 1%-ной взвеси сенсибилизированных эритроцитов в объеме 0,025 мл на 0,05 мл каждого разведения исследуемой слезной жидкости, начиная с 1.16.

В качестве сенситина используют S-ан- тиген (очищенную от примесей водорастворимую фракцию наружных сегментов палочек (НСП) сетчатки, полученную из глаз крупного рогатого скота). НСП выделяют из сетчатки и очищают от примесей путем нескольких исследовательных центрифугирований в растворах сахарозы, содержащих 0,1 М KCI и буфер (0,05 М - трис HCI, рН - 7,4) Затем НСП подвергают осмотическому шоку в 10-кратном объеме дистиллированной воды и центрифугируют при 100000 g надосадочную жидкость концентрируют диализом против 50%-ного раствора полиэти- ленгликоля (м.в. 15000) Полученный раствор, содержащий водорастворимую фракцию белков НСП (1 мг/мл) - S-антиген. используют для сенсибилизации эритроцитов. В качестве носителя антигена используют 10% бараньи эритроциты, стабилизированные ацетальдегидом (в течение 20 сут) и танизированные в течение 15 мин при

00

с

о

XI

Ч)

СА

со

37°С, которые сенсибилизируют S-антиге- ном в дозе 68 мкг/мл в течение 60 мин (рН среды 6,4. температура - 45-48°С). Сенсибилизированные эритроциты консервируют 0,3%-ным раствором формалина. Срок хранения диагностикума - до 2-х лет. Обнаружение у больных сахарным диабетом без клинических признаков диабетической ретинопатии, S-антител в слезной жидкости расценивается как показатель субклинических изменений в сетчатке, диагностируют доклиническую стадию диабетической ретинопатии (ДР). При высоких титрах антител (1.128 и выше) прогнозируют развитие ДР. При титрах 1:64 и ниже, в том числе при отрицательных результатах, исследование повторяют в динамике через 4 мес. При стабильном поддержании титров 1:32 - 1:64 прогнозируют сохранение доклинической стадии. При подьеметитровдо 1 128и выше или падении до 1:16 и ниже прогнозируют прогрессирование ДР. Стабильно отрицательные результаты в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) расценивают как показатель интактности сетчатки.

Пример 1. Больная С., 41 год. Диагноз: сахарный диабет, инсулинзависи- мый. Длительность диабета 13 лет. При пер- вичном обследовании клинически выраженных признаков патологии сетчатки при офтальмоскопии глазного дна не выявлено; при иммунологическом обследовании обнаружены высокие титры S-антител в слезной жидкости обоих глаз (1:256), что дало основание для прогноза развития ДР. При наблюдении в динамике в течение 2 лет в обоих глазах отмечалось стабильное поддержание высокого уровня S-антител (1:128, 1:256).

При офтальмоскопии глазного дна в обоих глазах отмечались микроневризмы; геморрагии точечные, в правом глазу - пятнистые, в OS - мягкий экссудат.

Таким образом, обнаружение высоких титров S-антител в слезной жидкости предшествовало развитию клинически явной патологии сетчатки и явилось ранним прогностическим признаком ДР.

Пример 2. Больной П., 13 лет. Диагноз: сахарный диабет, инсулинзависи- мый, средней степени. Длительность диабета 4 года. Клинико-лабораторные обследования в динамике проводились в течение 2,5 лет, с интервалами в 6, 7 и 8 мес. На протяжении всего периода наблюдения клинических признаков ДР не выявлено. Первичное иммунологическое обследование выявило S-антитела в слезной жидкости обоих глаз (в правом титр V64, в левом - 1:32), что дало основание предполбжить

субклиническое вовлечение сетчатки в патологический процесс.

При диспансерном наблюдении в динамике титры S-антител стабильно поддержи- вались на уровне 1:32 - 1:64 в обоих галазах, данные ЭФИ без изменений.

Таким образом длительное поддержание умеренных титров S-антител явилось прогностическим признаком сохранности 0 сетчатки при СД.

Пример 3. Больная С., 10 лет. Диагноз: сахарный диабет, длительность диабета 2 г. При первичном обследовании изменений на глазном дне не выявлено, в 5 слезной жидкости обнаружены S-антитела в умеренных титрах (1:64), что позволило предположить субклиническое вовлечение сетчатки в патологический процесс, уровень S-антител в слезной жидкости правого глаза 0 снизился до 1:16, в левом - антитела не обнаружены.

Падение титров S-антител с умеренных до минимальных позволило диагностировать состояние S-зависимого иммунодефи- 5 цита и прогнозировать развитие ДР. При контрольном обследовании через 3,5 мес. S-антитела в слезной жидкости обоих глаз не обнаруживались, при офтальмоскопии глазного дна отмечалось умеренное расши- 0 рение и извитость вен, диагностирована диабетическая ангиопатия.

Таким образом, падение первоначально умеренных титров S-антител в слезной жидкости предшествовало развитию клиниче- 5 ски явной патологии сетчатки и явилось ранним прогностическим признаком ДР.

При стабильно отрицательных показателях или при длительном поддержании титров на уровне 1:32 - 1:64 клинически явная 0 ДР не развивалось (Р 0,001). Переход из доклинической стадии ДР в клиническую и прогрессирование ДР были сопряжены с выраженным накоплением S-антител (титры 1:128-1:1024) или падением первоначально 5 умеренных титров до минимальных (практически отрицательных).

Результаты иммунологического обследования, свидетельствующие о благоприятном прогнозе, при обнаружении умеренных 0 титров S-антител и о признаках прогресси- рования ДР при уровнях, характеризующих аутоаллергические реакции (1:128 - 1:1024) или состояние иммунодефицита (падение титров до минимальных) были подтвержде- 5 ны также сравнительным анализом показателей электрофизиологического исследования (ЭФИ) в группах больных с различными уровнями S-антител в слезной жидкости. Преимущество предлагаемого способа заключается в простоте и доступности его

проведения в широкой практике без слож-Формула изобретения

ного оснащения и неинвазивности иссле-Способ диагностики ретинопатии у

дования больных диабетом. Эти преимуще-больных диабетом путем офтальмологичества позволяют применять предлагаемыйского исследования, отличающийся

экспресс-метод при диспансерном обсле-5 тем, что, с целью повышения точности сподовании больных диабетом.соба. осуществляют забор слезной жидкоПо сравнению с прототипом предлагав-сти. определяют в ней содержание антител

мый способ значительно (в 2-2,5 раза) со-к S-антигену сетчатки в реакции пассивной

кращает трудозатраты на одного больного игемагглютинации и при титра 1:32 - 1:64

повышает пропускную способность при об-10 диагностируют субклиническую стадию диследовании больных, возрастает точностьабетической ретинопатии, а при снижении

диагностики (по прототипу точность состав-титров 1:16 и ниже или их увеличении до

ляет 93,3% а по предлагаемому способу -1:128 и выше диагностируют диабетическую

95%).ретинопатию

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. У больных сахарным диабетом из коньюктивы глаза осуществляют забор слезной жидкости, выявляют в ней уровень антител в реакции пассивной гемагглютинации к S-антигену. При уровне антиУел 1:32-1:64 диагностируют доклиническую стадию ретинопатии, а при увеличении титров 1 128 и выше или снижении титров 1:16 и ниже - диагностируют диабетическую ретинопатию По сравнению с известным способом точность увеличивается на 1,3% и появляется возможность выявления развития клинической формы диабетической ретинопатии.