Способ контроля насыщения биологической ткани жидким криопротектором Советский патент 1987 года по МПК A01N1/00 A01N1/02 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при низкотемпературном консервировании тканей с целью последующей их трансплантации,

Цель изобретения - повьппение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем что ткань после определения ее исходной массы и влажности инкубируют в водном растворе диметилсульфоксида (ДМСО) и после инкубации определяют изменение ее массы, экстрагируют ДМС хлороформом и определяют в нем концентрацию ДМСО методом ИК-спектрофо- тометрии, после чего рассчитывают насыщение ткани ДМСО по формуле

) ,

К:

т

00

V - объем инкубационной среды, взятый для анализа, мм;

-1 -

где

(Сис,(

- концентрация ДМСО в

п СХ

среде

хл

к

до инкубации,%;

Cv, - концентрация ДМСО в хлороформе, % ;

коэффициент распределения ДМСО в системе вода - хлороформ, равный 0,058; Б - исходная влажность ткани,% m - масса ткани до инкубации,г дт - изменение массы тканИ посл

инкубации, г.

Пример. Образцы ткани щитовидной железы (15 х 4 х 2 мм) массой 0,2540, 0,2246 и 0,2799 г исходной влажностью 81,8% (влажность определя ют по известной методике) заливают 2 мл 10%-ного водного раствора ДМСО и инкубируют 15, 30 и 60 мин при 37°С. Затем от каждой пробы отбирают по 1,5 мл инкубационной среды и прибавляют по 1,5 мл хлороформа. После встряхивания в течение 25 мин и центрифугирования отбирают хлороформен- .ньй слой и определяют в нем концентрацию ДМСО спектрофотометрически по калибровочной кривой зависимости оптической плотности от концентрации (фиг.1).

Спектры снимают на ИК-спектрофото метре Specord-75IR в кюветах из

CaF толщиной слоя 0,08 см (в зависимости от концентрации она варьирует в пределах 0,08-5,0 см). В качестве рабочей принимают полосу поглоще

Ф о

ния валентных-колебаний СН,-группы ( ) в ИК-спектре ДМСО.

Кусочки ткани после инкубации про- мывают путем быстрого погружения в физиологический раствор и промывают фильтрованной бумагой. Затем взвешивают, опр еделив изменение массы ткани после инкубации, и расчитывают процентное содержание ДМСО в ткани по формуле (1).

Результаты приведены в табл.1.

Из табл.1 видно, что через 15 мин инкубации в ткань проникает только 3,7% ДМСО, что недостаточно для

консервирования, через 30 мин в ткани 9,0% ДМСО, т.е. то количество, которое обеспечивает криозащитный эффект. При подх отовке данной ткани к конвервированию ое необходимо инкубировать в растворе ДМСО не менее 30 мин.

В табл.2 представлены данные исследования способности щитовидной железы к аккумуляции радиоактивного йода после замораживания в зависимости от времени инкубации.

Из табл.2 видно, что ДМСО обеспечивает криозащитный эффект при 40 мин инкубации.

Предлагаемый способ позволяет определять концентрацию ДМСО в хлороформе до 10 м, что соответствует концентрации ДМСО в инкубационной среде 1, (т.е. до О,01%),следовательно, чувствительность способа в 500 раз вьше, чем по известному способу, где чувствительность 5%.

рмула изобретения

Ф о

Способ контроля насыщения биологической ткани жидким криопротекто- ром, включающий обработку ткани крио- протектором с последующим определе- HJ-ieM его концентрации в растворе, отличающийся тем, что, с целью повьшения чувствительности способа при использовании диметилсульфоксида (ДМСО) в качестве крио- протектора, ткань инкубируют в растворе ДМСО, при этом определяют исходный уровень массы, влажность ткани, концентрацию ДМСО в инкубационной среде, объем инкубационной среды посе инкубации определяют изменением ассы ткани, далее в среду добавляют лороформ, в хлороформенном экстракте определяют концентрацию ДМСО ме

годом ИК-спектрофотометрии, а насыщение С ткани криопротектором определяют по формуле

V (С - 5 4-1115) )

ИCX. к К.

в т

Too -

V - объем инкубационной среды, взятый для анализа;

15 30 60

0,550,25400,05423,7

0,5-10,22460,06349,0

0,460,27990,074410,6

Условия эксперимента

Интактная щитовидная железа

Инкубация с 0,9% NaCl

Инкубация с ДМСО в течение, мин:

5 15 40 60

Составитель Н.Литвиненко

Техред В.Кадар Корректор А, Обручар

Редактор Н.Рогулич

Заказ 3993/6 Тираж 627Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород,ул.Проектная,4

Cypj,- концентрация ДМСО в среде

до инкубации;

С, - концентрация ДМСО в хлороформе ;

К - коэффициент распределения ДМСО в системе вода - хлороформ, равный 0,058; В - исходная влажность ткани; m - масса ткани до инкубации; urn - изменение массы ткани после инкубации.

Таблица 1

Таблица 2

Содержание по отношению к контролю, %

0,169-0,011 0,078+0,006

0,,009 0,099+0,008 0,141+0,14 0,171+0,015

Изобретение относится к биоло- тии и медицине, предназначно для низкотемпературной консервации тканей с целью последующей их трансплантации. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Дпя этого ткань после определения ее исходной массы и влажности инкубируют в водном р-ре диметилсульфоксида (ДМСО) и после инкубации определяют изменение массы ткани, экстрагируют ДМСО хлороформом и определяют концентрацию ДМСО ИК-спектрофотометрией, рассчитьшают насьпцение ткани ДМСО по формуле С V. Сисх-ГСм-(И-К) (В.т):100+ -im, где V - объем инкубационной среды, взятый для анализа; С, - концентрация ДМСО в среде до инкубации; Схл - концентрация ДМСО- в хлороформе; К - коэффициент распределения ДМСО в системе вода - хлороформ; В - исходная влажность ткани; m - масса ткан до инкубации; um - изменение массы ткани после инкубации. 2 табл. с (Л