Способ определения активности мезофильных молочнокислых стрептококков,используемых для приготовления бакконцентрата Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/02 

Изобретение относится к молочной промьшленности и может быть испольэо вйно для .быстрого определения активнсти биомассы путем подсчета количе- ства клеток мезофильных молочно-ки с- лЫх стрептококков в ней,

,Цель изобретения - повышение точности и ускорение процесса,

Способ осуществляется следующим образом.

Из основного раствора резазурина готовят рабочий раствор разбавлением последнего прокипяченной и охлажденной дистиллированной водой в соотно- шении 1:15, Это соотношение подобран в результате опытов, как наиболее оптимальное для быстрого и точного определения активности именно мезофильных молочно-кислых стрептококков Только при таком разведении основног раствора резазурина определено оптимальное количество клеток в 1 г биомассы, а именно 42 , вошедшее в формулу для подсчета, Процент ошиб- ки при данном разведении наименьший.

Для определения количества клеток в биомассе берут две пробирки с . 10 МП стерильной воды, подогретой до 28-32 С, В одну пробирку помещают 1 биомассы, хорошо ее перемешивают с водой так, чтобы не было комочков. В другую пробирку наливают 1 мл рабочего раствора резазурина, Содержи- мое двух пробирок соединяют в одну, закрывают резиновой пробкой, смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирки для более полного смешивания. Пробирку помеш;ают в водяную баню с температурой 28-32°С, оптимальной для развития мезофильных молочно-кислых стрептококков, замеряют время обесцвечивания содержимого пробирки. Определив время обесцвечи- вания, определяют количество клеток в биомассе по формуле

42 -10 К ----,

где К - количество клеток, содержаш;ееся в Г г исследуемой биомассы;

42 - количество клеток, содержащееся в 1 г стандартной биомассы при обесцвечивани ее в течение 1 мин.; п - время обесцвечивания 1 г исследуемой биомассы.

Пример 1, Берут две пробирки с 10 мл стерильной воды при 28°С, В одну пробирку помещают 1 г биомассы симбиоза № 440а, состоящего из Streptococcus lactis (16+20j,., ) , Str, асе- toinicus 826, Str, cremoris UB, хорошо перемешивают ее с водой так, чтобы не было комочков, В другую пробирку наливают 1 мл рабочего раствора резазурина. Содержимое двух пробирок соединяют в одну, закрывают резиновой пробкой и смешивают путем медлен11ого трехкратного переворачивания пробирки. Последнюю помещают в водяную баню с температурой 28 С и включают секундомер,

Обесцвечивание содержимого пробирки происходит за мин.

По формуле подсчитывают количество бактериальных клеток.в 1 г биомассы К 52,5 -Ш ,

Таким образом, в 1 г исследуемой биомассы содержится 525 млрд мезофильных молочно-кислых стрептококков Активность исследуемой биомассы высокая, поэтому ее смешивают с защитной средой в соотношении 1:4,Пример 2, Берут две пробирки с 10 мл стерильной воды при 32°С, В одну пробирку помещают 1 г биомассы,

полученной с использованием двухви- довой закваски № 32, состоящей из Str, lactis (3548+4385+8546+3516) Str, acetoinicus 254 и хорошо ее перемешивают с водой, В другую пробирку наливаю 1 мл рабочего раствор резазурина. Содержимое обоих пробиро соединяют в одну, закрывают резиново пробкой и смешивают. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 32°С и включают секундомер.

Обесцвечивание содержимого пробирки происходит за 3,5 мин. Количество бактериальных клеток в 1 г биомассы К 12 , .

Таким образом, в 1 г исследуемой биомассы содержится 120 млрд клеток. Активность ее невысокая, поэтому ее смешивают с защитной средой в соотношении 1:2,

По предлагаемому способу результа получают за 1-5 мин, в то время как при определении количества клеток и их активности чашечным методом или посевом биомассы по пределам результаты получают через 3 сут.

Если обесцвечивание резазурина происходит за время до 1,5 мин, в

биомассе содержится до 240 млрд бактериальных клеток высокой активности

1 г биомассы свертывает 1 л молока за 3 ч после высушивания, баккон- центрат в 1 порции содержит до 2010 бактериальных клеток и свертывает л молока за 4,5-5 ч, i

Качественные показатели сухого бактериального концентрата зависят от соотношения биомассы и защитной среды, что определяется количеством и активностью клеток в биомассе.

Быстрое и точное определение количества клеток в биомассе позволяет установить правильное соотношение биомассы и защитной среды и получить сухой бактериальный концентрат высокого качества и в больших количествах.

Формула изобретения

Способ определения активности мё- зофильных молочно-кислых стрептококков, используемых для приготовления бакконцентрата, предусматривающий приготовление основного раствора ре- зазурина, получение рабочего раствора растворением его в воде, отбор иссле-зо дуемых проб, смешивание с рабочим

25

Редактор И, Горная

Составитель И. Привалова

Техред В.Кадар Корректор А, Обручар

Заказ-4018/22 Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

раствором резазурина, выдержку в водяной базе до обесцвечивания, установление продолжительности обесцвечивания и последующий подсчет количества жизнеспособных бактериальных клеток, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения точности и ускорения процесса, в качестве исследуемой пробы используют биомассу мезофильных молочно-кислых стрептококков, смешивание ее с рабочим раствором резазурина ведут в соотношении 1:15, обесцвечивание проводят при 28-32 С,

подсчет количества бактериальных клеток осуществляют по формуле

19 ° п

К

42

где К - количество клеток, содержащееся в 1 г исследуемой биомассы;

42 -10 - количество клеток, содержащееся в 1 г стандартной биомассы при обесцвечивании ее в течение 1 мин; п - время обесцвечивания 1 г исследуемой биомассы, по которому оценивают активность мезофильных молочнокислых стрептококков.

Изобретение относится к молочной промышленности. С целью повьшения точности н ускорения процесса, приготовление рабочего раствора резазу- рина осуществляют путем разбавления основного раствора водой в соотношении 1:15, обесцвечивание проводят при температуре 28-32°С, а подсчет количества бактериальн лх клеток в биомассе мезо тьных молочно-кислых стрептококков осуществляют по формуле К«42 :п, К - количество бактериальных клеток, содержащееся в 1 г исследуемой биомассы; 42 количество клеток, содержащееся в 1 г стандартной биомассы при обесцвечивании ее в течение 1 мин; п - время обесцвечивания исследуемой биомассы, по которому оценивают активность мезо- фильных молочно-кислых стрептококков. кл с оо оо ел СП о 00