Способ получения аубазидана Советский патент 1987 года по МПК C12P19/04 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения полисахарида аубазидана, который может быть использован в фар- макологии как стабилизатор суспензий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм.

Цель изобретения - увеличение выхода аубазидана и сн1гжение его себе- стоимости.

Способ заключается в следующем. Дрожжеподобны гриб Aureobasidium pullulans штамм 8 выращивают на питательной среде, содержащей минераль- ные компоненты и источник углерода, в качестве которого используют деминерализованный на катионите отход производства декстрана - маточный раствор, полученный после осаждения нативного декстрана. Применение отхода производства декстрана в качестве источника углерода значительно удешевляет процесс получения аубазидана. Водно-спиртовой маточник, полученный после осаждения нативного декстрана, содержит до 3,0-4,5% фруктозы, небольшое количество низкомолекулярного декстрана, остатки питательной среды для культивирования Leuconostoe mesenteroides и продукты метаболизма этой культуры. Фруктоза и низкомоле- кулярньш декстран легко улитизируют- ся Aureobasidiura pullulans штамм 8 с образованием аубазида га. При этом продукты метаболизма Leuconostoe mesenteroides и остатки питательной среды (белки, органические кислоты, витамины) являются ценными источниками питания для продуцента и благотво но влияют на его жизнедеятельность. Витамины способствуют быстрому росту и размножению клеток Aureobasidium pullulans штамм 8. Продукты метаболизма - органические кислоты и амино кислоты являются дополнительным источником углеродного и азотного питания для клеток продуцента, что также способствует ускорению процесса образования аубазидана. Удачное сочета ние органических веществ в отходе производства декстрана приближает ег к естественным субстратам и является причиной повышения выхода аубазидана в данном способе.

Получение аубазидана по предлагаемому способу начинают с приготовления питательной среды для выращивании дрож(еподобного гриба Aureobasidium pullulans штамм 8.

Паточник после отгонки спирта прн 60-65 с и остаточном давлении (7,0- -8,0) 10 Па при содержании редуци- руюицгх веществ (РВ) 8,5-10% охлаждают до 20-25 С и деминерализуют на катионите. Операция деминерализации необходима, так как присутствующие в маточнике ионы NH оказывают негативное влияние на синтез аубазидана. В результате очистки из раствора удаляются ионы NH, а также К, , др. Полученный раствор разбавляют обессоленной водой до 5%-ной концентрации РВ, и вводят соли, являющиеся минеральной основой среды Чапека-Докса. Составленную среду подвергают стерилизации. Готовую питательную среду засевают (5% от объема) посевным материалом. Ферментацию проводят при 24-25°С в течение 84-94 ч. После охлаждения ферментационной массы до 18°С осаждают нативный аубази- дан. Затем отделяют клетки продуцента от целевого продукта. Очищенный аубазидан обезвоживают в токе азота и отжимают на валках. Окончательно осадок высушивают горячим азотом.

Данные влияния концентрации РВ в среде на выход нативного и чистого аубазидана приведены в табл.1.

Как видно из табл.1, при увеличении концентрации РВ в среде выход нативного аубатидана (вместе с клетками продуцента ) повьпаается. В то же время при 7,0% РВ в среде резко увеличивается содержание клеточной биомассы, что ведет к ухудшению условий очистки целевого продукта от клеток продуцента на стадии сепарирования. Кроме того, снижается выход полисахарида в расчете на содержащий в среде источник углерода. Снижение концентрации РВ в среде до 3% приводит к резкому снижению выхода нативного и чистого аубазидана. Таким образом, оптимальной является концентрация РВ 4-5%.

Использование в качестве источника углерода деминерализованного на катионите отхода производства декстрана не приводит к ухудшению свойств и потребительских характеристик аубазидана. Результаты влияния состава среды на качество аубазидана приведены в табл.2.

Пример. И-ч маточника, полученного после осаждения нативного декстраиа, отгоняют этиловый спирт при 63° С и остаточном давлении 8-1 С) Па t до содержания РВ 8,5%. Упаренный раствор охлаждают до 25 С и деминерализуют на колонне с катионитом в Н форме со скоростью подачи очищаемого раствора 6 мл/см Мин. Полученный ю раствор разбавляют обессоленной водой до содержания РВ, 57, с добавлением минеральных солей из расчета, г/л: NaNOj 3; 1; 0,5; КС1 0,5; 0,01.15

Затем устанавливают 2 н. раствором NaHO рН питательной среды 6,5 и стерилизируют ее 30 мин при 105°С. 200 мл приготовленной таким образом среды заливают в колбу емкостью 20 750 мл. Во вторую колбу помещают 200 мл питательной среды, приготовленной по описанному способу, но с той разницей, что не проводят ионообменную очистку отхода производства 25 декстрана. В третью и четвертую колбы заливают питательные среды, приготовленные соответственно на сахарозе и фруктозе с концентрацией источника углеродного питания в растворе 5%. 30

Приготовленные среды засевают посевным материалом в количестве 5% (объемн. ), выращенным на среде, содержащей в качестве источника углеродного питания сахарозу. Ферментацию 5 Aureobasidium pullulans штамм 8 проводят при 24 С на качалке. Продолжительность ферментации 94 ч. После охлаждения культурапьной жидкости до 18°С нативный аубазидан в каждой из 40 колб осаждают этиловым спиртом при рН 6,6 в два приема: 0,05 л этанола на О,1 л культуральной жидкости, после 15-минутного перемещивания дополнительно загружают О,1 л этанола на 45

снова перемешине 810 Па. Затем проводят повторное осаждение аубазидана этиловым спиртом в присутствии 1%-ног-о хлори того натрия при рН 6,6. К полученн осадкам после декантации добавляют равный объем спирта и проводят обез воживание осадков перемешиванием сж тым азотом. Затем маточники сифони- руют. Осадки отжимают на валках, ус роенных по типу фрикционной передач и высушивают в кипящем слое в токе горячего азота температурой в течение 10 мин. Затем их взвешивают и определяют выход аубазидана с 1 л культуральной жидкости. Результаты влияния состава источника углерода на биосинтез аубазидана приведены в табл.3.

Как видно из табл.3, предлагаемы способ получения аубазидана позволя ет увеличить выход целевого продукта в 1,2 раза. При этом вместо сахара в качестве источника углерода для приготовления питательной среды используется содержащий фруктозу отход производства декстрана. В результате этого обеспечивается удешевление процесса получения аубазидана, эконо мится значительное количество ценного пищевого продукта - сахара.

Формула изобретения

Способ получения аубазидана, пред усматривающий выращивание гриба Aureo basidium pullulans штамм 8 в условия аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и ми неральные соли, до максимального накопления целевого продукта с последующим его выделением, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода аубазидана и снижения его себестоимости, в качестве источника углерода используют демине рализованный на катионите отход производства декстрана, полученный пос0,1 л исходной массы, вают.

Отделенные декантацией осадки растворяют при 70°С в обессоленной воде. Клетки продуцента отделяют от це- 50 осаждения нативного декстрана из левого продукта двукратным сепариро-культуральной жидкости Leuconostoe

ванием при 60°С. Отделенный от кле-mesenteroides, которьо вводят в среток раствор аубазидана упаривают в три раза при и остаточном вакууду в концентрации 4-5% из расчета на ре дуци рующие не ще с т в а.

t ю15

20 25 30

3 39129 }

не 810 Па. Затем проводят повторное осаждение аубазидана этиловым спиртом в присутствии 1%-ног-о хлористого натрия при рН 6,6. К полученным осадкам после декантации добавляют равный объем спирта и проводят обезвоживание осадков перемешиванием сжатым азотом. Затем маточники сифони- руют. Осадки отжимают на валках, устроенных по типу фрикционной передачи, и высушивают в кипящем слое в токе горячего азота температурой в течение 10 мин. Затем их взвешивают и определяют выход аубазидана с 1 л культуральной жидкости. Результаты влияния состава источника углерода на биосинтез аубазидана приведены в табл.3.

Как видно из табл.3, предлагаемый способ получения аубазидана позволяет увеличить выход целевого продукта в 1,2 раза. При этом вместо сахара в качестве источника углерода для приготовления питательной среды используется содержащий фруктозу отход производства декстрана. В результате этого обеспечивается удешевление процесса получения аубазидана, экономится значительное количество ценного пищевого продукта - сахара.

Формула изобретения

Способ получения аубазидана, предусматривающий выращивание гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, до максимального накопления целевого продукта с последующим его выделением, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода аубазидана и снижения его себестоимости, в качестве источника углерода используют деминерализованный на катионите отход производства декстрана, полученный пос осаждения нативного декстрана из культуральной жидкости Leuconostoe

mesenteroides, которьо вводят в среду в концентрации 4-5% из расчета на ре дуци рующие не ще с т в а.

2,2

3,5

10,5

1 1,0

Не более Не более 6,0 12,5

Таблица 1

Таблица 2

10,5

3,1

6,5

1 1,0

3,2

7,0

Не менее 5,5-7,5 2,0

Таблица 3

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения полисахарида аубазидана, который может, быть использован в фармакологии как стабилизатор суспензий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм. Целью изобретения является увеличение выхода аубазида- на и снижение его себестоимости. Способ заключается в выращивании гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода деминерализованный на катионите отход производства декстрана - маточный,раствор, полученньш после осаждения натнвного декстрана, который вводят в среду в концентрации 4-5% из расчета на редуцирующие вещества. 3 табл. 00 оо ( N5 СО