Питательная среда для культивирования гриба АURеоваSIDIUм pULLULaNS штамм 8 - продуцента аубазидана Советский патент 1991 года по МПК C12P19/04 C12N1/14 C12N1/14 C12R1/645 

ве источника углерода - осахаренный крахмал при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Кукурузный экстракт 0,6 - 0,7 КН2РСм0,1-0,14

MgS04x7H200,05-0.07

К2НР040,1-0,14

KCI0,05 - 0,07

FeS04x7H200,001-0,0014

Гидролизованный крахмал с декстрозным эквивалентом 70- 75% (в пересчете на РВ)4,0 - 5,0

ВодаОстальное

Изучали влияние разных источников азота на выход аубазидана при культивировании гриба A, pullulans штамм 8,

В табл. 1 показано влияние источников азота на выход аубазидана при культивировании A. pullulans штамм 8.

Как видно из данных табл.1 наибольший выход аубазидана наблюдается при использовании кукурузного экстракта.

В табл.2 представлены данные по влиянию концентрации кукурузного экстракта в среде на биосинтез аубазидана грибом A, pullulans штамм 8.

Из данных табл.2 видно, что оптимальная концентрация кукурузного экстракта 0,6-0,7%. В табл.3 представлены данные по влиянию на биосинтез аубазидана разных источников углерода в питательной среде,

Результаты табл.3 показывают, что наибольший выход аубазидана наблюдается в среде, содержащей кукурузный крахмал.

В табл.4 показано влияние степени гидролиза и источника крахмала на биосинтез аубазидана и его структуру.

Из данныхтабл.4 видно, что при использовании кукурузного крахмала с декстрозным эквивалентом, равным 75, удается получить максимальное количество полисахарида со структурой, близкой полисахариду, полученному на контрольной среде. При использовании картофельного крахмала выход целевого продукта ниже. Кроме того, структура полисахарида (соотношение 1,4- и 1,3-связей) существенно отличается от контрольного варианта.

Увеличение степени гидролиза крахмала до 95% нецелесообразно, так как при этом не наблюдается существенного увеличения выхода целевого продукта.

В табл,5 представлены данные по зависимости синтеза аубазидана использованным штаммом от количества внесенного гидролизованного кукурузного крахмала.

Из данных табл.5 видно, что оптимальная концентрация гидролизованного кукурузного крахмала для синтеза аубазидана штаммом 8 A. pullulans составляет 4-5%.

П ри м е р 1. Питательную среду готовят

в ферментере емкостью 1,0 м , коэффициент заполнения 0,75. 75 кг кукурузного крахмала суспендируют в 150 л водопроводной воды. Гидролиз а-амилазой проводят при

рН 6,0-6,2, из расчета 3,6 ед. на 1 г крахмала в течение 30 мин при 80°С,

Среду охлаждают до 45-50°С, понижают рН с помощью 10%-ного раствора H2S04 до 4,5-4,8, после чего задают глюкоамилазу

из расчета 15 ед. на 1 г крахмала. Гидролиз глюкоамилазой осуществляют в течение 2,5 ч при указанных параметрах. По окончании гидролиза раствор крахмала передают через УНС (температура 135-138°С, выдержка 5-6 мин) в ферментер. Туда же через УНС закачивают стерильный раствор солей и кукурузного экстракта (режим стерилизации 143-145°С, время выдержки 8-10 мин). Количество загружаемых компонентов: кукурузный экстракт 5,25 кг (0,7 мас.%); К2НР04 0,9 кг (0,12 мас.%); КНаРСм 0,09 кг; MgS04 7H20 0,45 кг (0,06 мас.%); KCI 0,45 кг (0,06 мас.%); FeS04-7H20 0,09 кг (0,0012 мас.%).

Полученную стерильную смесь углеводов (степень гидролиза крахмала 75%), солей и кукурузного экстракта разбавляют стерильной водопроводной содой до 750 л, вводят стерильную эмульсию пеногасителя (пропинол Б-400) в количестве 750 мл (0,1 об.%), доводят значение рН стерильным 10%-ным раствором NaOH до 6,8-7,0. В качестве посевного материала используют 48-часовую культуру A. pullulans штамм

8, выращенную на среде аналогичного состава (содержание осахаренного крахмала 3%). Количество посевного материала 10 л (1:3% к объему ферментационной среды). Титр 1,8109 кл/мл.

Выращивают при 24±1°С, режим аэрирования 0,4 об/об среды в 1 мин.

В течение первых двух суток культивирования происходит понижение рН до 4,5 4,7, титр клеток продуцента 2,2-10 .Начиная с 36 часа роста наблюдают повышение вязкости культуральной жидкости, к 86 часу роста утилизация углеводов составляет 58,4%, количество синтезируемого полисахарида

(вместе с клетками продуцента) - 18,7 г/л, относительная вязкость разбавленной в 10 раз ферментационной массы 3,6 усл. ед. (измерение осуществляют на вискозиметре Octbalda при 20°С и d - 0.73.

Пример 2 (известная среда). Питательную среду Чапека-Докса готовят по примеру 1. Вместо кукурузного крахмала используют сахарный песок (37,5 кг). Стерилизацию углеводов, солей проводят по примеру 1. режим культивирования аналогичен описанному. Титр клеток продуцента после 48 ч культивирования 1,5-10 кл/мл. После 96 ч культивирования утилизация углеводов составляет 58,0%, количество синтезируемого полисахарида (с клетками) - 12,1 г/л, относительная вязкость 2.5 усл.ед.

Таким образом, при выращивании гриба A.pullulans штамм 8 на предлагаемой питательной среде увеличивается выход целевого продукта и снижается его себестоимость.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования гриба Aureobasldium pullulans штамм 8 - продуцента аубазидана, содержащая углеводы в качестве источника углерода, ис0

5

0

точник азота, KHaPCU, MgSO r7H20, KCI, FeSCU-VHaO и воду, отличающаяся тем. что, с целью повышения качества среды, обеспечения увеличения выхода аубазидана и снижения ее себестоимости за счет использования непищевого и недефицитного сырья, она дополнительно содержит КаНРСм, в качестве источника углерода - гидролизованный крахмал с декстрозным эквивалентом 70-75%,а в качестве источника азота - кукурузный экстракт при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Кукурузный экстракт

КН2Р04

KCI MgS04.7H20

К2НР04 FeS04 -7H20 Гидролизованный крахмал с декстрозным эквивалентом 70-75% (в пересчете на РВ) Вода

0.6-0,7 0,1 -0,14 0,05 - 0,07 0,05 - 0,07 0,1-0,14 0,001-0,0014

4,0-5,0 Остальное

Изобретение относится к биотехнологии и касается питательных сред для выращивания грибов - продуцентов аубазидана, который может быть использован в фармакологии, пищевой промышленности, при добыче нефти в качестве стабилизатора суспензий, растворов, а также как пленкоИзобретение относится к биотехнологии и касается питательных сред для выращивания грибов - продуцентов полисахарида аубазидана, который может быть использован в фармакологии, пищевой промышленности, при добыче нефти в качестве стабилизатора суспензий, растворов, а также как пленкообразующее средство. Цель изобретения - повышение качества среды, обеспечение увеличения выхода образующее средство. Цель изобретения - повышение качества среды, обеспечение увеличения выхода аубазидана и снижение себестоимости среды за счет использования непищевого и недефицитного сырья. Изобретение заключается в том, что в питательной среде для культивирования гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 - продуцента аубазидана в качестве источника азота используют кукурузный экстракт, а в качестве источника углерода - гидролизо- ванный кукурузный крахмал при следующем соотношении компонентов, мас.%: кукурузный экстракт 0,6-0.7; калий фосфорнокислый однозамещенный 0.1 -0,14; хлористый калий 0,05-0,07; магний сернокислый 0,05-0,07; калий фосфорнокислый двузаме- щенный 0,1-0,14; сернокислое железо 0,001-0,0014; гидролизованный крахмал (в пересчете на РВ) 4,0-5,0; вода остальное. После 86 ч культивирования количество нативного аубазидана составляет 18,7 г/л, относительная вязкость разбавленной в 10 раз ферментационной массы 3,6 усл.ед. 5 табл. аубазидана, и снижение себестоимости среды за счет использования непищевого и недефицитного сырья. Техническое решение заключается в том, что в питательной среде для культивирования гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 - продуцента аубазидана, содержащей источник углерода, азота и минеральные соли, в качестве источника азота используют кукурузный экстракт, а в качестО ел ч -N 00 N

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5