mesenteroides без его предварительного выделения и очистки. Причем используют культуральную жидкость определенного, экспериментально обоснованного состава, а именно с содержанием декстрана от 24 до 32 мг/мл и концентрацией редуцирующих веществ от 30 до 60 мг/мл. Кроме того, многократными экспериментами установлено, что культуральная жидкость ;Lmesenteroides является хорошим индуктором синте- за декстраназы. лишь для A.insuetus ВКПМ F342. ,: ; ... -.Л :
Пример 1. Получение культуральной жидкости L.mesenteroldes.
L.mesenteroides культивируют на пита- тельной среде следующего состава (%): KCI - 0,01; ;-igS04 -THaO - 0,01; КНаРОл- 0,1; ЫааНРОд -12НаО - 0,25; МЩО - 0,05; пептон -0,02; дрожжевой экстракт - 0,1; сахароза или меласса - 10, вода - остальное. Культивирование осуществляют в колбах Эрленмейера без аэрации и перемешивания при температуре от 24 до 26°С, Количество декстрана в культуральной жидкости определяют, осаждая его этиловым спиртом и высушивая до постоянного веса при 105°С. Результаты опыта приведены в
табл.1, v ... ;.: - : - .- ,. .: ..
Представленные в табл.1 результаты
показывают, что при культивировании на
среде с мелассой (отход сахарной промышленности, содержащий сахарозу) образование декстрана идет хуже, чем на среде с сахарозой. Максимальное количество пол- исахарида в обоих случаях накапливается к 48 часам культивирования и составляет на сахарозе от 29,8 до 30,0 мг/мл, на мелассе до 17,2 мг/мл.
П р и м е р 2. Культивирование различных продуцентов декстраназы на питатель- ных средах с дёкстраном и культуральной жидкостью Lmesenteroldes. ,
В качестве продуцентов используют наиболее активные в образовании декстраназы культуры Renlcilllum piscarium БИМ Г-102, Penlcillium funlculosum 15, Spicarla violacea ВКПМ F464, Asperglllus In suetus ВКПМ F342 и Llpomyces sp.
Культивирование Продуцентов проводят в колбах на питательных средах опти- мального дли каждого продуцента состава. В качестве индуктора используют культуральную жидкость L.mesenteroldes в количестве 10%, KOfopyto получают, культивируя бактерию в течение 48 ч на среде с 10% сахарозы/Перед доба&лёнием в питательную среду ky/i ьту рал ьнук) жидкость а вто клй- вируют. Кбйцент ация декстрана в культуральной жидкости составляет 25
0
5 0 5
0
5
0
5
0 5
мг/мл, редуцирующих веществ - 30 мг/мл. Наряду с дёкстраном она содержит автоли- зованные клетки бактерий, фруктозу, образовавшуюся из сахарозы в процессе синтеза декстрана, а также другие продукты жизнедеятельности бактерий L.mesente- roides, которые могут служить дополнительным источником углерода для продуцента декстраназы. Содержание декстрана в питательной среде, приготовленной на основе Lmesenteroides составляет 0,25%. В контрольных вариантах в качестве индуктора используют декстран в концентрации 0,25 и 0,5%.
Дестраназную активность измеряют в глкжозных единицах. Результаты приведены в табл.2.
Из. представленных результатов видно, что грибы Penlcillium plscarium, Penlcillium funlculosum, Spicaria violacea и дрожжи Lipomices sp. накапливают максимальное количество фермента на средах с дёкстраном в количестве 0,5%. На среде с культуральной жидкостью активность гораздо ниже. Культивирование A.insuetus ВКПМ F- 342 на питательной среде с 10% культураль- ной жидкости L.mesenteroldes позволяет достичь такого же уровня накопления декстраназы в среде, как при использовании в качестве индуктора декстрана.
Пример 3. Культивирование A.insuetus на средах с дёкстраном и культуральной жидкостью L.mesenteroides ВКПМ В- 581.
Культивирование проводят в колбах Эрленмейера на качалке при температуре от 39 до31°С в течение 4 суток на среде, содержащей кроме индуктора следующие компоненты (%); автолизат дрожжевой - 0,3; NaNOa - 0,3; КН2Р04 - 0,1; KCI - 0,05; MgSCU- 7H20 - 0,05; вода - остальное, рН 5,0-5,2. В качестве индуктора используют полиглюк-ин или культуральную жидкость 48- часовой культуры L.mesenteroides, полученную на питательной среде с сахарозой или мелассой. Результаты представлены.в Табл.З.
Из данных, представленных в табл.3, видно, что при культивировании продуцента на среде с полиглюкином максимальный уровень активности (от 80 до 83 ед/мл) наблюдается только при концентрации этого полисахарида в среде от 0,5 до 1,0%. Использование в качестве индуктора культуральной жидкости L.mesenteroides, полученной на среде с сахарозой, позволяет достичь такого уровня активности уже при концентрации декстрана 0,26% (10% культуральной жидкости). Оптимальной для на- крпления декстраназы концентрацией
культуральной жидкости в питательной среде является 10-12%. Снижение или повышение ее содержания в питательной среде для культивирования A.lnsuetus приводит к уменьшению активности декстраназы. Культуральная жидкость L.mesenteroides, полученная на питательной среде с мелассой, не обеспечивает активный синтез декстраназы A.insuetus и не может быть использована в качестве индуктора,
Пример 4. Культивирование A.insuetus на питательной среде с культуральной жидкостью L.mesenteroides различного состава.
В опытах используют полученную на питательной среде с сахарозой 48-часовую культуральную жидкость L.mesenteroides ВКПМ В-581, различающуюся по содержанию декстрана (от 20 до 32 мг/мл) и редуцирующих веществ (от 30 до 100 мг/мл). Культуральную жидкость вносили в питательную среду в количестве 10%. Результаты представлены в табл.4,
Из таблицы видно, что определяющее значение имеет концентрация декстрана в культуральной жидкости. При содержании декстрана ниже 24 мг/мл декстраназная активность в среде не достигает своего максимального значения.
Концентрация декстрана от 24 до 32 мг/мл позволяет достичь уровня активности от 78,0-82,0 ед/мл, Существенное значение имеет и концентрация редуцирующих веществ (РВ). В примерах 3-7 она находится в интервале от 38 до 60 мг/мл и не влияет отрицательно на накопление декстраназы. В случаях, когда концентрация.РВ составляет от 70 до 100 мг/мл, происходит репрессия синтеза декстраназы, даже если концентрация декстрана при этом оптимальная.
Пример 5. Культивирование A.insuetus ВКПМ F-342 в ферментере.
Состав питательной среды (в мас.%): культуральная жидкость L.mesenteroides - 12 или полиглюкин - 0,5; автолизат дрожжевой - 0,3; ЫаМОз - Oi3; КН2РСМ -0,1; KCI - 0,05; МдЗСм 7Н20 - 0,05; воды - остальное, рН 5,0-5,2. Аэрация - 1 объем воздуха/объём среды/мин. Перемешивание - 200 об/мин, температура культивирования 30± ±1°. Результаты эксперимента представлены в табл.5.
Представленные в табл.5 результаты показывают, что при использовании в качестве индуктора культуральной жидкости L.mesenteroides синтез декстраназы проис- ходит более интенсивно и максимум накопления фермента наблюдается к 42-48 часам, в то время как в известном способе максимальный уровень активности декстраназы - 63-80 ед/мл удается достичь за 60-70 часов культивирования в ферментере.
Пример 6. Культивирование A.insuetus ВКПМ F-342 в колбах.
Культивирование проводят в колбах Эр- ленмейера объемом 250 мл со 100 мл пита- тельной среды такого же состава, как в примере 5, на качалке со скоростью 180 об/мин при температуре 30± 1°. Результаты приведены в табл.6.
Из данных, представленных в табл.6, видно, что и при культивировании в колбах на питательной среде с к.ж. L.mesenteroides максимум накопления декстраназы наблюдается раньше, чем при культивировании на питательной среде с полиглюкином. Таким образом, преимуществами предлагаемого решения по сравнению с известным являются: доступность и легкость1 приготовления индуктора; снижение его концентрации в питательной среде в 1,5-2 раза, сокращение сроков культивирования продуцента в ферментере на 18 ч и в колбах на 12 ч при сохранении высокого уровня декстраназной активности.
35
.Формула изобретения
Способ получения декстраназы, предусматривающий глубинное культивирование продуцента Aspergilius insuetus ВКПМ
F-342 в аэробных условиях на питательной среде, содержащей индуктор декстраназы, автолизат дрожжевой, минеральные соли и воду, до максимального накопления активности декстраназы, отличающийся
тем, что, с целью упрощения способа и ускорения процесса за счет сокращения .сроков культивирования продуцента, в качестве индуктора синтеза декстраназы и основного источника углерода используют 9-15 мас.%
культуральной жидкости бактерии Leucono- stoc mesenteroldes ВКПМ В-581 с содержанием декстрана 24-32 мг/мл и редуцирующих веществ 30-60 мг/мл.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ получения декстраназы | 1986 |
|
SU1756355A1 |
| Штамм aSpeRGILLUS INSUетUS-г-116-продуцент декстраназы | 1980 |
|
SU896069A1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ LEUCONOSTOC MESENTEROIDES - ПРОДУЦЕНТ АНТИГЕННОГО КОМПЛЕКСА, СОДЕРЖАЩЕГО БЕЛОК | 1998 |
|
RU2147316C1 |
| Способ получения препарата декстраназы и его применение | 2020 |
|
RU2789083C2 |
| Штамм гриба реNIсILLIUм caNeSceNS - продуцент @ -галактозидазы | 1990 |
|
SU1738854A1 |
| Способ получения декстраназы | 1973 |
|
SU459497A1 |
| ШТАММ ДРОЖЖЕЙ HANSENULA SPECIES - ПРОДУЦЕНТ КОРМОВОЙ БИОМАССЫ | 1993 |
|
RU2077573C1 |
| ШТАММ ГРИБА FUSARIUM SAMBUCINUM - ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ | 2004 |
|
RU2259209C2 |
| ШТАММ ГРИБА ASPERGILLUS NIGER - ПРОДУЦЕНТ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ | 1995 |
|
RU2091485C1 |
| Штамм дрожжей Ogataea parapolymorpha ВКПМ Y-5081 - продуцент белковой биомассы | 2023 |
|
RU2796923C1 |
Динамика накопления декстрана при культивировании L. mesenteroides на среде с сахарозой и мелассой
Культивирование различных продуцентов на питательных средах с декстраном и культуральной жидкостью Lmesemeroides ВКПМ В-581
Таблица 3
Культивирование A.insuetus на средах с различными индукторами
Таблица 2
Таблица 4
Культивирование A.lnsuetus на питательной среде с культу- ральной жидкостью Lmesenteroides различного состава
Т а б л и ц а 5
Динамика накопления актиёности в культуральной жидкости A.insuetus при культивировании в ферментере
Продолжение табл.3.
Таблиц а 6
Динамика накопления декстраназы при культивировании A, Insuetus
ВКПМ F-342 в колбах
Продолжение табл.5
