Образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/00 

1I3

Изобретение относится к микробиологии, а именно оптической стандартизации бактерийных взвесей, используемых в бактериологической и иммунологической практике.

Целью изобретения является повьппе ние стабильности образца.

Указанная цель достигается тем, что используют суспензию из частиц нитроцеллюлозы, взвешенных в фосфат- но-буферном растворе с рН 7,0-7,2 при след тощем соотношении ингредиентов, мас.%:

Нитроцеллюлоза

Мертиолят Фосфатно-бу- ферный раствор

0,25-0,35 0,0066-0,01

Остальное Приготовление и использование образца на 10 единиц.

Приготовление суспензии частиц нитроце;:люлозы размерами 1-3 мкм. В пробирку помещают 30 мг нитроцеллюлозы в виде пленки, добавляют 1 мл 3%-ного раствора едкого калия. Пробирку подогревают на пламени горелки до бурного вскипания щелочи и полного растворения пластинки нитроцеллюлозы с образованием желтоватой окраски. Содержимое пробирки нейтрализуют путем добавления ледяной уксусной кислоты до помутнения за счет образования суспензии из частиц нитроцеллюлозы с размерами 1-3 мкм.Размеры частиц измеряются с помощью окулярного и объективного микрометров, установленных в фазово-контрастном микроскопе. Полученную суспензию трехкратно отмывают с помощью центрифугирования в фосфатно-буферном растворе при 1000 об/мин в течение 15 мин. Образовавшийся осадок объемом 0,1 мл ресуспендируют в 0,9 мл фосфатно-буферного раствора с рН 7,2, получая такиЫ образом I %-ную суспензию частиц нитроцеллюлозы.

Приготовление образца на 10 единиц ,

В пробирку-эталон (ампулу) диаметром 0,8 см вносят мл 1%-ной суспензии частиц нитроцеллюлозы размерами 1-3 мкм на фосфатно-буферном растворе, 2-3 капли мертиолята (1:100) и добавляют до 10,0 мл фосфатно-буферного раствора с рН 7,0-7,2, получая таким образом мутность, равную эта

лонному стеклянному стандарту на 10 единиц, что подтверждается на фо- тоэлектрокалориметре (ФЭК). Пробирку-эталон (ампулу) запаивают или закрывают пробкой из химически нейтральной резины с последующим парафиниро- ванием и используют для стандартизации бактерийных взвесей.

Оптическую стандартизацию проводят путем внесения в стандартную пробирку или близкую к ней по диаметру и толщине стенок 1-2 мл смыва 18 - 2 -часовой стандартизуемой микробной

культуры и приливания небольших, но точно учитываемых порций физиологического раствора, сравнивая при этом мутность опытной пробирки со стандартом мутности. Сравнение степени

мутности в опытной и эталонной (предлагаемой) пробирках производят невооруженным глазом при хорошем дневном рассеянном освещении, подложив под обе пробирки общеизвестную шрифтовую

таблицу. Перед.каждым определением образец взбалтывают путем переворачивания пробирки до полного суспен- зирования осадка. Хранят при обычной температуре.

С помощью испытуемого образца и стеклянного стандарта мутности проведена оптическая стандартизация 107 культур эглерихий, шигелл, сальмонелл, коклюшных микробов для следующих целей: посева в жидкие и на плотные питательные среды (56 культур) ; определения антибиотикоустой- чивости (17 культур); постановки иммунологических реакций (26 культур);

приготовления вакцинных препаратов (8 культур).

При этом концентрации микробов, определенные с помощью испытуемого

образца и стеклянного стандарта мутности, при их последующем сравнении на ФЭК-е оказались идентичными (100%-ное совпадение результатов), Мутность бактериальных взвесей,

определяемая с помощью предлагаемого образца, выражается в международных единицах мутности. Мутность образца на 10 единиц эквивалентна 10 международным единицам мутности, которые соответствуют следующим концентрациям микробов: 935 млн/мл микробов кишечной группы; 11 млрд/мин микробов коклюшной группы; 1,65 млрд/мл бруцеллезных микробов;

2,2 млрд/мл холерных вибрионов; 4,95 млрд/мл туляремийных микробов.

Наблюдения во времени показывают стабильность сохранения свойств предлагаемого образца,

В табл,I приведены результаты многолетних наблюдений за изменениями свойств предложенного стандарта параллельно с известными стандартами мутности: бактериальный, химический (бариевый), стеклянный.

с целью повышения стабильности, он

В табл.2 представлены весовые зна- содержит суспензию частиц нитроцел- чения ингредиентов.15 люлозы в 0,015 М фосфатном буфере

рН 7,0-7,2 и дополнительно мертиолят

В табл. 3 даны сведения об образцах стандартов мутности при соответствующих значениях рН .

Как видно из табл.3, оптимальными для рН следует считать значения 7,0-7,2 (пробы 5-7), в пределах

при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Нитроцеллюлоза 0,25 - 0,35 20 Мертиолят 0,0066 - 0,0.1

Фосфатный

буферОстальное

Химический Стеклянный

Предлагаемый

Примечание: - + - агрегация частиц суспензии.

30(0,30)0,83(0,,01)990099,69

25(0,25)1,0(0,01)995099,74

35(0,35)0,66(0,0066-0,01)985099,64

30(0,30)0,66(0,,01)990099,69

30(0,30)1,0(0,01)990099,69

346675

KOTopiiix частицы нитроцеллюлозы сохраняют длительно агрегативную и кинетическую устойчивость.

Формула из обретения

Образец для визуального определения оптической плотности бактерий- ньгх взвесей, содержащий суспензию частиц вещества размером 1-3 мкм, отличающийся тем, что,

при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Нитроцеллюлоза 0,25 - 0,35 Мертиолят 0,0066 - 0,0.1

Фосфатный

буферОстальное

I Т а б л и ц а 1

Таблица 2

5,13Д6675

Продолжение табл.2

Пример

Ингредиенты, мг(Х)

Нитроцеллюлоза Мертиолят

раствор

635 (0,35) 0,66 (0,,01) 9850 99,64

725 (0,25) 1,0 (0,01)9950 99,74

Примечание: пример 1 - образец изготовлен по средним значениям всех ингредиентов; примеры 2 и 3 - образцы приготовлены по граничным значениям нитроцеллюлозы; примеры А и 5 - образцы приготовлены по граничным значениям мертиолята; примеры 6 и 7 - образцы приготовлены по граничным значениям фосфатно-буферного раствора.

Таблиц

Г р«

Сведения об образцах стандартов мутности

6,6 .Агрегация частиц нитроцеллюлозы в первые дни

(2-3 дня) после приготовления стандарта и снижение за счет этого степени его мутности

6,7То же

6,8 Медленная агрегация частиц нитроцеллюлозы

(nepBbte недели) после приготовления стандарта, что также приводит к снижению степени мутности

6,9То же

7,0 Агрегативная и кинетическая устойчивость

частиц нитроцеллюлозы

7,1То же

7,2- 7,3 В течение первых месяцев наблюдается постоянное

выпадение в осадок солей из состава фосфатно- буферного раствора с усилением за счет этого степени мутности

7,4То же

7,5- и бо- Процесс усиления степени мутности ускоряется лее по мере увеличения рН

ВНИИПИ Заказ 5096/26 Тираж 499Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Фосфатис-буферный

Изобретение относится к микробиологии. Для повышения стабильности образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей содержит, мас.%: нитроцеллюлозу 0,25-0,35, мертиолят 0,0066 - 0,01 и буферный раствор остальное. Нитроцеллюлозу при нагревании растворяют в 3%-ном растворе едкого калия, добавляют ледяную уксусную кислоту. Суспензию центрифугируют, ре- суспендируют в фосфатном буфере рН 7-7,2 и добавляют мертиолят. 3 табл. со . О5 ОЭ C7I