Способ получения антительного диагностикума сальмонелл Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

00 Ю Изобретение относится к медицине, в частности к способам приготовления диагностических препаратов, и может быть использовано в медицинской микробиологии дл я определения тифопаратифозных и других патогенных для человека сальмонелл. Известен способ получения антительного диагностикума сальмонелл путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя 1. Однако известный способ является длительным и получаемые препараты обладают недостаточной чувствительностью. Цель изобретения - повышение чувствительности диагностикума. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения антительного диагностикума сальмонелл путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя, в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,5°/о-ной суспензии целлюлозы и З /о-ной суспензии белка А стафилококков щтамма Cowan-1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотнощениях 10:10:1. Пример. Способ получения цветного антительного диагностикума сальмонелл включает 4 основные операции: получение 5%-ной суспензии белок А-содержащих стафилококков щтамма Cowan-1; получение 2,5/о-ной суспензии целлюлозы; получение целлюлозно-стафилококкового сорбента; нагрузка целлюлозно-стафилококкового сорбента IgG-антителами диагностической сыворотки. Получение 5%-ной суспензии белок Асодержащих стафилококков штамма Cowan- 1. Музейную культуру стафилококков штамма Cowan-1 вначале проверяют на наличие белка А и затем засевают в ряд пробирок со скошенным агаром и инкубируют в термостате в течение 20-24 ч при 37°С. Затем суточные культуры из 5 пробирок смывают 5 мл стерильного физиологического раствора, полученную суспензию вносят в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в дезраствор. Осадок ресуспендируют в 19 об. стерильного физиологического раствора, содержащего мертиолят в концентрации 1:10000, и таким образом получают 5%-ную суспензию белок А-содержащих стафилококков штамма Cowan-1. Получение 2,5%-ной цветной суспензии целлюлозы. В центрифужную пробирку вносят 30- 50 мг целлюлозы, содержащей 12-14% нитрогрупп, 1 мл З /о-ного раствора КОН и проводят термогидролиз при 100°С на водяной бане в течение 3-5 мин до полного растворения нитроцеллюлозы. Затем при постоянном перемешивании в пробирку добавляют 1-2 капли 1%-ного раствора бриллиантовой зелени и 2-3 капли уксусной кислоты. Полученную зеленую суспензию нитроцеллюлозы отмывают в центрифуге 5 мл дистиллированной воды и таким образом получают 2,5°/о-ную цветную суспензию целлюлозы. Получение целлюлозно-стафилококкового сорбента. Целлюлозно-стафилококковый сорбент получают путем соединения равных объемов 2,5°/о-ной цветной суспензии целлюлозы и 5°/о-ной суспензии белок А-содержащих стафилококков штамма Cowan-1. Нагрузка целлюлозно-стафилококкового сорбента IgG-антителами диагностических сывороток. В центрифужную пробирку к 2 мл целлюлозно-стафилококкового сорбента добавляют ОД мл брюшнотифозной (паратифозной А, В или др. противосальмонеллезной) сыворотки с достаточно высоким титром антител 1:12800, 1:25600. Пробирку закрывают резиновой пробкой, несколько раз переворачивают и выдерживают при 37°С в течение 30 мин для адсорбции IgCзнтител на целлюлозно-стафилококковом сорбенте. Одновременно происходит инактивация стафилококков под действием мертиолята и бриллиантовой зелени. В конце этого периода в пробирке формируется зеленый хлопьевидный осадок, который подвергается однократному отмыванию в 5 мл дистиллированной воды и затем ресуспендированию в 3 мл физиологического раствора рН 7,2 и таким образом получают цветной антительный диагностикум сальмонелл. Процесс приготовления цветного антительного диагностикума сальмонелл занимает 30-40 мин, в то время как для получения цветных антител по прототипу требуется более суток. Кроме того, экспериментально установлено, что цветной антительный диагностикум характеризуется стабильностью: не дает спонтанной агглютинации, не реагирует с гетерологичными культурами микробов (эшерихии, шигеллы и др.) и высокой чувствительностью, реагируя на стекле с гомологичными культурами сальмонелл, разведенными до концентрации 3 млн клеток в 1 мл исследуемого материала. Прототипный препарат цветных антител обладает меньшей чувствительностью, позволяя выявлять только большие количества сальмонелл 30-50 млн. клеток в 1 мл исследуемого материала.

В табл. 1 представлены результаты определения чувствительности и специфичности брюшно-тифозных препаратов, полученных по предлагаемому способу с использованием целлюлозно-стафилококкового сорбента, по прототипу с использованием только целлюлозного сорбента и по известному способу с использованием стафилококкового сорбента.

В табл. 2 представлены результаты определения чувствительности и специфичности паратифозных В препаратов, полученных по трем упомянутым способам.

Таким образом, чувствительность препаратов, получаемых по предлагаемому способу, примерно в 10 раз превосходит прототип и известный способ. Кроме того, применение предлагаемого способа позволяет получить более специфичный препарат.

Таблица 1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА САЛЬМОНЕЛЛ путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки . сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,°1г)ной суспензии целлюлозы и 5%-ной суспензии белка А стафилококков штамма Cowan-1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотношениях 10:10:1.

+-ь++

+-И- +

Прототип (целлюлозный)

+-I-+

+++-1+++

+-И-+

++

+++

++

++

Таблица 2