Способ определения активности иммунодепрессора биогенной природы Советский патент 1987 года по МПК G01N33/53 

t13

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано при определении активности иммунодепрес- сивных препаратов биогенной природы, в TOJ1 числе полученных из органов и тканей млекопитающих.

Цель изобретения - угфощение способа за счет сокращения числа операций о

Способ осуществляется следующим образом.

Животных умерщвляют под эфирным наркозом, извлекают у них селезенку и определяют ее вес. Среди селезенок одной группы мышей могут встречаться органы с весом, значительно отличающимся от веса органов в этом же опыте,, Для выявления выскакивающих значений применяют метод, основанный на оценке максимальных различий полу- ченных результатов. Эти значения весов селезенок исключают из анализа.

Средний вес селезенок Р вычисляют для следующих групп: у интактных мы- щей Pj, (контроль 1-ИК); у мышей, koтopым за 20-40 мин до введения гидрокортизона (ГК) вводили физиологический раствор, РГ (контроль 2-ГК) у мьшей, которым за 20-40 мин до

введения гидрокортизона личные дозы иммунодепрес Р (опытные группы) «

Средний вес селезенок вычисляют по формуле и

п

Р : И Р.

-л

где п - количество селезенок в группе,

Индекс веса селезенки в группе 1 при введении ИД определяют по формуле

(Рр РГК)/(РИК

Гк

100. (2)

Зависимость 1 от величины испытываемой дозы препарата D; может быть удовлетворительно аппроксимирована линейной функцией вида

Ij5 а„ + a. , (3)

где а И а, - коэффициенты уравнения линейной регрес- сии с.

Оценку значений коэффициентов управления линейной регрессии выполняют методом наименьших квадратов, Вы152

числяют активность препарата А - дозу, введение которой позволяет получить индекс веса сапезенки, равный 50%,

S-Q-O

А 10

(4)

Значимость связи между 1д и DJ , которая описывается уравнением (З), оценивают по величине коэффициента корреляции - г. Минимальное значение модуля г, при котором существует значимая связь между р и DJ с уровнем надежности - Р 0,01, следующее (N - число сравниваемых пар):

ir| 0,882 0,833 0,789 0,750 0,715 N 45678

Вес селезенки в % к интактному контролю Y зависит от дозы ГК (ДГК) и времени после его введения Т

Y 75,52-0,43-ДГК + 0,56-Т;

(5)

В соответствии с формулой (5) при выполнении способа рекомендуется использовать дозу ГК 90-140 мг/кг, время между введением иммунодепрессора 20-40 мин, время регистрации эффекта 48-72 ч.

Пример, Определяют биологическую активность ИД, выделенных из печени теленка (препарат 1) и тимуса теленк-а (препараты 2а и 2б).Препарат 26 является продуктом очистки препарата 2а (сырца) на ионообменной целлюлозе ДЕ-52

. В эксперименте использовали мьшей (самцов или самок) массой 18-20 г, Содержание, корм и уход обычные.

Использовали гидрокортизон фир Гедеон Рихтер, лиофилизированные препараты ИД.

Готовили суспензию ГК в физиологическом растворе (концентрация 4мг/мп) и растворы ИД в стерильном физиологическом растворе. Животных случай- . ным образом (рандомизированно) разделяли по 6 мьшей в группу о Всего на испытание одной серии препарата необходимо 7-9 групп.В примере использовано 9 групп мышей.

Контроль 1. Мьшам из группы ин- тактного контроля (ИК) вводят 0,4 мп физиологического раствора, внутримышечно и спустя 20-40 мин 0,5 мп внут- рибркшинно.

Контроль 2. Мышам из группы с ГК вводят 0,4 МП физиологического раствора и спустя 20-40 мин внутрибрнгаин- но 0,5 МП ГК (2 мг/мышь).

Семи группам мьшей внутримьшечно вводят в объеме 0,4 мп различные дозы ИД 0,08; 0,2; 0,4; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 мг/мьппь„ Через iO-40 мин этим мьтам внутрибркнпинно вводят 0,5 мл ГК (2 мг/мьппь). Через 72 ч животных под эфирным наркозом декапитировали, извлекали селезенки и взвешивали,

Результапы определения параметров для расчета биологической активности ИД представлены в табл.1 о

Таблица 1

Продолжение табл.1

В табл.2 представлены результаты определения активности ИД

Таблица 2

1

Определение активности ИД по предлагаемому способу менее трудоемко и занимает меньше времени, в сравнении

с известным способом.

Формула изобретения

Способ определения активностиимму- нодепрессора биогенной природы путем введения его мышам с последующим забоем и исследованием селезенкиу контроль ных и опытных животных,о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения чис- л-а операций, через 20 - 40 мин после внутримьшечного введения различных доз иммунодепрессора вн-утрибрюшинно вводят гидрокортизон, через 2-3 сут животных забивают, определяют вес селезенки, рассчитывают индекс веса селезенки по

(,)/(Р,,-Р,,

.) -100,

Редактор П.Геревш Заказ 5281/46

Составитель Н.Гуляева Техред М.Моргентал

Корректор

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35,( Раушская наб,, д.4/5

-Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, улвПроектная,4

а

-10 15

L

ик

Р.

индекс веса селезенки;

средний вес селезенки у интактных мьш1ей;

средний вес селезенки-у мы

шей, которым вводили гидрс кортизон,, но не вводили

иммунодапрессор; Р - средний вес селезенки у

ьышей, которым вводили имкунодепрессор и гидрокорти

зон,

а активность имт нодепрессора определяют по формуле

А К)

а .

- активность иммунодепрессора; и а , - параметры регрессионной зависимости индекса веса селезенки от дозы икмунодепрессора.

Корректор М.Максимишинец

Изобретение относится к фармако-. логино Цель изобретения - упрощение способа. Определяют средгшю массу селезенки у интактных мьшей, у мышей, которым вводят гидрокортизон, и у мышей после введения им иммунодепрессо- ра и гид окортизона(, Рассчитывают индекс массы селезенки и активность им- мунодепрессора. Масса селезёнки зависит от дозы гидрокортизона, иммуно- депрессора и времени после введе шя препарата. 2 табл.