Способ выявления кровеносных сосудов матки на гистологическом препарате Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

113

Изобретение относится к медицине а именно к гистологии.

Цель изобретения повышение ка- честна окраски за счет более полного . выявления волокнистых структур стенки сосудов.

Способ осуществляют следующим образом.

Материал фиксируют в 4%-ном раст- воре нейтрального формалина, приготовленного на изотоническом растворе хлористого натрия, в холодильнике пр 4-8 С не менее 24 ч.

Материал замораживают и режут на срезы толщиной 10-15 мкм.

Срезы промывают в нескольких сменах дистиллированной воды от 3

до 24 ч, затем инкубируют их в течение 30-120 мин в термостате при в среде следующего состава: к 2 мл глицинового буфера Зеренсена 1 М концентрации рН 12,0 добавляют 5 мл дистиллированной воды, к полученному раствору приливают 2 мл 0,1 М раствора уксуснокислого кальция, потом 1 мл 0,1 М концентрации свежеприготовленного раствора двунатриевой соли аденозин-5- трифосфорной кислоты Полученную смесь фильтруют.

После инкубации срезы промывают в двух сменах дистиллированной воды по 5 мин в каждой, переносят их на мин при 37 С в среду следздощег состава: к 100 мл 2%-ного раствора азотнокислого свинца добавляют 10 мл 1 М раствора уксуснокислого натрия и 10 мл 1 М ацетатного буфера, рН 6,2. Срезы промывают в двух сменах дистиллированной воды по 5 мин в каждой, переносят на 0,5-2 ч в 20%-ньй раствор уксуснокислого натрия, затем их промывают в двух сменах дистил- лированной воды по 3 мин в каждой,, помещают на 2-5 мин в 2,5%-ный раствор уксусной кислоты и промывают их в двух сменах дистиллированной воды по 3 мин в.каясдой. Затем срезы переносят в раствор сернистого натрия на 5-30 с (до пожелтения среза), промывают в нес- колькюс сменах дистиллированной воды в течение 1-3 ч. Возможна докраска срезов гематоксилин-эозином с послеВНИИПИ Заказ 5787/38 Тираж 776 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, А

дующим заключением в бальзам-полистирол по известной в гистологии схеме.

Клеточные элементы сосудистой ст-енки окрашиваются в нежно-желтый цвет, границы эндотелиоцитов - в темно-коричневый. Другие структуры ткани и сосудистой стенки окрашиваются гематоксилин-эозином как обычно

Возможность более тонкого выявлe ния внутриклеточных структур достигается введением в состав субстратов азотнокислого свинца и уксуснокислого натрия, обеспечивающих окраску базальных мембран эндотелиоцитов.

Обработка раствором уксусной кислоты применяется для дифференцировк1 20 с целью устранения окраски несосу- Дистых структур и повьшения контраста препарата.

Формула изобретения 25

Способ выявления кровеносных сосудов матки на гистологическом препарате путем фиксации в 4%-ном растворе формалина, приготовлении срезов их инкубации с растворами АТФ, обработки в среде, содержащей соли свинца, с последующей дополнительной обработкой в растворах с сернистым натрием и доокраской в красителе, 35 о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повьшения качества окраски за счет более полного выявления во30

40

локнистых структур стенки сосудов, фиксацию проводят при 4-8 С, при

этом растворы фиксатора готовят на изотоническом растворе, а в качестве соли свинца прш ;еняют азотнокислый свинец, при этом среда дополнительно содержит 1 М раствор уксуснокислого

45 натрия и 1 М ацетатный буфер, рН

5,4-6,2, при соотношении азотнокислого свинца, уксуснокислого натрия и ацетатного .буфера 10 : 1 : 11И далее перед обработкой в растворе сернисто50 го натрия.препараты помещают в

20%-ный раствор уксуснокислого натрия на 0,5-2 ч и 2,5%-ньй раствор уксусной кислоты на 2-5 мин.

Изобретение относится к области медицины, точнее к гистологии. Цель изобретения - повьшение качества окраски путем более полного выявления волокнистых структур стенки сосудов. Для этого материал фиксируют в 4%-ном р-ре нейтрального формалина, приготовленного на изотоническом р-ре NaCl, при 4-8°С не менее суток. Срезы замороженного материала несколько раз промывают в дистиллированной воде, инкубируют их 30-120 мин в термостате при 37 С в среде, содержащей глицериновый буфер Зеренсена 1 М концентрации, рН 12,0, дистиллированную воду, 0,1 М р-р уксуснокислого кальция, 0,1 М р-р двунатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты, смесь фильтруют. После инкубации и промьшки двухкратно срезов в дистиллированной воде их на 30-45 мин при 37°С переносят в следующ то среду: 2%-ный р-р азотнокислого свинца. 1 М р-р уксуснокислого натрия, 1 М ацетатный буфер, рН 6.2. После двухкратного промывания в дистиллированной воде срезы помещают на 2-5 мин в р-р уксусной кислоты и затем двухкратно промывают их в дистиллированной воде. Затем срезы переносят в 3%-ный р-р сернистого натрия с последующей многократной промывкой дистиллированной водой. Клеточные элементы сосудистой стенки окрашиваются в нежно-желтый цвет, границы эндотелиоцитов - в темно-коричневый. Обработка р-ром уксусной кислоты ведется для дифференцировки с целью устранения окраски несосудистых структур и повьпцения контраста препарата , ( (Л 00 ел 01 00 ю ел