Способ определения фагоцитарной активности лейкоцитов Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано в гнойной хирургии для определения резистентности организма больных в клинических условиях.

Целью изобретения является ускорение и повышение точности путем дополнительного доведения рН бактериальной взвеси до значения рН исследуемой крови и проведения инкубации при температуре, равной температуре тела пациента.

Способ осуществляют следующим образом.

В пробирку с 20 Ж/мл гепарина добавляют 5 мл венозной крови, определяя при этом исходное значение рН, и проводят подсчет количества полиморфно-ядерных лейкоцитов в 1 мл крови и количество бактерий в 1 мл взвеси суточной культуры стафилококка. Определяют рН бактериальной взвеси, доводя его до исходного значения рН исследуемой крови добавлением соответствующего количества фосфатного буфера (фосфатный буфер готовится на 10 дней, только для коррекции рН бактериальной взвеси). Пробирку со смесью полиморфно-ядерных лейкоцитов с дозированной бактериальной нагрузкой термостатируют при температуре, равной температуре .тела обследуемого больного. По истечении 30, 120 мин готовят мазки для подсчета фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа, а также количества живых и мертвых бактерий в 100 фагоцитах.

Пример 1 i- Больная Т., . 31 год. Поступила в клинику с диагнозом одонтогенная флегмона подчелюстной области и крылочепюстного пространства слева. Температура тела при поступлении 37,2 С„ Общее количество лейкоцитов в 1 мл крови 9250000, из них 77% (или в абсолютных числах 7122500) полиморфно-ядерньпс. В 5 мл гепаринизированной (20 МЕ/мл) венозной крови сразу после ее забора определяли значение рН, которое составило 7,36. Проводился подсчет полиморфно-ядерных лейкоцитов в 1 мл крови. Готовили бактериальную взвесь из расчета 1s10 т.е. 7122500-510 356125000 стао

филококков, или 0,36-10 микробных тел/мл, рН бактериальной взвеси 6,1

5

5

0

5

0

5

0

5

Проводили коррекцию бактериальной взвеси (0,36 мл) добавлением 0,7мл 0,1 н. фосфатного буфера (рН 7,36).

Время манипуляций до контакта бактерий с фагоцитами 20 мин.

Смешанную с бактериальной взвесью кровь инкубировали в термостате при 37,2 С в течение 30 мин и перемешивании каждые 10 мин. Через 30 мин делали мазок и остальную часть инкубировали еще 90 мин при 37,2 С. Затем приготовили нужное количество мазков. Высушенные мазки на воздухе фиксировали в метаноле и окрашивали по методу Романовского-Гимза в течение 10 мин.

Результаты подсчета: фагоцитарный индекс через 30 мин 72%, фагоцитарное число через 30 мин 3,2, фагоцитарный индекс через 120 мин 75%, фагоцитарное число через 120 мин 4,6 и индекс бактерициднос- ти нейтрофилов 89%.

Индекс бактерицидности нейтрофилов (ИБН), %: 88, 86, 92 (в среднем 88), коэффициент вариации 0,0223 - примерно в 10 раз меньше, чем в прототипе, что указывает на повьш1ение точности исследования.

При исследовании по прототипу время контакта бактерий с фагоцитами, включая отмывки лейкоцитов в ходе инкубации, составило ,90 мин, а результаты подсчета фагоцитарной актив- .ности полиморфно-ядерных лейкоцитов: фагоцитарный индекс через 30 мин 90%, фагоцитарное число через 30 мин 5,5; фагоцитарный индекс через 120 мин 88%, фагоцитарное число через 120 мин 4,8; ИБН, %: .89, 40, 73 (в среднем 67%, коэффициент вариации 0,2373).

Пример 2. Ф,, 25 лет. Поступил в клинику с диагнозом одонтогенная флегмона подчелюстной области и крьшочелюстного пространства слева. Температура при поступлении 38,2°С. Количество лейкоцитов в 1 мл крови 12500000, из них 75% (или 9375000) полиморфно-ядерных. При исследовании в момент взятия крови значение рН 7,, 16. рН бактериальной взвеси 6,50. Проводили коррекцию рН бактериальной взвеси добавлением 0,36 мл 0;, 1 н. фосфатного буфера (рН 7,22). Время до контакта бактерий с фагоцитами 20 мин. Смешивали кровь и бактерии, инкубировали при 38,2 С в течение 30 мин, переворачивая пробирку каждые 10 мин Через 30 мин приготовили мазок и остальную часть смеси продолжали инкубировать 90 мин при тех же услови- ях. По окончании инкубации приготовили мазки, как в примере 1.

Результаты подсчета: фагоцитарный индекс через 30 мин 80% фагоцитарное число через 30 мин 3,9 фагоци- тарный индекс через 120 мин 83%, фагоцитарное число через 120 мин 4,1.

ИБН, %: 98, 99, 99 (в среднем 99) , коэфиициент вариации 0,0030 - примерно в 25 раз меньше, чем в прото- типе, что доказывает повьшение точности исследования.

Пример 3. Больной А., 54 года. Поступил в клинику с диагнозом подчелюстная флегмона справа. Температура тела при поступлении 35,0 С. Общее количество лейкоцитов в 1 мл крови 6500000, из них 86% (или 5590000) полиморфно-ядерных.

Изучение фагоцитарной активности

-1 .

ПО предложенному способу проводилось, как в примерах 1 и 2.

Подготовительное.время до контакта бактерий 20 мин.

Результаты подсчета фагоцитарной активности: фагоцитарный индекс через 30 мин 80%, фагоцитарное число

через 30 мин 3,7 ; фагоцитарный индекс через 120 мин 82%, фагоцитарно число через 120 мин - 4,5. ИБН, %: 82, 86, 85 (в среднем 84), коэффициент вариации 0,0166 - примерно в 5 раз меньше, чем в прототипе, что доказывает повышение точности исследования.

Результаты исследований приведены в таблице.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет сократить подготовительное время до контакта с бактериями бблее чем в высить точность

4 раза, а также по- исследованйя.

Формула изобретени

Способ определения фагоцитарной активности лейкоцитов путем смешивания их с суточной культурой микроорганизмов, инкубирования смеси с последующим подсчетом фагоцитарного индекса и индекса бактерицидности нейтрофилов, отличающийс тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, перед смешиванием дополнительно доводят рН бактериальной взвеси до значения рН исследуемой крови, а инкубацию проводят при температуре, равной температуре тела пациента.

Для ускорения и повышения точности способа определяют рН гепари- низированной венозной крови, количество полиморфно-ядерных лейкоцитов в 1 мл крови и количество бактерий в 1 мл взвеси суточной культуры стафилококка. рН бактериальной взвеси доводят до исходного значения рН исследуемой крови. Смесь полиморфно- ядерных лейкоцитов с дозированной бактериальной нагрузкой термостати- руют при температуре, соответствующей температуре тела обследуемого больного. По истечении 30, 120 мин готовят мазки для подсчета фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа, а также количества живых и мертвых бактерий в 100 фагоцитах. 1 табл. S (Л СлЭ ел СП СО 00 ю