Способ определения опсонизирующей активности биологической жидкости Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

ю

а э

00

sl

ч Иаобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для определения активности заболеваний, прогнозировяния irx течения, выбора лечения и его контроля . Цель изобретения - повышение чувствительности способа за счет количественной оценки процесса внутриклеточного переваривания. Указанная цель достигается тем, что в качестве контрольной используют смесь сывороток крови здоровых доноров, дополнительно исследуют пр бу с инактивированной путем прогревания испытуемой жидкостью, инкубацию проб проводят fe течение 1201 ±5 мин, при этом через ЗОЯ мин от начала инкубации в пробах определяют опсонические индексы фагоцитарной активности и поглощения тест микроорганизмов, а после инкубации опсонические индексы бактерицидности и завершенности фагоцитоза и по уров ню полученных значений определяют оп сонизирующую активность.биологической жидкости. Способ осуществляется следующим образом. В две опытные и в одну контрольн пробу помещают тест-систему, состоя щую из смеси равных объемов лейкойц тов донора и музейного, стандартног штамма стафилококка. Лейкоциты получают из 8-10 мл гепаринизированно (25 МЕ/мл) венозной крови после ее отстаивания или центрифугирования при 1000 об/мин в течение 10 мин, последующего забора плазмы и лейкоцитарной пленки, двухкратного отмы вания клеток средой 199 от плазмы и антикоагулянта. Взвесь лейкоцитов разводят до концентрации 10 кл/мл. Микробную взвесь готовят, производя смыв стерильным физиологическим рас вором с суточной культуры стафилококка, затем разводят до концентрации Ю микробных тел/мл. Смешивают по 0,2 мл взвеси лейкоцитов и микробной взвеси, что дает в каждой пробе постоянное соотношение микроорганизмов и лейкоцитов (100:1). В качестве объекта фагоцитоза используют живую суточную культуру St. ep dermidis штамм 9198. В 1-ю опытную пробу добавляют 0,1 мл исследуемой жидкости (нативной), во 2-ю опытную пробу добавяют о,1 мл той же жидкости, предарительно ина:ктивированной путем прогревания в течение 30 мин при +56°С. В контрольную пробу добавляют 0,1 мл контрольной сыворотки, представляющей собой смесь свежих сывороток, полученных не более чем за 3 ч до постановки реакции от нескольких здоровых доноров (не менее 3). Таким образом, концентрация опсонизирующей сьгооротки в каждой пробе составляет 20% (по объему). Каждую пробу тщательно перемешивают и инкубируют при 37 С в течение 30 мин, затем дважды отмывают от опсонизирующей сыворотки теплым (37 С) физиологическим раствором или средой 199, отбрасывают супернатант, из осадка каждой пробы готовят мазки. После этого продолжают инкубировать все 3 пробы в тех же условиях. Через 120 мин после начала первой инкубации из осадка каждой пробы вновь готовят мазки. Все мазки фиксируют в метаноле в течение 10 мин, затем окрашивают по РомановскомуГимза в течение 10 мин, что дает возможность дифференцировать в маз- ках, приготовленных после 120-минутной инкубации, лежшцие внутриклеточно жизнеспособные и умерщвленные микроорганизмы. Световая микроскопия мазков проводилась с использованием масляной иммерсии. В мазках, приготовленных из каждой пробы после первой (30 мин) и второй (120 мин) инкубации, подсчитывают следующие фагоцитарные показатели: процент фагоцитирующих нейтрофилов от общего числа, т.е. фагоцитарный индекс (ФИ 150 и ФИч2(5 ), среднее число фагоцитированнь х микроорганизмов в 1 фагоците, т.е. фагоцитарное число ( и ФЧ 20 ) коэффициент фагоцитарного числа (КФЧ), предетавлякщий собой отношение к ФЧ D , отражающее динамику показателей поглощения и завершенность фагоцитоза, индекс бактерицидности нейтрофилов (ИБН), т.е. отношение числа лежащих внутриклеточно умерщвленных микроорганизмов к общему числу фагоцитированных нейтрофилами микроорганизмов, выраженное в процентах. После «этого вычисляют опсонические индексы по следующим формулам.

Изобретение относится к медицине, может быть использовано Для определения активности заболеваний. Цель изобретения - повышение чуествитеЛьности способа. В две опытные и в одну контрольную пробу помещают смесь лейкоцитов и стандартного штамма стафилококка, В 1-га опытную пробу добавляют исследуемую жидкость, во 2-ю пробу добавляют ту же жидкость, но инактивированнуга. В контрольную пробу добавляют сыиоротку от здоровых доноров. Пробы перемешивают, инкубируют и дважды отмывают, Из осадка каждой пробы готовят мазки. Затем пробы продолжают инкубировать. Jl3 осадка каждой пробы вновь готовят Q мазки. Все мазки фиксируют, окрашисл вают, В мазках подсчитывают фагоцитарные показатели. После этого вычисляют опсонические индексы.