Способ гистохимического определения сульфгидрильных групп в биологической ткани Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к гистохимии для определения сульф- гидрильных грунп в биологических тканях.

Целью изобретения является иовьиле- ние точности сиособа за счет более полного окрашивания митохондрий и ядер клеток.

Пример I. Осун1еств.тяя гистохи.мическое определение сульфгидрильных групп в биологических тканях (печени, коже, мышцах). Для этого оргаиы фиксируют в 80%-ном эти.човом сни1)те, содержащем 1%-иую три- хлоруксусную кислоту в соотпон1ении :1, замораживают с ио.мо1цью уг.лекислоты или х.торэтила.

Полученные срезы ткани толщиной 8 - 10 мкм помещают в кювету с водно-эта- нольным окрашиваюи1им раствором комп.чек- са 1 - (хиноксалил-2 ) -З-метил-5- (/г-карбокси- фенил)-формазана с ртутью, который готовят смешиванием спиртового раствора фор- мазаиа концентраиии моль/л и водного раствора нитрата ртути концентрации мо,-1ь/л, рН 3,5. Выдерживают в термостате при 53°С в течение 6 ч. Промывают срезы в дистиллированной воде ( мин) 96°-ном, спирте ( мин), просветляют в ксилоле ( мин), заключают в бальзам.

Структуры, содержащие SH-груины, выяв .1ЯЮТСЯ в виде разрозненных редких гранул (1 лыбок) тeмнol o оранжево-желтого цвета в срезах мышц и светлого оранжево-желтого цвета, гуще распределенных в срезах кожи и печени.

Для проверки специфичности реакции (блокирование SH-групп) контрольные срезы предварительно обрабатывают раствором сулемы концентрации 10 - моль/л в течение 2 ч при 53°С, рН 7, затем выдерживают в окран1иваютем растворе ртуть- органического комнлекса в тех же условиях. Реакция специфична, так как блокированные ЗН-группы после обработки в окрашивающем растворе ртутьорганического комплекс не приобретают желто-оранжевую окраску, ирисущую выявленны.м сульф- гидрильным груннам.

Пример 2. Для осуществления гистохимического оиределения сульфгидрильных , групп в депарафинированных срезах гка- ни предварительно фиксируют органы неит. ральиым 10%-ным формалином или 80%- ным эти.товы.м спиртом в соотнои1ении 1:1. Затем за,1ивают органы в парафин, готовят срезы толщиной 5-7 мкм, деиарафи- цируют и нромывают этиловым спиртом, дистилированной водой. Срезы ткани помещают в кювету с водно-этаиольным раствором ко.мнлекса 1 - (хиноксалил-2 ) -3-метил- -5-(ге-карбоксифеиил)-формазана с ртутью.

Устанавливали рН 6, Т 56°С, время выдержки в растворе т 7 ч. Затем промывают в дистиллированной воде ( мин), 96°-ио.м спирте ( мин), просветляют в ксилоле, заключают в бальза.м.

Структуры, содержащие ЗН-гругщы, выявляются в виде редких гранул темного оранжево-желтого цвета в срезах мыщц и светло1 о оранжево-желтого цвета в срезах печени и кожи. На контрольных срезах проверяют сцепифичиость реакции, выдерживая срезы иосле блокировки SH-группы в окра1пивающем растворе ртутьорганического комц.чекса при рН 6, Г 56°С в течение т 7 час.

Формула изобретения

Способ гистохимического определения сульфгидрильных групп в био.тогической ткани иутем фиксации в растворе три- хлоруксусной кислоты с последуюц1,им окра- шивание.м в красителе, отличающийся тем, что, с целью повыщения тоности сиособа за счет более нолиого окрашивания митохондрий и ядер клеток, фиксатор дополнительно содержит 80-ный этиловый спирт нри еоотношении спирта и трихлоруксусной кислоты 1:1, а в качестве красителя применяют растворы формазаната ртути с рН 3.5-6,0, ири этом окрашивание проводят в течение 6-10 ч нри 50--56 С.

Изобретение относится к .медицине, точнее - к гисто.химии для определения сульфгидрильных групп в биологических тканях. Цель изобретения - повьипение точности способа за счет более полного окрашивания мито.хондрин и ядер клеток. Для этого, осуидествляя гистохимическое определение сульфгидрильных групп в биологических тканя.х (печени, коже, мышцах), органы фиксируют в 80%-ном этиловом спирте, содержаш.ем 1%-ную трихлоруксусную кислоту в соотношении 1:1, за.мораживают с помощью углекислоты или хлорэтила. Затем срезы окрашивают формаланатом ртути в течение 6-10 ч прн 50-56 С и рН 3,5-6,0. Структуры, содержащие SH- группы, выявляются в виде разрозненных редких грану, (|мыбок) темного орйнжево- желтого цвета в срезах мышц и гранул светлого оранжево-желтого цвета, гуще распределенных в срезах кожи и печени. U5 СО ел ел