Способ определения активности аргиназы мозга Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине а именно к клинической биохимии и неврологч-га.

Цель изобретения - повьппение чувствительности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом,

1 мл биологической жидкости обрабатывают раствором формальдегида в конечной концентрации 0,1-0,3 М (в зависимости от вида биологической жидкости). На колонки центрифугирования размером см (контроль и опыт) с набухшим сефадексом G-75 наносят по 1 мл раствора обработанной жидкости, колонку 2-3 раза про- ывaют 2 мп 2%-ным раствором хлористого калия, центрифугируют при 700g в течение 10-15 с. Далее, через опытную пробу пропускают 1 мл раствора ((содержит 100 мкм аминокислот) аргинина, после чего продукты реакции, оставшиеся на сефадексе, смывают 1 мл 15%-ной трихпоруксусной кислоты (ТХУ) (в контрольную пробирку вносят 1 МП водного раствора ар- гиьшна) о.

При определении мочевины в химические пробирки вносят 0,5 МП пробы (контроль и опыт), добавляют 2 г-ш рабочего раствора и ставят в кипящую баню на 15 мин, Затем пробу охлаждают в воде, измеряют оптическую плотность,на спектрофотометре СФ-24 при длине волны 525 нм.

Пример 1о 1 г ткани мозга (большие полушария) кролика гомогенизировали в 9 мл 0,01 М раствора трис-буфера с содержанием хлористого калия в конечной концентрации 130 мкм молей; центрифугировали 10 мин при 10 тыСоОб, в мин, надосадок обрабатывали 10%-ным раствором формальдегида до конечной концентрации 0,3 М1-ЮЛЯ/МП, 2 мл центрифугата наносили на колонку размером 5-1 см с приспособлением для центрифугирования; дважды (для удаления балласт ной аргиназы) промывали колонку раствором хлористого калия (240 - 250 мкмолей), центрифугировали, вносили водный раствор аргинина (100 мкмоль), промывали колонку 1 мл 15%-ного раствора ТХУ

Содержание мочевины в надосадочной жидкости определяли с использованием стандартных наборов фирмы (ЧССР). Активность фермента после обработки предлагаемым методом составила 2,1 едо/г ткани, Пример 2оВ крови здоровых

людей имеется только печеночно-по- чечная форма фермента. Исследуемая мозговая форма фермента не присутствует в крови, В то же время актив0 ность мозговой формы фермента удалось выявить в крови больных с нарушением мозгового кровообращения, у которых эта форма фермента переходит в кровь, что видно из следующих

5 данных.

Больной Б., 50 лет. Поступил с диагнозом острое нарушение мозгового кровообращения в бассейне правой средней мозговой артерии на фоне атеро0 С1шероза магистральных артерий головы. В неврологическом статусе: заторможенность, левосторонний гемипа- рез, двусторонний симптом Кернига, симптомы орального автоматизма, па5 тологические симптомы Бабинского слева и Оппенгейма справа.

Динамика активности мозговой формы аргиназы в крови: от 2 ед./л в первые сутки увеличилась до 8 ед./л

0 на 10-й день и до 22 ед./л на 15-й день от начала заболевания. На 29-й день, когда исчезли патологические пирамидные знаки и симптом Кернига, восстановилась двигательная активр. ность в пораженных конечностях, активность мозговой формы фермента не определялась

В случаях неблагоприятного течения активность мозговой формы фермен0 та изменялась незначительно.

Больная Ло, 63 г., находилась в НИИ неврологии АМН СССР с диагнозом острое нарушение мозгового кровообращения в бассейне левой средней моз5 говой артериио Левосторонний гемипа- резо Повторные тромбоэмболии мелких ветвей легочных артерий. Ревматический митральный порок сердца. Нарушение сердечного ритма,

0 В неврологическом статусе при поступлении отмечался сопор, симптом Кернига с 2-х сторон, нарушение дыхания типа Чейн-Стокка, сходящееся ко- соглазие, нарзтпение глотания, сниже5 ние чувствительности справа и npaBO - сторонний гемипарез, дисфагия. Вызывались патологические симптомы Бабинского с 2-х сторон, симптом Чураева слева, симптом Оппенгейма и Редлиха

справа, симптом Мари-Фуа справа. У больной выявлена сенсо-моторная афазия и грубое нарушение высших корковых функций.

Неврологический статус в течение 24 дней оставался без существенных изменений.

Активность фермента в крови менялась незначительно: на 3-й день 8 ед 13-й день 5 ед.; 23.день 6 ед.

Дальнейшее динамическое наблюдение 12 больных с острым нарушением мозгового кровообращения показало, что возрастание активности мозговой формы фермента происходит лишь в период выздоровления (до 60 ед,), тогда как в острой стадии заболевания активность фермента в сыворотке крови колеблется в пределах 2-12 ед./л, Увеличение активности МФФ происходит в биологических жидкостях лишь на фоне появления первых признаков положительной клинической динамики заболевания, а в некоторых случаях пред-25 концентрации 0,1-0,3 моль/л, раст- шествует им,

Таким образом, определение активности мозговой фор1Ф1 аргиназы в сывор аргинина наносят на колонку,

а продукты реакции смывают 10-15%раствором трихлоруксусной кислоты.

ор Т.Парфенова 6151/48

Составитель Н,Гуляева Техред Л,Сердюкова

Ко По

Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретеьшй и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушекая наб,, д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

13597424

воротке крови у больных острыми нарушениями мозгового кровообращения имеет прогностнчестшй характер.

0

5

0

Предлагаемый способ по точности превосходит известный, является более простым, занимает меньше времени и может быть рекомендован для диагностики неврологических заболеваний.

Формула изобретения

Способ определения активности аргиназы мозга путем нанесения образца биологической жидкости на сефадекс G-75, промывания раствором хлористого калия, введения раствора аргинина с посл едующим определетшем мочевины, отличающий ся тем, что, с целью повышения чувствитепьности и ускорения способа; биологическую жидкость предварительно обрабатывают раствором формальдегида до конечной .

концентрации 0,1-0,3 моль/л, раст-

вор аргинина наносят на колонку,

а продукты реакции смывают 10-15%ным

раствором трихлоруксусной кислоты.

Корректор ВаБутяга Подписное

Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - повьшение чувствительности и ускорение способа. Биологическую жидкость обрабатывают раствором формальдегида, наносят на сефадекс G-75, пpo ывaют и центрифугируют. Раствор аргинина наносят на колонку и затем колонку раствором трихлоруксусной кислоты. Способ может быть использован для диагностики неврологических заболеваний. СО СП СО -vj ю