Способ диагностики степени активности восполительного процесса Советский патент 1983 года по МПК A61K39/00 

а

00

ю Изобретение относится к медицин и может быть использовано в клинич кой иммунологии для экспресс-диагн тики определения степени активност воспалительного процесса. Известен способ определения имм нологического статуса больных путе выявления ранних (aKtHBHHx розеткообразующих лимфоцитов 1. Однако данный способ не позволя ет проводить раннюю диагностику воспалительного процесса 1. Наиболее близким к изобретению является способ диагностики активности воспалительного проДесса путем выявления розеткообразую1-дих нейтрофилов Г2 J. Однако известный способ не позволяет установить степень активнос ти воспалительного процесса. Целью изобретения является уста новление ранней диагностики степени активности воспалительного процесса. Указанная цель достигается тем, что согласно способу путем проведе ния реакци.и розеткообразования фор менных элементов крови, проводят реакцию розеткообразования с попул цией ранних нейтрофилов и при увел чении розеткообразующих нейтрофил в 1 мкл от 865 до 2050 диагностируют слабую, от 2050 до 4300 - сред нюю и при увеличении от 4300 до 9500 - тяжелую стадии воспаления. Способ осуществляется следующим образом. В селиконированную пробирку на б мл смеси фикол-уротраста плотнос тью 1,096 - 1,074 наслаивают 3 мл цельной крови и центрифугируют 15 мин при 0°С и 1500 об/мин. Обра зуются две границы раздела: первая между плазмой и смесью с плотностью 1,074, вторая между смесями с разными плотностями. В результате получают две чистые популяции клеток, т.е. лимфоцитарную и нейтрофильную. Взвесь нейтрофилов З-Ю клеток в 0,1 мл соединяют с 0,1 мл 2,5%-ного раствора эритроцитов барана (ЭБ). Инкубацию проводят при 4°С в течение 10 мин, осаждают ранние розеткообразующие клетки центрифугированием при 4°С в течение 15 мин и 1500 об./мин, фиксируют 3%-ным раствором глютаральдегвда Осадок наносят на предметное стекло сушат, фиксируют метанолом 3 мин, красят азурэозиномв течение 3 мин Считают в 5-7 разных полях зрения в иммерсионной системе микроскопа 200 нейтрофильЬых клеток. За розетку считают нейтрофил, присоединивший не менее трех ЭБ. Абсолютное содержание ранних спонтанных розеткообразуюадих нейтрофилов (Е - РОНа периферической крови рассчитывают по формуле Е - РОН - Р ГОС. 100 где L - количество лейкоцитов в 1 мм крови; I - процент нейтрофилов в формуле крови; г - процент роэеткообразующих ранних спонтанных нейтрофилов (РОН - Р) ; lOOlOO -показатели, приводящие результаты к объему 1 мкл крови. Пример. Определение содержания Е-РОН-П у практически здоровоГо человека. В иммерсионной системе микроскопа в 6-7 разных полях п элучено 30% разеткообразуюцих ранних нейтрофилов, содержание лейкоцитов в 1 мкл крови 5150, содержание нейтрофилов в формуле крови 56%. Подставив в формулу цифровые значения, получаем 5150.56-30 Е - РОН - Р 100-100 865,2 (в 1 мкл). Пример 2. Определение поздних розеткообразующих нейтрофилов (Е-РОН-П). Разделение клеток крови производили отстаиванием в течение 1-2 ч на градиенте фикол-уротраста с плотностью 1,090-1,094 с последующим переносом лейкоцитарной взвеси на двойной градиент фикол-уротраста 1,077-1,080 и 1,090-1,094. Центрифугировали взвесь при со скоростью 1000-1500 об./мин. Получили две чистые популяции клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную. Соединяли 3-10 нейтрофилов с 2,5%-ным раствором ЭБ и первую инкубацию производили при 4-lOOC в течение 15-20 мин, осаждали центрифугированием при 0-4 С, вторую инкубацию осуществляли в течение 1-4 ч при 8-12°С. I В связи с тем, что рецепторы ранних нейтрофилов являются весьма лабильными и легко разрушаются в зависимости от временного и температурного факторов, по сравнению с известным способом в предлагаемом способе исключены: отстаивание цельной крови в течение 1-2 ч; наслаивание на первый градиент и повторная часовая инкубация после осажаения розеткообразующих клеток. Введены: новый двухступенчатый градиент с новой плотностью (1,072-1,077 и 1,094-1,099); наслаивание на градиент целы1Ьй К)ови и кратковременная инкубация (5-10 мин). Длительная инкубация приводит к разрушению и потере ранней активности субпопуляции нейтрофилов. При хронических воспалительных процессах в 34% случаев имеет место иммунодефицит. Е-РОН П. В этих слу-г чаях популяция Е-РОН-Р является единственным критерием степени активности воспалительного процесса. Пример 3. Больная Г. поступила с диагнозом: мочекаменная болезнь, коралловидный камень верхней половины единственной левой половины L-образной почки. В предоперационном периоде проведен курс профилактической противовоспалительной терапии. Симптом Пастернацкого отрицатель ный. Мочеиспускание не нарушено. Ана лизы мочи и крови в пределах нормы. 29.12.81. В силиконированную бак териологическую пробирку на 3 мл раствора фикол-уротраста плотностью 1,094 и 3 мл раствора фикол-уроТрас та плотностью 1,072 наслаивают 3 мл крови, центрифугируют 5 мин при 0°С и 1000 об./мин. Б результате получа ют 2 границы раздела: первая - между раствором с плотностью 1,072 и плазмой, вторая - между двумя растворами с плотностями 1,072 и 1,094. Эри троциты оседают на дно пробирки. Получают два кольца, т.е. две чисты популяции клеток. Первая популяция лимфоцитарная, вторая - нейтрофильная. E-tOH-P определяли по предлага мому способу. Нейтрофилы по ЗЮ клеток в 0,1 глл соединяют с 0,1 мп 2,5%-ного раствора ЭБ. Инкубацию производили при 4°С в течение 5 мин Осаждают ранние розеткообразующие нейтрофилы центрифугированием при 0°С и 1000 об./мин в течение 10 мин Фиксируют 3%-ным раствором глютарал дегида, центрифугируют при комнатной температуре и 1000 об./мин в те чение 10 мин. Осадок наносят на предметное стекло, сушат, фиксируют метанолом 3 мин, красят азур-эозино 2 мин и считают в иммерсионной системе микроскопа в 5-7 полях 200 ней трофильных клеток. Содержание в 1 мк исследуемой крови Е-РОН-Р 586 (19%) Е-РРЛ-Р 682 (48%), Е-РОН-П 1111,3 (36%), лейкоцитов 4900, палочкоядер ных нейтрофилов 49 (1%), сегментеядерных нейтрофилов 2087 (62%), лимфоцитов 1421 (29%), моноцитов392 (8%). Клинических и лабораторных данных за активный воспалительный процесс нет. 15.01.82. Произведено оперативное вмииательство. Резекция левой половины L-образной почки. В послеоперационном периоде самочувствие удовлетворительное. Анализы крови и мочи в пределах нормы. Клинических данных за активный воспалительный процесс нет. Состояние соответствует тяжести перенесенной s:. операции., : 16.01.82. Состояние больной не ухудшилось. Температура тела нормальная. Тошноты и рвоты нет. Диурез достаточный. В легких хрипов нет, дыхаА1е везикулярное. Пульс 102 удара в минуту, ритмичный,АД 120/80 мм рт. ст. Анализ мочи: удельный вес 1005, белок 0,099%о, лейкоциты единичные. Анализ крови в П15еделах нормы. Клинических и лабораторных данных за активный воспалительный процесс нет-. 18.01.82. Получение ранних спонтанных розеткообразующих нейтрофилов такое же, только 3 мл крови наслаивают на 3 мл смеси фиколуротраста плотностью 1,099 и 3 мл фикол-уротраста плотностью 1,077. Центрифугируют 15 мин при 4С и 1500 обУмин. Инкубируют при 10°С в течение 15 мин, осаждают центрифугированием при 4°С в течение 15 мин R 1500 -об/мин, фиксируют 3%-ным раствором глютаральдегида и центрифугируют при комнатной температуре и 1500 об АЛИН. Содержание в 1 мкл Е-РОН-РЧ878,6 1(29%) , Е-РОЛ-Р 201,2 (1.6%), Е-РОН-П 1230,8 (19), лейкоцитов 8200, палочкоядерных нейтрофилов 164 (3%), сегментоядерных - 6314 (77%), лимфоцитов 1858 (19%), моноцитов 164 (2%). Содержание Е-РОН-Р увеличилось в 3,2 раза, содержание Е-РОН-П не изменилось. 23.01.82. Состояние больной без изменений. При этом в 1 мкл Е-РОН-Р 3068,9 187%, Е-РОЛ-Р 355 (76%), Е-РОН-П 2228,3 (63%), лейкоцитов 4250, сегментоядерных нейтрофилов 3527,5 (82%), лимфоцитов 467,5 (11%), моноцитов 170 (4%). Несмотря на то, что у больной имеются нормальные показатели мочи и крови и нет клинических данных за наличие воспалительного процесса, содержание Е-РОН-Р увеличилось в 5,2 раза, Е-РОН-П - в 1,9 раза. 25.01.82. Содержание в 1 мкл Е-РОЛ-Р 526,6 (38%), Е-РОН-Р 4675,3 (92%), Е-РОН-П 4573,8 190%), лейкоцитов 6600, сегментоядерных нейтрофилов 5087 (77%), лимфоцитов 1386 (21%), моноцитов 132 (2%). Таким образом, содержание Е-РбН-Р увеличилось в 7,9 раза, Е-РОН-П в 4,1 раза. Состояние больной удовлетворительное. 27.01.82., Потрясающий озноб с повыиением температуры до 39,5°С. Пе.ревязка: раневая поверхность чистая края раны не инфильтрированы, не отечны, гиперемии нет. Анализ мочи Удельный вес 1005, белок 0,099%, лейкоцитов до 100 в поле зрения, большое количество плоского эпителия. Слабость, боли в обларти почки Состояние больной тяжелое. Заключение: по. клиническим и лабораторным данным у больной установлена атака пиелонефрита оперированной почки, рекомендовано усилить антибактериал ную терапию. 29.01.82. Содержание в 1 мкл Е-РОЛ-Р 627,76 (27%), Е-РОЛ-П 1015 (29%), Е-РОН-Р (93%), Е-РОН-П 9282 (91%), лейкоцитов 1400 палочкоядерных нейтрофилов 1400 (10%), сегментоядерных 8820 (63%), лимфоцитов 3500 (25%), моноцитов 280 (2%). Состояние больной тяжелое Заключение: тяжесть состояния расце нивается как продолжающаяся атака гематогенного пиелонефрита оперированноЙ почки. При этом показатели Е-РОН-Р увеличены по сравнению с ис ходными данными в 16,2 раза, Е-РОЛв 8,3 раза. У больной наступило обострение хронической почечной недостаточности. Мочевина крови увели чилась с 23 до 80 мг%, креатинин крови - с 1,2 до 2,6 мг%. Проводилась интенсивная противовоспалитель ная терапия. 15.11.82. Состояние больной улуч шилось. Язык влажный, живот мягкий. Симптом Пастернацкого отрицателен. Боли значительно уменьшились. Температура субфебрильная. Анализ мочи Удельный вес 1015, белок 0,1%, лейкоциты до 50 в п/зр., эпителий в не большом количестве, мочевина 80 мг% креатинин 2,6 мг%. По даннь1М изотоп ной ренографии имеет место умеренно снижение скорости кровонаполнения сосудистого русла почки и скорости выведения гиппурана из верхних моче вых путей. Дефицит очистительной способности почки составляет 10% от нормы. Содержание в 1 мкл Е-РОЛ-Р 1418, (46%), Е-РОН-Р 5368 (83%), Е-РОН-П 5174 (80%), лейкоцитов 9950, сегмен тоядерных нейтрофилов 6467,5 (65%), лимфоцитов ЗО84,5 (31%), моноцитов 398 (4%). Имеется клинически положительная динамика. Показатели Е-РОНуменьшились почти наполовину, но по сравнению с исходными данными увеличены в 9,1 раза, Е-РОН-П в 4,6 раза Больной продолжена противовоспалительная терапия. 5.03.82. Состояние больнойудовлетворительное. Жалоб нет. Симптом Пастернацкого. отрицателен. Дизурии нет. Анализы мочи и крови в норме. Содержание мочевины снизилось до 46 мг%, креатинина - до 1,1 мг%. При этом содержание в 1 мкл Е-РОЛ-Р 186,2 (14%), Е-РОН-Р 670,6 (18%), Е-РОН-П 894,2 (24%), лейкоцитов 5400, сегментоядерных нейтрофилов 3726 в мкл (66%), лимфоцитов 1330 (25%), моноцитов 324 (6%). TaKtflvi образом, содержание Е-РОН-Р не только отражает наличие воспаления, но также с его помощью можно установить степень активности воспалительного процесса и эффективность проводимой терапии ибо, несмотря на то, что показатели лабораторных и клинических данных были в норме, тем не менее увеличение Е-РОН-Р на первйй день после операции в 3/2 раза свидетельствовало о наличии воспалительного процесса в легкой степени. На третьи сутки показатели. В-РОН-Р увеличились в 5.2раза, а также увеличились и показатели Е-РОН-П в 1,9.раза, что говорит об активизации процесса соответствующей средней тяжести. На десятые сутки показатели Е-РОН-Р увеличились в 7,9 раза, Е-РОН-П в 4,1 раза,, что свидетельствует уже о тяжелой стадии воспаления. На двенадцатые; сутки появились лабораторные и клинические данные, подтверждающие атаку пиелонефрита оперированной почки. На четырнадцатые сутки показатели Е-РОН-Р увеличины в 16,2 раза, Е-РОН-П - в 8.3раза, что соответствует продолжавицейся атаке пиелонефрита и тяжелой стадии. Назначение мощной противовоспалительной терапии привело к нормализации процесса. Таким образом, показатели Е-РОН (ранних) позволяют диагностировать наличие воспаления до клинических и лабораторных данных и пЪ степени увеличения показаний оценивать стадию воспалительного процесса. Способ подвергался тщательной проверке. Обработан метод количественного определения ранних спонтанных розеткообразующих нейтрофилов в сравнении с другими способами, проведен сравнительный анализ различных способов у 15 здоровых и 53 больных р заболеваниями почек. Исследования проведены в динамике Данные представлены в таблице. Таким образом, анализируя стадии течения воспалительного процесса, установлено, что предлагаемый способ позволяет уловить наличие воспалительного процесса до клинических проявлений, при эгсхл количество Е-РОН-Р -увеличивается в 5,5 раз. Показатели клинического анализа крови и Е-РОЛ-Р являются информативными только на высоте воспалительного процесса и не имеют диагностической ценности в ранней стадии, т.е. их показатели являются отражением кли

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА путем проведения реакции розеткообразования форменных элементов крови, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, проводят реакцию розеткообразования с популяцией ранних нейтрофилов и при увеличении розеткообразующих нейтрофилов в 1 мкл от 865 до 2050 диагностируют слабую, от 2051 до 4300 - среднюю и при увеличении от 4301 до 9500 тяжелую стадии воспаления.