Способ определения в крови гликозилированных соединений,содержащих кетоаминовую связь Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 G01N33/62 

Изобретение относится к биохимии и медицине и может быть использовано в эндокринологии для диагностики и контроля за ходом лечения диабета и галактоземии.

Цель изобретения - ускорение и по- вьппение чувствительности способа.

Способ осуществляется следующим образом,

К пробе цельной крови объемом 1 мл добавляют 0,2 М трихлоруксусную кислоту, вьщерживают в течение 1 - 1,5 ч на водяной бане, затем добавляют равные объемы 0,02 М тиобарбиту- ровой кислоты и концентрированной соляной кислоты, инкубируют на кипящей водяной бане в течение 6-7 мин, охлаждают пробы и измеряют интенсивность окраски на спектрофотометре при 432-433 нм.

Пример, КО,1 мл цельной крови добавляют 0,9 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 М трихлоруксус- ной кислоты. Смесь нагревают 1 ч 15 мин на кипящей водяной бане. Нос- .лё охлаждения к пробам добавляют ;0,5,мл 40%-ной трихлоруксусной кис- лоТы для осаждения белков. Пробы .центрифугируют 1Омин при 7000об/мин .. К 0,5 мл надосадка добавляют 0,5 мл концентрированной соляной кислоты и 0,5 мл 0,02 М тиобарбитуровой кислоты. Смесь инкубируют 6 мин на кипящей водяной бане. После инкубации из Меряют величину абсорбции известного комплекса (А ) при 432,5 нм, Так как в цельной крови присутствуют свободные сахара, необходимо определение величины абсорбции фона (), Определение абсорбции фона проводят аналогично определению величины абсорбции цветного комплекса.

Редактор И,Рыбченко Заказ 6398/34

Составитель Н,Гуляева Техред Л,Сердюкова

Корректор

Тирал 776Подписное

Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, , Раушская наб, , д,4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г,Ужгород, ул,Проектная, 4

исключая стадию нагревания на кипящей водяной бане в течение I ч (А.

цв.. А oHtf ) Расчет количества гликозилированного гемоглобина ведут по стандартной кривой фрук- тозоглицин на основе полученных значений величин абсорбции, Ацв. комл. 0,385; А Фока . - 0,087; А - 0,385 - 0,087 0,298, Количество гликозилированного гемоглобина 10%,

Изобретение обеспечивает ускорение и повьшение чувствительности способа в 2 раза.

Формула изобретения

Способ определения в крови глико- зилированных соединений, содержащих кетоаминовую связь, путем забора крови, добавления к пробе кислоты,проведения кислотного гидролиза нагреванием при , осаждения белков трихлоруксусной кислотой и их отделения, добавления тиобарбитуровой кислоты, инкубации и спектрофотометриро- вания, отличающий ся тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, в .качестве кислоты при проведении кислотного гидролиза используют трихлоруксусную кислоту в концентрации 0,2 М, нагревание проводят в течение l,25tO,25 ч, тиобарбитуровую кислоту берут в концентрации 0,02 М, дополнительно добавляют концентрированную соляную кислоту в соотношении гидролизованная проба тиобарбитуров-ая кислота - соляная кислота 1 : 1 г 1, нагревают в течение 6,5tO,5 мин, а спектрофото- метрирование проводят при длине волны 432,510,5 нм, ,.

Корректор А.Зимокосов

Изобретение может быть использовано для диагностики диабета и га- лактоземии. Цель изобретения - ускорение и повышение чувствительности способа. Смесь цельной крови и три- хлоруксусной кислоты нагревают.После охлаждения к пробам добавляют 40%-ную трихлоруксусную кислоту и центрифугируют. К надосадку добавляют соляную и тиобарбитуровую кислоты. Смесь инкубируют и измеряют величину абсорбции. Кроме того, опре- . деляют величину абсорбции фона и рас- считьшают количество гликозилирован- ного гемоглобина. i (Л ее О5 со ю