Способ определения криопротектора в биологических материалах Советский патент 1977 года по МПК G01N33/16 

1

Изобретение относится к области криобиологии и может найти применение в медицине.

Известен способ определения криопротектора в биологических материалах путем проведения реакции в кислой среде с подогревом и последующим определением плотности.

Целью изобретения является повышение точности определе1шя времени экспо1гарования и насыщения криопротектора в биологических материалах.

Sro достигается тем, что до начала анализа в исследуемый образец вводят этилендиаминтетраацетат в концентрации 2-5 ммолей на 3-5 мл образца, а перед определением плотности в пробы добавляют 0,5-1% тисбарбитуровой кислоты.

Способ осуществляют следующим образом.

К 3-5 мл биологической яаздкости, соде{жашей полиэтиленоксид, добавлякуг 0,1-0,3 мл этилендиаминтетраацетата из расчета 2-5 ммолей на конечный его об),ем. Смесь перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мчн в течение 15-2О мин для осаждения крупных частиц. После иеитрифугирования надосадок переносят в центрифужные пробирки, добавляют 0,2-0,3 мл 1ОО%-ной трихлоруксусной кислоты, встряхивают и центрифугируют 15-20 мин ,при ЗООО об/м После этого собирают 3-5 мл надосадка и переносят в центрифужные пробирки, куда добавляют 0,2-0,3 мл 5М НСБ и 1-2 мл О,5-1%-ной тиобарбитуровой кислоты. Пробы перемещивают и ставят на 15 мин на кипящую водяную баню. После этого пробы охлаждают и колориметрируют на фотоэлектроколариметре при 5-ом светофильтре.Рас чет количества полиэтиленоксида в биологических жидкостях проводят по калибровочной кривой.

При мер,В процессе перфузии почки раствором, содержащим подиэтилецоксид- 4ОО, из перфузата отбирают 5 мл Ж1щкости лобавляют О, Л мл этилендиаминтетраацета- та и центрифугируют в течение 15 мин при ЗООО об/мин. Затем отбирают 3 мл надосадка, переносят в центрифужные пробирки и добавляют 0,2 мл 1.00%-ной трихлоруксусной кислоты. Смесь перемешивают и затем центрифугируют в течение 15 мин при

ЗООО об/мнн. Недостаток переносят в химическиётёрШх:тойки« пробирки, добавляют в каждые 0,2 МП 5М ни и 1 мл 1%-ной тиобарбитуровой кислоты. Пробы кипятят на водяной бане в течение 15 мин , охлаждают и определяют оптическую плотность на фото- электроколориметре при 5-ом светофильтре. Оптическая плотность жидкости равняется 0,100, что соответствует по колибровочной кривой 60 мг полиэтиленоксида с мол.4ОО в данном объеме образца.

Предлагаемым способом можно в течение 45-50 мин с высокой точностью (погрешность ±0,5%)-определить количественное содержание прлиэтипеноксвда. Это позволяет в процессе проведения различных исследоввннй более точно определить время экспонирования и насьпиения материала криопротектором. Такое более точное понимание дина- МИКИ проникновения и насыщения биоматериалов криопротектором является решающим при разработке эффективных способов криокснсч рвирования ра.зл)тчных fMid.n-riiHtH.-KHx материалов, имеющих широкое иримс иение в области практической медицины и биопогки.

Формула изобретения

Способ определения криопротектора в биологических материалах путем проведения реакции в кислой среде с подогревом и последующим определением плотности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения времени экспонирования и насыщения криопротектора в биологических материалах, до начала анализа Ь исследуемый образец вводят этилендиаминтетраацетат в концентрации 2-5 ммолей на 35 мл образца, а перед определением плотности в пробы добавляют 0,5-1% тиобарбитуровой кислоты.