Способ определения уроновых кислот и 6-дезоксиальдогексоз в биологических жидкостях Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

со

00 О5

ее

10

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения моносахаридов.

Цель изобретения - повышение точности и обеспечение возможности определения альдопентоэ и альдогексоз в одной пробе.

Пример . Определение моносахаридов в крови.

В центрифужную пробирку наливают 0,45 мл 3%-ного раствора трихлорук- сусной кислоты-.и 0,05 мл крови из пальца и центрифугирзоот. К 0,2 мл безбелкового центрифугата добавляют 1,8 мл ортотолуидинового реактива. Пробу нагревают 8 мин при 100°С на водяной бане. Раствор охлаждают до комнатной температуры и помещают в спектрофотометрическую кювету толщиной 10 мм. Затем на спектрофотометре Измеряют световые плотности D; исследуемого раствора при трех длинах волн; 362 нм, А 500 нм и А 650 нм. Световые плотности определяют против 25 Контрольной кюветы с дистиллированной водой. Коэффициенты экстинции Е устанавливают, измеряя аналогичным образом световые плотности растворов глю-. Козы, ксилозы и глюкуроновой кислоты 30

13869032

известных концентраций |0,025 - 0,100 мг/мл).

Продукты реакции с ортотолуидино- вым реактивом альдогексоз (глюкозы, галактозы, маннбзы). дают три максимума поглощения на длинах волн 362 нм, Л 500 нм и Д 650 нм. Продукты реакции альдопентоз (ксилозы, ри- бозы, арабинозы) дают два максимума поглощения на длинах волн А 362 нм, и А 500 нм. Продукты реакции уроно- вых кислот (глюкуроновой и галакту- роновой кислот), а также 6-дезоксиаль- 15 догексоз (6-дезбксиманнозы и 6-дез- оксигалактозы) дают один максимум поглощения на длине волны 362 нм. Следовательно, концентрации альдогексоз, альдопентоз, уроновых кислот и 6-дезоксиальдогексоз можно опрёде20

лить по следующим формулам:

геисоз

пентоз

D 650

(1)

Я 6so гексоэ

Ш500 -С

А 5оо пентоз

(О

лить по следующим формулам:

D 650

(1)

Я 6so гексоэ

пентоз

Ш500 -С

А 5оо пентоз

(О

Изобретение относится к биохимии, к способам определения моносахаридов. Цель изобретения - повышение точности и определение альдопентоз, альдогексоз в одной пробе. Для этого в центрифужную пробирку с 3%-ной трихлоруксусной кислотой помещают пробу крови из пальца, центрифугируют и к безбелковому центрифугату добавляют ортотолуидиновый реактив. Пробы, нагревают 8 мин при 110 С на водяной бане, р-р охлаждают до 18-20 с и спектрофотометрируют при световой плотности D в трех длинах волн: А 362, 400 и 650 нм. Коэффициенты эк- стинции Е устанавливают, измеряя аналогично световые плотности р-ров глюкозы, ксилозы и глюкуроновой кислоты. 1 табл. с (

уроновых кислот+

52 JlLzl2xSJl SJLl§JL3j lJ ® iS A,..Li. | ЗЫ хроковых кислот -1-6 двзоксмильдогБксоз

40

t 6 лезок счалило-- I rekco3

геисоз neHToi УРОНОВЫХ кислот + 4 AeSokCHOAbAoreKCoa Концентрации альдогексоз, альдопентоз И уроновых кислот + 6-дезоксиальдогексоз соответственно, OAt5o DAsoo иВдзьг -световая плотность при длинах волн 650, 500 и 362 нм соответственно.

В таблице представлены данные содержания галактуроновой кислоты в искусственно приготовленной смеси мо- 45 носахаридов, полученные предлагаемым и известным способами.

.Данные, представленные в таблице подтверждают точность способа.

35 Формула изобре

Способ определения уронов и 6-дезоксиальдогексоз в био ких жидкостях путем обработк реагентом на альдегидную гру последующей спектрофотометри регистрацией продукта реакци личающийся тем, чт лью повышения точности спосо печения возможности определе догексоз и альдопентоз в одн бе, в качестве реагента испо толуидиновый peaKTJjp, а изме водят соответственно при 650 и 362 нм.

(3)

Формула изобретения

Способ определения уроновых кислот и 6-дезоксиальдогексоз в биологических жидкостях путем обработки пробы реагентом на альдегидную группу с последующей спектрофотометрической регистрацией продукта реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и обеспечения возможности определения альдогексоз и альдопентоз в одной пробе, в качестве реагента используют 0- толуидиновый peaKTJjp, а измерения проводят соответственно при 650, 500 и 362 нм.

Ортотолу- идиновый

Карба- эольный (по из вестному способу)

13,4 13,9

0,6

а.з

0,781

0,64

Не достоверна

0,90