Способ определения глюкозы в биологических жидкостях Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

О)

с

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГгаОКОЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ путем фотометрического определения комплекса, образовавшегося при повьшенной температуре в реакщ и глюкозы с ортотолуидином в КИС.1ТОЙ среде, о т л и чающий.ся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, рН реакционной среды доводят до 3,253,35 путем добавления к ортотолуидиновомУ реактиву водного раствора аммиака.

to

ю

00 Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при определении глюкозы в крови и других биологических жидкостях. Известен способ определения глюк зы в биологических жидкостях путем фотометрического определения комплекса глюкозы с сртотолуидином в кислой среде при повышенной температуре, по KotopOMy глюкозу в крови определяют следующим образом: в пробирку наливают 0,9 мл 0,18 моль/л (3%) раствора трихлоруксусной кислоты вьщувают в нее 0,1 мл крови, перемешивают и центрифугируют, 0,5 мл центрифугата переносят в другую про бирку, добавляют 4,5 г-ш ортотолуиди нового реактива из набора для определения глюкозы НПО Биохимреактив и помещают в кипящую водную баню на 8 мин, после чего охлаждают водо проводной водой до комнатной темпер туры. Оптическую плотность образова шегося цветного комплекса измеряют на фотоэлектроколориметре при оранж вом или красном светофильтре (590650 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контроля на реактивы, который ставят так же, как опытную пробу, но вместо крови берут 0,1 мл дистиллированной воды. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставят так же, как опытную, -но вместо крови бе рут 0,1 мл эталонного раствора глюко-. зы,с известной концентрацией fl3Расчет ведут по формуле . . концентрация глюкозы в опытной-пробе, ммоль/л; концентрация глюкозы в эталонной пробе, ммоль/л; оптическая - плотность опытной пробы; оптическая плотность эталон ной пробы. Известный способ имеет недостаточ высокую чувствительность. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Указанная.цель дост1ггается тем, что согласно способу определения глюкозы в биологичес;сих. жидкостях путем фотометрического определения комплекса, образовавшегося при повышенной температуре в реакции глюкозы ортотолуидином в кислой среде, рН рев:,;-, .с шой среды доводят до 3,253,35 путем добавления к ортотолуидиновому реактиву водного раствора аммиака. . Пример 1 (макровариант). В пробирку наливают 0,9 мл 0,18 моль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в.нее 0,1 мл крови, перемеашвают и через 5 мин центрифугируют. 0,5 мл центрифугата переносят в другую пробирку и добавляют 4,5 мл модифицированного ортотолуидинового реактива, который готовят перед опытом смешиванием ортотолуидинового реактива из набора для определения глюкозы НПО Биохимреак ив 25%-ным водным раствором аммиака (12:1 по объему). npo6Hpky помещают в кипящую водяную баню на 8 мин, после чего охлаж;дают водопроводной водой до комнатнол температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на фотоэлектроколориметре при оранжевом или красном светофильтре (590-650 нм) в Кювете с толщиной слоя 10 мм Против контроля на реактивы, который ставят так же, как опыт, но вместо крови берут дистиллированную воду. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставят так же, как опытную, но вместо крови берут эталонный раствор с известной концентрацией глюкозы. Расчет ведут по формуле (1) . При Е,„ 0,120; 0,060; С, - 2,0 ммоль/л л. OJ20 , ,, , ° о ОбО ммоль/л. Аналогично определяют содержание глюкозы,в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче. Пример 2 (микровариант), В пробирку наливают О, 15 мл О, 18 ммоль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в нее 0,01 мл крови, перемешивают и через 5 мин центрифугируют. 0,1-мл супернатанта переносят в другую пробирку и. добавляют 0,7 мл модифицированного ортотолуидинового реактива, который готовят перед опытом смешиванием ортстолуидинового реактива для определения глюкозы из набора НПО Биохимреактив воднЬм раствором аммиака (12:1 по

3

) . Пробирку помещают в кипящую ьодяиук:, банк, на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на микроколориметре при красном светофильтре (615 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против коьТроля на-реактивы, который ставят так же, как и опытную пробу, но вместо крови берут 0,01 мл дистиллированной воды.

Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставят так же, как опытную, но-вместо крови берут 0,01 мл эталонного раствора глюкозы с известной ее кон284

центрацией. Расчет ведется по формуле (1) .

При Едп 0,060; С„ 6 ммоль/л; ЕЗ 0,240

„ 0,060 , . ,

о О ° - Аналогично определяют содержание глюкозы в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче.

Влияние рН реакционной среды на величину оптической плотности подтверждается экспериментально при сследовании эталонных растворов глюкозы,с концентрацией 5,55 ммоль/л.

Предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность определения глюкозы в биологических жидкостях на 36-37%.