Способ изоэлектрического фокусирования амфолитов Советский патент 1988 года по МПК G01N30/02 C08J5/20 

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам разделения белковых смесей, и может найти применение в производстве узких фракций ам- фолитов носителей, аминокислот и для разделения петидов и белков по их изоэлектрическим точкам.

Целью изобретения является увели

7922

фракциях 4-9 и глутаминовая кислота во фракциях 9-13.

Пример4. На колонку, содержащую 9 мл аниоиообменной смолы Сепа- рон HEMAQ,находящейся в ОН -форме, наносят 5 мл раствора, содержащего по 0,5 ммоль глутаминовой кислоты, серина и гидрохлорида лизина. Прово

Изобретение относится к способу изоэлектрического фокусирования амфолитов и может быть использовано в хрома ографической технике для разделения белковых смесей. Изобретение позволяет увеличить разделяющ по способность с одновременным обессолива- нием (разделение амфолитов на фрак- ции, отличающиеся по рН на 1-2). Эффект достигается использованием в качестве твердой фазы катионитов в водородной форме и анионитов в гид- роксильной форме и десорбцией амфолитов с катионитов раствором щелочи и с анионитов раствором кислоты. 1 ил.

чение разделяющей способности и ynpo-jg втеснение 0,1 М раствором НС1, щение технологии разделения.

На чертеже изображены диаграммы оптического поглощения и рН фракций.

Пример. В колонку объемом 10 мл с катионообменной смолой Агаро-15 ЗОЙ 4В, содержащей IО мкмоль/мл SOj- групп в протонированной форме, вносят 50 мл раствора, содержащего 0,1% амфолитов-носителей (для изоэлектри- ческого фокусирования в диапазоне рН 4-7), представляющих собой смесь полиаминополикарбоновых кислот с изо- электрическими точками, лежащими в диапазоне рН 3,5-10,0, 0,5 мг яично- го белка и затем вытесняют фракции 6 мМ раствором .

Пример2. В 17-миллиметровую колонку с катионообменной смолой SP- Сефадекс С-25 в протонированной форме, емкость по Na ионам 2,5 ммоль/г сухой смолы (полисахарид с сульфопро- пильными фрагментами), вносят 5 мл раствора, содержащего 5% амфолитов- носителей диапазона рН 4-9 и 1% NaCl. Вытесняют 10 мМ раствором КОН ив диапазоне рН 4-9 собирают 10 фракций по 7 мл каждая. Фракции свободны от

20

25

30

35

при этом лизин находится в эффлюент с 6,0 до 12,7 мл, серии с 10,6 до 24,8 мл, глутаминовая кислота с 24 до 29,8 мл.

Пример 5 (сравнительный). Опыт осуществляют аналогично описан ному в примере 4, но нанесенную про бу далее элюируют раствором глутами новой кислоты и лизина (по 0,75 мМ каждый). Лизин находится с 5 по 60 м эффлюента, серин с 15 по 28 мл и гл таминовая кислота с 26 по 60 мл.

Из результатов видно, что по известному способу лишь первая часть лизина может быть получена в чистом виде, все остальные компоненты постоянно присутствуют в смеси.

П р и м е р 6 (сравнительный). Опыт осуществляют аналогично описан ному в примере 4, но в качестве сор бента используют анионит в CHjCOO - форме. Эффлюент содержит кроме смес амфолитов (лизина, глутаминовой кис лоты и серина) и ионы элюента.

Формулаизобретени

солеи, имеют электропроводность ниже 11000 при изоэлектрическом фокусировании создают градиенты рН в диа-40 ионообменных смолах в колонке с поспазоне 1-2 единиц рН.

П р и м е р 3. В 9-миллиметровую колонку с анионообмениой смолой Сепа- рон HEMAQ в ОН -форме, емкость по С1

ледующей десорбцией и отбором фракций амфолитов, отличающий- с я тем, что, с целью увеличения, разделяющей способности и одновременионам 300 мкмоль/мл (сферический по- д обессоливания, в качестве ионолигликольме гакрилатный гель с четвертичными аммониевыми группами) вносят 5 мл раствора, содержащего О ,5 ммоль лизина, серина и глутаминовой кислоты. Вытеснение проводят 100 мМ НС1, собирая фракции по 1 мл. Лизин присутствует во фракциях 1-4, серин во

50

обменны с смол используют катиониты в водородной форме или аниониты в гид- роксштьной форме и десорбцию амфолитов осуществляют водным раствором кислоты при использовании в качестве сорбента анионита или основания - при использовании катионита.

втеснение 0,1 М раствором НС1,

при этом лизин находится в эффлюенте с 6,0 до 12,7 мл, серии с 10,6 до 24,8 мл, глутаминовая кислота с 24,1 до 29,8 мл.

Пример 5 (сравнительный). Опыт осуществляют аналогично описанному в примере 4, но нанесенную пробу далее элюируют раствором глутаминовой кислоты и лизина (по 0,75 мМ каждый). Лизин находится с 5 по 60 мл эффлюента, серин с 15 по 28 мл и глутаминовая кислота с 26 по 60 мл.

Из результатов видно, что по известному способу лишь первая часть лизина может быть получена в чистом виде, все остальные компоненты постоянно присутствуют в смеси.

П р и м е р 6 (сравнительный). Опыт осуществляют аналогично описанному в примере 4, но в качестве сорбента используют анионит в CHjCOO - форме. Эффлюент содержит кроме смеси амфолитов (лизина, глутаминовой кислоты и серина) и ионы элюента.

Формулаизобретения

Способ изоэлектрического фокусирования амфолитов путем сорбции на

ледующей десорбцией и отбором фракций амфолитов, отличающий- с я тем, что, с целью увеличения, разделяющей способности и одновремен о о обессоливания, в качестве ионо

обменны с смол используют катиониты в водородной форме или аниониты в гид- роксштьной форме и десорбцию амфолитов осуществляют водным раствором кислоты при использовании в качестве сорбента анионита или основания - при использовании катионита.

0.30.20.1Составитель В.Мкртычан Редактор Т.Парфенова Техред М.Ходанич Корректор О.Кундрик

Заказ 1575/46

Тираж 847

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

РН

в

Y6

20

О f

Подписное