Способ определения кетонов в биологическом материале Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 G01N30/00 

00 00

ас

00

Изобретение относится к гигиене труда и промышленно-санитарной химии а именно к методическим аспектам определения органических веществ класса кетонов в биологическом материале.

Цель изобретения дополнительное определение в пробах циклогексанона и метилизобути,акетона при одновременном повышении чувствительности спо- соба.

Способ осзпцествляется следующим образом.

Проводят хроматографическое определение кетонов - ацетона, метнлизо- бутилкетона и циклогексанона в биологическом материале - крови, моче, гомогенатах кожи и органов путем отбора 2 мл мочи, 1,О мл сыворотки крови, получения 5 мл водного экстракта органа, термостатирования в герметично закрытой емкости при 98 + 4°С в течение 25-30 мин, хроматографиро- вании полученной паровой фазы с пламенно-ионизационным детектированием на колонке 300 х 0,3 см, заполненной хроматоном N-AW с 15% апиезона L, при температуре колонки 130 С, испарителя 190-210 С, скорости газа-носителя (азота) 40 мл/мин, водорода 25- 30 мл/мин, воздуха 250-300 мл/мин с последующим количественным их анализом методом абсолютной калибровки.

Впервые достигнута возможность количественного раздельного определения 3 кетонов с использованием фазы хроматона N-AW с 15% апиезона L, достигнут предел обнаружения ацетона, равный 0,25 мкг/мл; циклогексанона и метилизобутилкетона 1,3 мкг/мл.

1Впервые разработаны условия получения термодинамического равновесия системы жидкость - пар в стеклянной герметичной емкости объемом 30 мл

при термостатировании в течение 25- 30 мин и температуре 98 + 4 С при исследовании малых объемов биологической пробы (1,0 Ш1 сыворотки крови,

2МП мочи и гомогената органов).

За время анализа., идентичное изве- стиому способу (7 мин), получают количественные параметры не одного ацетона, а 3 кетонов, следовательно, азработано более эффективное решение Точность разработанного способа +22,7

Пример . Пробу сыворотки кров объемом 1 мл помещают в стеклянную «мкостъ на 30 мл, добавляют 1 мл дис- Гиллированной воды. Емкость герметично завинчивается крьпикой с отверстием и силиконовой (самоуплотняющейся) прокладкой, помещается в термостат при 100 С, Туда же помещается шприц для отбора паровой фазы. Через 25 мин 5 мл паровой фазы, взятой из замкнутой емкости над сывороткой, вводят в испаритель хроматографа с пламенно-ионизационным детектированием. Разделение производят на колонке 300 X 0,3 см, заполненной хроматоном N-AW с 15% апиезона L при температуре колонки 130 С, испарителя 200 С, скорости газа-носителя азота 40 мл/мин, водорода 30 мл/мин, воздуха 300 мл/мин. Концентрацию кетонов в сыворотке крови определяют с помощью градуировочного графика, выражающего зависимость высоты пика от количества компонента (берут за основу сыворотку контрольных животных) . Количественному определению любых исследуемых образцов (сыворотки крови, мочи, паренхиматозных органов, кожи) предшествует градуировка прибора по аналогичным контроль- ным образцам сред или органов, в которые вводят стандартные растворы. Пределы массового содержания веществ в сыворотке крови при построении гра Дуировочных графиков для ацетона 0,5-25 мкг, циклогексанона и метилизобутилкетона 3-30 мкг. Чувствительность хроматографа при определении кетонов в сыворотке крови (моче, органах) 1-10 А.

Расчет концентраций кетонов ведется по соответствующему графику, в пересчете на мг/мл для жидких сред (сыворотка крови, моча). Построение градуировочного графика и анализ про проводится в абсолютно одинаковых условиях, что позволяет не прибегать к сложным расчетам. Для определения каждой концентрации проводят не менее 5 параллельных измерений, из которых рассчитывают средние значения. Содержание кетона в сыворотке крови определяют, исходя из концентраций его в пробе, помещенной в .замкнутую емкость (30 мл), где создаётся термодинамическое равновесие между жидкой и газовой фазами, и объема паровой фазы, введенной в испаритель хроматографа (5 мл).

Количество вещества m (мг) в средах, соответствующее измеренному зна Iчению высоты пика (h), находят по

31388803

градуировочным графикам h f(m). Количество вещества M (мг/мл) в объеме анализируемой пробы находят по формуле

Органы Содержание мг/мл (для сыворотки крови и мочи), мкг/г (для органов и кожи)

Изобретение относится к гигиене труда и промышленно-санитарной химии, касается определения органических веществ класса кетонов в биологическом материале. Цель изобретения - дополнительное определение в пробах циклогексанона (ЦГ) и метилизобутилкетона (МБК) при одновременном повьшении чувствительности способа. Для этого образцы биологического материала

« 1

где V - объем анализируемой пробы, мл.

В результате исследований (при , нанесении на кожу животных циклогек- санона и метилизобутилкетона на уровне порога острого действия) получены следующие средние величины содержания кетонов в образце сьшоротки крови по 5 параллельным измерениям мг/мл:

Ацетон

Метилизобутилкетон

Циклогексанон

0,9 + 0,1 0,021+0,004 0,023+0,007

Предлагаемый способ позволяет определять в сыворотке крови кетоны в пределах: цетон 0,25-25 мкг/мл, метш1изобутш1кетон и циклогексанон 1,5-30 мкг/мл.

В таблице представлены данные о среднем содержании кетонов в исследованных средах и органах, полученные при общих режимах термостатирования и хроматографирования (термостатиро- вание при 100° С в течение 30 мин и хроматографирование при температуре колонки 130°С, испарителя 200 С, скорости газов: азота 40, водорода 30, воздуха 300 мл/мин соответственно) .

(1)

10

15

Формула изобр. етения

Способ определения кетонов в биологическом материале путем получения водного экстракта исследуемого образца, термостатирования, отбора парообразной пробы с последующим газожидкостным хроматографированием, отличающийся тем, что, с целью дополнительного определения циклогек- санона и метилизобутилкетона при одновременном повьпиекии чувствительности способа, термостатирование проводят при температуре 98+4 С в течение 25-30 мин, при хроматографиро- вании используют фазу хроматона N-AW с 15% апиезона L при температуре испарителя 190-210 С и скорости пропускания воздуха 250-300 мл/мин.