Способ определения активности соласодиндегидрогеназы Советский патент 1988 года по МПК G01N33/68 

113

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине, биотехнологии, энзимологии, токсикологии.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет снижения денатурации фермента, для чего в качестве растворителя компонентов среды используют смесь диметилсульфо- Ксида и хлороформа.

Способ осуществляется следующим |образом.

: Исследуемый материал (экстракт) наносят на поверхность столбиков поли акриламидного геля и проводят элект- : офорез в щелочной системе буферов. Ло окончании процесса гели извлекают лз стеклянных трубок и переносят в лробирки, содержащие 15 мл смеси ди- 1четилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены . Соласодин в концентрации0,4 мг/мл , 1 мг/мл еназинмета- О,1 мг/мл сульфат

I Нитротетразолиевьш I синий0,4 мг/мл

Зона белка, проявляющего соласоДиндегидрогеназную активность, проявляется на геле в виде темной полосы в результате образования фармазана

Пример 1. 5,О г биомассы гриба Aspergilus ochr, гомогенизируют в ультразвуковом дезинтеграторе УЗДИ-1 В 50,0 мл охлажденного до 2-3 С, 0,05 М трис-НС1-буфера рН 7,4 до пол- рого разрушения мицелия- гриба. Бес- слеточный экстракт получают центрифу- 1гированием гомогената в угловом роторе центрифуги К-24 при 16000 об./мин в течение 10 мин. Полученную надосадоч12

ную жидкость (бесклеточный экстракт) в количестве 100,0 мкл наносят, на поверхность столбиков полиакриламид- ного геля и проводят электрофорез. По окончании форетического разделени белков гриба Aspergilus ochr., о чем судят по фронту движения ли;цирующего красителя (бромфенолового синего), гели извлекают из стеклянных трубок и переносят в пробирки, содержащие 15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены все необходимые для протекания реакции дегидрирования соласодина компоненты, а также реактивы для чисто химического выявления активности тетразолиевым методом.

При инкубации гелей в темноте при 30-35 С зона белка, содержащая сола- содиндегидрогеназу, выявляется темно зоно формазана через 20-25 мин.

Применение предлагаемого способа повышает растворимость соласодина, что делает возможным четкую регистрацию активности соласодиндегидрогена-. зы, тем самым значительно повьш1ая точность анализа.

Формула изобретения

Способ определения активности соласодин,цегидрогеназы путем электрофореза в полиакриламидном геле, предварительно инкубированном в среде, содержащей соласодин, кофермент фе- назинметасульфат и нитротетразолиевый синий, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет снижения денатурации фермента, в качестве растворителя компонентов среды используют смесь диметилсульфоксида и хлороформа.

Изобретение относится к биохимии, касается медицины, биотехнологии, энзимологии, токсикологии. Цель изобретения - повьппение точности способа определения соласодиндегидроге- назы. Для этого исследуемый материал (экстракт) наносят на поверхности столбиков полиакриламидного геля и проводят электрофорез в щелочной системе буферов. Затем гели переносят в пробирки, содержащие 15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены: соласодин в концентрации 0,4 мг/ /мл, НАДФ 0,1 мг/мп, феназинмета- сульфат 0,1 мг/мл, нитротетразолевый синий 0,4 мг/мл. Зона белка, проявляющего соласодиндегидрогеназную активность, проявляется на геле темной о полосой в результате образования формазана. (Л