Способ получения средства, ингибирующего агрегацию тромбоцитов Советский патент 1990 года по МПК A61K31/557 C07C405/00 

Изобретение относится к фармации, п частности к способу получения лекарственной субстанции простагландинов (Г1Г) f которая может быть использована-для лечения и профилактики тромбозов и тромбоэмболических осложнений, а также в аппаратах искуственно- го кровообращения.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и упрощение способа.

Это достигается получением субт станции простагландинов, иигибирую- щей агрегация тромбоцитов, из полие- новой кислоты путем инкубирования с ферментом и биостимулятором в буфере, добавления спирта, фушьтрации, экстракции и хроматографии.

Пример 1. 50 мг аракид оновой 20 ную способность гладкой мускулатуры

мощью ФЭК-56, соединенного с самописцем КСП-4. ПГ-субстанцию применяют в концентрации 50 мкг/нп, АДФ-1

«10 %, эндотоксин 10 мкг/мл.

После предварительной инкубации тромбоцитов с ПГ-субстанцией в течение 3-5 мин АДФ-индуцированная агрегация достоверно снижается; если степень АДФ-индуцированной агрегации интактных тромбоцитов принять за 100%, то для тромбоцитов, преинкуби- рованных с ПГ-субстанцией, она уменьшается почти вдвое. Эндотоксининдуцированная агрегация после инкубирования с ПГ-субстанцией полностью подавляется.

Другой биологический тест - влияние целевого продукта на сократитель

Изобретение относится к фармакологии. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа. Инкубируют смесь ара- хидоновой кислоты, о-антигена сальмонелле зной культуры и супернатант гомогената пузырьковых желез барана. В реакционную смесь добавляют этиловый спирт,, После экстракции сухой остаток помещают на колонку и элюи- руют. Затем хрОматографируют и полученный сухой остаток растворяют в спирте. § (Л с

кислоты в виде натриевой соли эмульгируют в фосфатном буфере рН 8, добавляют 25 мг о-антигена S.typhlmu- rlum и, супернатант из 10 г грмогене- зата пузырьков11гх желез барана (-соотношение арахидоновая кислота гомо- генезат - о-антиген 1:500:0,5), Смес аэробно инкубируют 20 мин при 37 С. Для выделения целевого продукта в реакционную массу добавляют этиловый сгртрт, азкстрагируют этилацетатом, сухой остаток помещают на колонку с кремниевой кислотой и элюируют О бензолом 2) серным эфиром, З) этилацетатом, и) метанолом.

Фракцию № 3 поворотно хроматогра фируют на колонке с кремниевой кислотой, , используя системы: Л) хлороформ гексан - уксусная кислота 5:45:0,А; в) хлороформ - уксусная кислота 50:О,А; с) метанол - хлороформ - уксусная кислота 5:45:0,4. Фракцию С упаривают досуха и сухой остаток, растворенный в спирте, используют в дальнейшем для фармакологических испытаний. Полученную субстанцию растворяют в изотоническом растворе и проводят испытания на биологически объектах.

Исследование полученной субстанции простагландинов на функциональную активность кровяных пластинок. Опыты проводят в условиях ин витро с использованием обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП), полученной из стабилизированной цитратом натрия 3,8% крови здоровых доноров. Агрегацию тромбоцитов регистрируют фотометрическим методом Борна Г5 с по

5

0

5

0

5

0

матки крысы показал увеличение тонуса матки, усиление.амплитуды и частоты сокращений Тестирование осуществляли на изолированном роге матки крысы, сокращение регистрировали на кимографе.

Преимуществами предложенного способа является:

Повыщение выхода субстанции простагландинов, иигибирующей агрегацию тромбоцитов, за счет использования биостимулятора о-антигена SоtyphImurium; в прототипе выход целевого продукта 7-15%, в предлагаемом способе 45-50%J удешевление процесса за счет снижения расхода сьфья биокатапизатора; в прототипе на 1-1,5 г полиеновой кислоты требуется 3-6 л белкового гомогената, в предлагаемом способе 500-750 г;

упрощение способа: в прототипе время инкубирования составляет 2-4 ч, в предлагаемом способе 20 мин;.9 прототипе в качестве прекурсора использована дефицитная эйкоза-8,11,14- трееновая кислота,-в предлагаемом способе - доступная арахидоновая кислота.

Формула изобретения

Способ получения средства, инги- бирующего агрегацию тромбоцитов путем аэробного инкубирования полиненасыщенной жирной кислоты с ферментом с последующей очисткой целевого продукта методом хроматографии, о т- личающийся тем, что, с целью повьппеиия выхода целевого про31392673

дукта и упрощения способа за счет барана, в инкубационную смесь допол- сокращения числа стадий, в качестве нительно вносят о-антиген S.typhlmu- полинеиасыщенной кислоты берут ара- rlum при соотношении арахидоновая хидоиовую кислоту, фермента - супер-. , кислота: супернатант; О-антиген натант гомогената пузырьковьпс желез 1:500:0,5.