Способ индикации вирусов Советский патент 1991 года по МПК G01N33/533 A61K39/12 

со со

00

) Изобретение относится к вирусологии. Цепь изобретения - ускорение индикации вирусов. Стафилококк обрабатывают иммунной сывороткой. Готовят мазок, на который наносят исследуемый вирус, содержащий материал, обрабатывают его иммунной противовирусной сывороткой и видоспецифичес- KSIM иммуноглобулином, меченным флю- оресцеинизотиоционатом. По специфическому свечению на поверхности стафилококка осуществляют индикацию вируса. Проведение способа сокращается до 3-4 ч.

00

ел

ii foCipe fiint (ттиосчтс. к нирус о- логин. Г tr icTfiocTM к ди1 11остике си- pycHiiix инфекций, напримпр ротапирус ной.

Це.п1)1о изобретения янляется ускорение индикации н Иру сон методом ф.гао- оресцирующих антител.

Способ осущсстпляется следующим образом. Стаф1шококк предварительно обраба1ъшают 1п-1мунпой сывороткой. На предметном стекле потопят мазок, на KoTopbiii наносят исследуемым вирус- содержап(ий матернял, обрабатывают иммунной протипопирусной сывороткой и шодоспецифическим l мyнoглобулином, меченным фтооресцеинизотиоционатом (ФРГГЦ). Индикпцию вируса осуществляю по гпе1 ифич : скому свечению на поверх ностк стафилококка.

il р и м е р 1. Стафилококк сухой, содрржащи белок Л, произподстпа Ле- ииг градского ННИЭМ им. Пастера, ре- путратируют в 2 мл дистншпфоранной воды. (),1%-ную взвесь стафшюкокка смешивгиот с равным объемом кроли- Ч1..ей иммунной сыворотки к ротлвирусу, ( i- piriaioT па 30 мин в термостат при 37 J, и периодичпскч встряхивают.

сенс:ибш)изиропанную антителами взвесь стафилококка трижды отмывают в 2 мл физиологического раст- нора NaCl, отделяя раз взвесь клеток 01 раствора цеитриф-угиропа- нием при 3000 об/мип течение 10 мни После ттого доводят взвесь стафило- к.жка до иервовачально концентрации (0,1%) тем же раствором KaCl, тщател но встряхивэюг, петлей переносят на обезжиренное разграфленное предг-штно стекло, делают по 8 мазков на каждом из них; подсушивают на воздухе, фик- скруют в ацетоне 15 мин при .

На фиксированные препараты наносят каплю 1%-ного pacTBoiia бычьего ci.iBOpoToquoro альбумина на днстиллир панной воде помещают во влажную камеру при на 30 мин, 10 мин промывают в дистиллированной воде, подсушивают на воздухе. Эта маинпуля гция направлена на предотвращение не-- специфической сорбции вируса н анти- Tfijn поверхностью стафилококка.

На приготовленные пбоазом препараты наносят кагиио исследуемо- югo мат ериала, инкубируют во влажной K.siMepe при 30 мин, 10 мин прг лшшают Б дистиллированной воде, подсутаивают Jia . iloroM нанося

0

5

0

11

0

5

0

5

0

5

1;я11,ии) иммунной сыворотки морской к ротавирусу и манипуляции с преп; ратом (инкубация, промывка, сушь я) повторяют. На выс 111епные стек- J7a наносят каплю меченного ФИТЦ имму- нoглoбyJП нa против глобулинов морс- Koii свинки в смеси с родамином, стекла помещают ма 30 мин во влажную камеру при с последующей отмывкой в течение 20 мин и выс тиивают 1-2 мин на воздухе.

Индикацию вируса осуществляют в люминесцентном микроскопе типа ЛЮМАМ или MJ1 под иммерсионньЕм объективом (х90) при светофильтрах, определяемых характером флюорохромов в соста- г г . поминесцирующей сыворотки. Время иид1псации вирусов ме более 4ч.

Пример 2. На препарат, содержащий комплекс - стафилококк-кроличья иммунная сыворотка к ротавирусу, ианосят известны ротавирус, нм- мучкую сыворотку морской свинки к ротлвирусу и соответствую1д1тй антиви- 1-гммуноглобулин, меченный флюо- р .--сцеин11:штиоционат (ФИТЦ) в смеси с родамином (положительньп; контроль), Опеь ыцип осуществляются как в приме- Р(; 1 Время индикации ротав1фусов не более 3 ч.

Пример 3. На препарат, со- д. комплекс - стафилококк- крг;;п1чья иммунная сыворотка к ротави- русу, }1аиосят среду 199, 1шмунмую сыворотку морской свинки и соответ- ствушщш а1ггив1адоной исммуноглобулин, меченный ФИТЦ, в смеси с родамином (отрицательный контроль). Операции осуществляют как в примере 1. Время индикации не более 3 ч.

Положительными, т.е. содержащими вирус, считают препараты с зеленым свечением на поверхности отдельных или группы стафилококков. В пробах, не содержащих ротавирусный антиген, стафилококк окраш1шается красновато- оранжевым цветом.

В предлагаемом v:noco6e поставленная цель - ускорение исследований по индикации вируса с помощью МФА - достигается за счет исключения ста,ции репродукции вируса в инфицированной культуре клеток, I .a что обычно затрачивается около 2 сут. Проводящиеся взамен этого операции со стафилококком занимают не более 3-4 ч.

Упрощение исследовани) достигается 3-) счет исключения работы с куль31Л930854

турой клеток, требующрй специальныхпппьпвает, кром тог-о, и стандарт- условий, в частности обеспечения сте-ность исследовагшй.

рильности, наличия оборудования, пи-Формула изобретения тательньсх сред, реактивов. Операции Способ индикации вирусов, вклюсо стафилококком не требуют специапь-чающий тганесение на чувствительный

ных условий, их можно проводить в лю-субстрат вируссодержащего материала

бой латоратории и в полевых условиях.и меченного флкюресцеинизотиоционатом

К достоинствам способа относитсяиммуноглобулина, отличающийвозможность заготовки впрок и длитель-щс я тем, что, с целью ускорения инного хранения консервированного пре-дикации, в качестве чувствительного

парата стафилококка, чего нет присубстрата используют фиксированные

использовании культуры клеток. Ис-клетки стафилококка штамм Cowan I,

пользование коммерческого препаратчобработанные иммунной сывороткой.