Б пассажей она обусловливает падеж 80-г-90% животных , После этого определяют наличие .серологических связей данного штам ма с основными патогенными культур ми международного набора PiEEet, д чего вирулентный штамм патогенного стафилококка испытывают в реакции агглютинации на стекле с типовыми адсорбированными сыворотками, полу ченными к основным патогенным куль турам этого набора. Вирулентный дл мышей штамм патогенного стафилокок имеющий общие антигены с. основными культурами международного набора (в титре 1:1280 и выше), используют для приготовления вакцин, для чего суточную бульонную культуру ста|филококка засевают во флаконы с бульоном и инкубируют 16 ч при 37°С Бульонную культуру центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, готовят суспензию в физиологическом растворе, содержащую 6 млрд, микроб ных тел в. 1 мл, добавляют к ней фор малин в количестве 1%, выдерживают 24 ч при комнатной температуре, периодически взбaлтывaя, после чего делают посевы на МПА для контроля стерильности. Приготовленной вакциной иммуниfзируют кроликов, для этого вакцину вводят в краевую вену уха в нарастающих дозах (0,5-1,0:1,5-2,0 мл извести густотой 1 млрд. микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту) по 4 дня подряд с последующим трехдневным перерывом (всего 4 цикла). На 9-12-ый день после последней инъекции делают пробное взятие крови, сыворотку отделяют, декомплементируют получасовым прогреванием при 56°С и определяют тит агглютининов к гомологичному штамму в реакции агглютинации на стекле. Если титр 1:1280 и выше, то кроликов обескровливают. Затем проверяют способность иммуносыворотки реагировать со всеми культурами международного набора, с этой целью полученную сыворотку с титром 1:2560 проверяют в реакцииагглютин ции с эталонными штаммами патогенно го стафилококка Staph. anreus (1,М,1И 6,7,9,10,11,13,14,15,16, 17,18, СК-3) и штаммами непатогенно го стафилококка Staph.epidermidis (52186, 52260) международного набора PiCeet. Все основные и В0 допол нительных культур этого набора работают в титрах от 1:160 до 1:2560, а .непатргенные культуры полученной сыворотки не агглютинируются. Затем проводят диагностику иссле емых, микроорганизмов. Содержание патогенных стафилококков в молочных продуктах с непользованием иммунной сыворотки, полученной по предлагаемому способу, определяют непрямым методом люминесцирующих антител. Препараты для люминесцентного исследования готовят из молока, сливок, сметаны. Материал наносят на хорошо обезжиренное . предметное стекло пастеровской пипеткой. После подсушивания .на воздухе препараты фиксируют в течение Л О-15 мин путем погружения в стаканчик со смесью Никифорова. Перед использованием вработе устанавливают рабочее разведение люминесцирующей сыворотки и проверяют ее специфичность. Рабочее разведение сыворотки устанавливают путем определения красящего титра предельного разведения сыворотки, при котором происходит достаточно яркое иммуноспецифическое окрашивание клеток патогенных стафилококков. Рабочее разведение обычно устанавливают в два раза ниже красящего титра . На фиксированные и высушенные мазки, приготовленные из образцов молочных продуктов, наносят полученную иммунную сыворотку в рабочем разведении (1:64). Препараты помещают на 15-20 мин во влажную камеру. Затем капли иммунной сыворотки осторожно стряхивают, а мазки промывают физиологическим раствором и высушивают на воздухе. После этого на препараты наносят по каплям лкилинесцирующую сыворотку в ра.бочем разведении (1:32). Окраску производят в течение 15-20 мин во влажной камере. По окончании окраски мазки тщательно промывают физиологическим раствором, подсушивают и просматривают под люминесцентным микроскопом. Для снятия неспецифического свечения фона в препаратах из молочных продуктов люминесцирующую сыворотку перед нанесением на смешивают с раствором бычьего альбумина, окрашенного родамином в соотношении 1:1. Для , оценки интенсивности свечени;я используют четырехкрестовую систему. Результат исследования считают положительным в случае яркой люминесценции по периферии микробной клетки. С помощью иммунной сыворотки, полученной предлагаемьом способом, в ис-. следуемом материале четко опредёлились стафилококки, относящиеся к группе патогенных, тогда как непатогенные стафилококки не реагировали с приготовленной.иммуносыйороткой. Предлагаемый способ получе.ния иммунной сыворотки позволяет расходовать на работу, как минимум, в 13 раз меньше кроликов, значительно сократить количество питательных сред и времени, затрачиваемого на исследо59вание, а также проводить анализ продуктов непосредственно с помощью люминесцентной микроскопии, без количественных высевов и выделения чистых культур стафилококков, что особенно важно при работе в условиях производства молочных .продуктов. Формула изобретения Способ получения иммунной сыворотки для выявления патогенных стафилококков в молочных продуктах, включающий отбор штамма стафилококка, обладающего признаками патогенности, 97876 с последующей иммунизацией отобранным штаммом кроликов, забором крови и отделением сыворотки, отличающ и и с я .тем, что, с целью упрощения способа,иммунизацию проводят штаммом стафилококка, обладающим одновременно признаками патогенности, вирулентности и антигенной общности со всеми штаммами стафилококin ° Международной коллекции. Источники информации принятые во Внимание при экспертизе 1.Светина В,В. Серологическое типирование стафилококков. Канд. дисс. М., 1974.
