Способ биохимического контроля за структурой популяций рыб Советский патент 1988 года по МПК A01K61/00 

00

со

00

00 ел

Изобретение относится к способам выявления биохимической разнокачест- венности популяций рыб, может быть использовано в научных целях и в пра тическом рыбоводстве, например при изучении редких и исчезающих видов, при подборе пар производителей и т.д.

Целью изобретения является сохра- нение рыб живыми при отборе проб и ;упрощение способа.

Использование способа позволяет |не травмировать рыб при отборе проб, а также получить ее/прижизненные био химические характеристики, необходимые для изучения структуры популяций Способ дает возможность изучить био- |химические характеристики одной и |ТОЙ же рыбы на-разньк этапах онтоге- неза и в разном физиологическом сос тоянии, осуществить подбор пар про- |изводителей с соответствующими ха- |рактеристиками, не травмируя рыб, 1чТо особенно важно для рыбоводной 1пракТики.

; Способ осуществляется следующим |образом.

I Пойманнзто рыбу в районе спинного 1плавника протирают ватным тампоном,, смоченным в дистиллированной воде, затем тупым скальпелем соскабливают 1пробу слизи (50 мг) и помещают в по- |лиэтид новую центрифз жную пробирку, в которую запивают дистиллированную воду (0,5 мп). Экстрагируют сутки |при при постоянном перемешива- нии, после чего пробу центрифугируют :и надосадочную жидкость используют для электрофоретического анализа. Элект рофоретическое фракционирование бел- iKOB проводят в 7%-ном полиакрилайид- ном геле, в щелочной системе буферов с рН 8,9. Выявление ферментативной активности малатдегидрогеназы (ВДГ) осуществляют в инкубационном растворе следующего состава; 1 объем 1М малата натрия +1 объем 0,2 М фосфатного буфера, рН 7,4 + 1 объем .0,1%-ного раствора нитросинего тетразолия + 1 объем 0,1%-ного раствора никотинадениндинуклеотида + 1 объем 0,005 М хлористого магния 1 объем хлористого натрия + 0,1 мг/мл феназинметасульфата. Выявление производится в термостате при 37°С в течение 2ч.

Существенное отличие слизи от об- гразцов,которые ранее использовались

для анализа, состоит в том,.что она не является какой-либо тканью, а представляет собой продукт жизнедеятельности организма. Однако слизь обладает характеристиками, позволяющими использовать ее для проведения биохимического контроля за структурой популяций рыб,

Пример. Рыбу в районе спинного плавника протирают ватным тампоном, смоченным в. дистиллированной воде. Затем тупым скальпелем соскабливают пробу слизи (50 мг) и помещают в полиэтиленовую центрифужную пробирку, в которую заливают дистиллированную воду (0,5 мл). Пробу экстрагируют в течение суток в термостате при при постоянном перемешивании, после чего ее центрифугирувот и надосадочную жидкость используют для электрофорети- ческого анализа. Электрофоретическое- фракциопирование белков проводят в 7%-ном полиакриламидном- геле, в щелочной системе буферов с рН 8,9, Выявление ферментативной активности ВДГ осуществляют в инкубационном растворе следуюп5его, состава: 1 объем 1 М малата натрия + 1 объем 0,2 М фосфатного буфера, рН 7,4 + 1 объем О, 1.%-но- го раствора нитросинего тетразолия + + 1 объем О,-1 %-ного раствора никотинадениндинуклеотида + 1 0,005М хлористого магния + 1 объем хлористого натрия О,1 мг/мл феназинметасульфата. Выявление ферментативной активности ВДГ производят в термостате при 37°С в течение 2ч.

Как в мьшцах, тик и в слизи выявляются одни и те же изоферменты МДТ, различающиеся лишь по интенсивности их окрашивания.

При окрашивании экстрактов слизи после фракционирования красителем на общие белки (Кумасси голубой Р-250 в концентрации 0,25%) на проте- инограммах можно обнаружить более полутора десятков компонентов,

Таким образом, помимо фракций, обладаюш;их малатдегидрогеназной активностью и составляющих лишь небольшую часть белков слизи, имеется еще целый ряд фракций, которые можно использовать для изучения популяцион- ной структуры рыб.

Формула изобретения

Способ биохимического контроля за структурой популяций рыб, вклгочаю31393375

щий отбор у исследуемых ры,б пробы,популяций рыб по полученным данным, экстрагирование из нее белка, центри-отличающи йся тем, что, фугирование экстракта с получениемс целью сохранения рыб живьми надосадочной жидкости, фракционирова -боре проб и упрощения способа, в канне растворенных в ней белков мето-честве исследуемой пробы используют дом электрофореза в цолиакриламидномслизь, которую берут с поверхности геле и выявление малатдегидрогеназ- кожи рыб, а для экстрагирования бел- ной активности тетразолиевым мето-ка слизь запивают дистиллированной дом с последзтощей оценкой структуры IQводой.

Изобретение относится к ихтиологии и направлено на сохранение рыб и упрощение способа биохимического контроля за структурой популяций рыб. Для этого у исследуемых рыб в -качы стве пробы отбирают слизь с поверхности их тела. Из полученной пробы путем залития ее дистиллированной водой экстрагируют белок. После чего полученную смесь (слизь + вода) подвергают центрифугированию и надоса- дочную жидкость исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле, выявляя малатдегидрогеназную активность (МДГ) тетразолиевым методом. Полученные таким образом данные позволяют выявить изоферменты МДГ, характеризующие структуру популяции. t