Способ дифференциации BacILLUS аNтнRасIS и BacILLUS ceReUS Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии.

Цель изобретения - ускорение способа.

Пример. Исследуемый штамм выращивают на агаре Хоттингера (рН 7,2) в течение 18 ч при 37°С. Клетки двукратно отмывают физиологическим раствором и готовят суспензию вегетативных клеток на К ;Nа-фосфатном буфере 1/15 М (рН 7,2). Для определения ферментативной активности используют следугацие соединения, мл: фосфатный буфер (prt 7,2) 2,3; 0,05%-ный раствор хлористого магния 0,2; 0,05%- ный раствор 2,6-дихлорфенолиндофено- ла (2,6-ДХФИФ) 0,1; 25-109микр. клеток/мл суспензии клеток исследуемого штамма 0,2; 0,1 М раствор субстрата (яблочная кислота) 0,2, которые добавляют в одну пробирку.

Измерение оптической плотности - проводят в кювете спектрофотометра после внесения в нее 3 мл исследуемого раствора.

Учет реакции ведут в течение 5 мин. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 600 нм против контрольной пробы, содержащей 0,2 мл дистиллированной воды. Ферментативную активность выражают в мкмолях восстановленного 2,6-ДХФИФ за 1 мин на 1 млрд. клеток. Для пересчета полученных данных в эксперименте применяют коэффициент молярной экстинк- ции для 2,6-ДХФИФ - 21«10б

Определение активности малатдегидрогеназы (МДГ) проводят у трех вакцинных штаммов В. anthracis СТИ-1, 34F2, вторая вакцина Ценковского, у 26 виС5

ю

СО

со

рудентных штаммов возбудителя сибирской язвы, выделенных в различных регионах страны и от разных объектов (люди, животные, почва) , а также у I 1 музейных штаммов В, cereus.

Показатели активности ВДГ у В. cereus и 6. anthracis приведены в таблице.

Использование предлагаемого способа позволяет сократить время анализа до 5 мин (l-З сут - в известном способе) при определении лецитиназной активности, а также дать количественную оценку активности ЩГ

Формула изобретения Способ дифференциации Bacillus anthracis и Bacillus cereus путем выращивания исследуемых культур на агаре Хоттингера с последующим определением ферментативной активности, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, из агаровой культуры готовят суспензию с концентрацией 25 10° микр.клеток/мл и определяет малатдегидрогеназную активность и при ее значении от 0,0036 до 0,0181 мкМ/мин/млрд дифференцируют Вас 11 us anthraci s, а при значении от 0 до 0,0005 мкМ/мин/млрд дифферен цируют Bacillus cereus.

изобретение относится к медицинской микробиологии, Цель изобретения - ускорение способа. Способ включает выращивание микробной массы на агаре Хоттингера, приготовление суспензии в концентрации 25«10 микробных клеток в 1 мл, внесение ее в реакционную смесь. По восстановлению 2,6-дихлорфенолиндофенола в присутствии яблочной кислоты определяют активность фермента малатдегидрогеназы спектрофотометрически и при ее значении от 0,036 до 0,0181 мкМ/мин/млрд дифференцируют В. anthracis, а при значении активности от 0, до 0,0005 мкМ/мин/млрд. - В. се reus. 1 табл.

Вакцинный

Слабовирулентный

Высоковирулентный

0,0042+0,0003 0,0089+0,0016 0,0095+0,0016. 0,0181+0,0031