Способ получения иммунодиагностикума гепатита Советский патент 1990 года по МПК A61K47/00 A61K39/395 

00 laii

IН

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и касается способа получения иммунодиагностику- ма гепатита В.

Целью изобретения является повыше- ние экономичности способа.

Пример. Ослицу весом 250 кг подвергают карантину (дq 30 дней) и исследованию крови на бруцеллез, а затем производят кровопускание из яремной вены кровИ в объеме 500 мл, для стимуляции иммунной системы.Че- рез 15 дней после стимуляции осуществляют подкожное введение в области около/шньпс, лопаточньпс и бедренных лимфatичecкиx узлов 250 мкг НВ -антигена с полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) в соотношет -и 1:20 - всего 6 точек. Соединение НВд-антигена с ПЛФ производят при 37-40 С до получения стойкой водно-масгяной эмульсии.

По достижении максимального титра антител, определяемого высокочувствительным иммунорадиометричес.ким ме- тодом (ориентировочно по времени через 15-16 дней), производят повторное кровопускание в объеме до 500 мл с аналогичной целью и введение 300 мкг антигена в 8 точках аналогичных областей лимфатических узлоз. Аналогичным- способом определяют достижение максимального титра (ориентировочно по времени,через 15-16 дней), осуществляют стимуляцию забором крови в том же объеме и.введение 350 мкг антигена в 8 точках аналогичных областей лимфатических узлов. На этом первый этап иммунизации животного заканчивают. Достигаемый титр анти

тел, определяемый методом встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) составляет 1/256.

Гатем после периода стабилизация иммунной системы в течение 60 дней осуществляют второй этап иммунизации животного, включающий 3 последовательные стадии введения 150, 200 и 250 мкг антигена в А,6 и 8 точках областей лимфатических узлов в последовательности первого этапа иммунизации (с промежуточным контролем максимального подъема титра и стимуляцией в тех же объемах крови). Относительное снижение объемов (количеств) вводимого антигена связано t уменьшением массы животного после введения ЦАФ на первом этапе иммунизации. На & гом второй этап иммунизации животно5

ЗА

д

5 5

0

0 5

152

го заканчивают. Достигаемый титр антител, определяемый методом ВИЭФ, составляет 1/102 4-1/2048.

В связи с увеличением титра период стабилизации иммунной системы удлиняется и достигает 200 дней, после чего осуществляют третий этап иммунизации, включающий три последовательных стадии введения 200, 300 и 250 мкг антигена в 6, 6 и 6 точках областей лимфатических узлов в последовательности первого .этапа иммунизации (с промежуточным контролем максимального подъема титра и стимуляции в тех же объемах крови). При этом при первом введении антигена (200 мкг) его соединяют с ПАФ в соотношении 1:10 (по методике первого этапа) и вводят в лопаточные лимфатические узлы животного.

На этом иммунизацию животного заканчивают. Достигаемый титр антител 1/8000-1/10000 (метод ВИЭФ).

По завершении этапа иммунизации от животного забивают необходимое количество крови (до 1 л), центрифугируют и отделяют от форменных элементов. Часть отделенной сыворотки в необходимом количестве помещагат, в ванну с донным охладителем, поддерживающим температуру сыворотки в ин- тервале 3-5 С. В ванну опускают перфорирующее устройство с заправленным К.ОНЦОМ твердого носителя в виде ленточной фильтровальной бумаги (ГОСТ 7584-77) и производят протягивание его с одновременной перфорацией и последующими сушкой при +20 С и резкой на мерные отрезки. Мерные отрезки носителя, импрегнированного антителами, герметизируют в эластичные емкости .пакеты) в присутствии активного поглотителя влаги. Оставшуюся часть сыворотки хранят при -40 С,

При полезной емкости ванны 125 см и использовании при импрегнировании носителя 0,5 объгма сыворотки число рабочих доз достигает 1 «10 .

Приготовление рабочего разведения иммунодиагностикума гепатита В при массовых обследованиях осуществляют элюнрованием антител, помещая мерный участок носителя в физраствор в соотношение 4 мл последнего на 1 см импрегнированного носителя при 18-22 С в течение 30-40 мин, при этом мерный участок носителя регламентирован числом исследований.

1А03415

Стоимость дозы.диагностикума сое- осуществляют после достижения максн- тавляет 0,00002 руб, в то время как мального титра антител, повторную по известному способу стоимость дозы : реиммунизацию осущестш.яют соответст- составляет 0,04 руб.венно через 60 дней в два трехстадийных этапа последовательным введением Формула изобретения нарастающих лоз антигена в 4,6 и 8

точках аналогичных лимфоузлов соотСпособ получения иммунодиагностику- ветственно и через 200 дней последо- ма гепатита В путем многократной им- Q нательным введением возрастающих кэ- муниза ции ослов очищенным HBg антиге- личеств антигена в 6,6 и 6 точках ном, забора крови, получении .сыворот- аналогичных областей лимфоузлов,при- ки, отличающийся тем, чем на первой стадии второго этапа что, с целью повьппения экономичности, дополнительно вводят антиген с пол-иммунизацию осуществляют трехстадий- t5 ым «адъювантом Фрейнда в соотноше- но с введением на первой стадии нии 1:10 в лопаточные лимфоузлы и гена с полным адъювантом Фрейнда в после достижения титра антител 1/8000- соотношении 1;20 в области околоуш- 1/10000 в реакции встречного иммуно- ных, лопаточных и бедренных лимфоуз- электрофореза полученной сьюороткой лов в 6 точках, на второй и третьей; 20 бумажный носитель При стадиях - 1введением антигена в 8 точ- одновременной прокатке и перфорации ках аналогичных областей лимфоузлов, его под споем сыворотки при темпера- при этом каждую последующую стадию туре 3-5 С,

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии гепатита В,, и касается способа получения иммуно- диагностикума. Производят импрегнацию носителя непрерывно-последовательным перемещением в антисыворотке с титром :антител 1/8000-1/10000. В процессе импрегнации производят одновременно прокатку и перфорацию носителя под слоем антисывороткй при температуре последней Осуществляют сушку, резку и герметическую упаковку импре- гнированного носителя в эластичные ем- кости в присутствии активного влаго- поглотителя. Элюцию требуемой дозы иt мyнoдяaгнQCтикyмa производят с определенного участка носителя, огранит ченного перфорацией. Способ позволяет снизить себестоимость имуннодиагности- кума и повысить точность его дозирова- ния путем повьшения адсорбционной ем- 5g кости носителя. , ,