Питательная среда для выращивания РSеUDомоNаS aeRUGINoSa-продуцента алкалоидов фенилтиазолового ряда Советский патент 1988 года по МПК C12N1/20 C12P1/04 C12P1/04 C12R1/385 

о.

Од

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано .при производстве алкалоидов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Для приготовления питательной среды используют, г/л: (NH)SO. 5-14,3; молочная кислота 10-13,5; глюкоза 20-40; 1-2; MgS04-7H20 0,3-0,7; NaCl 1-7; водный зкстракт биоконцентрата дрожжей Candida sp. 10-50; дистиллированная вода до 1 л. Устанавливают рН среды 8,0. Ферментацию Ps.aeruginosa проводят при 34±1,0 С при перемешивании в течение 24-30 ч. Выход алкалоида 15,5-40,9 мг/л среды. (Л

О1

ел

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве алкалоидов.

Цель изобретения - повышение выхда целевого продукта.

Для приготовления среды используют экстракт биоконцен грата дрожжей Candida sp. ng-4, которьй получают следуюирм образом.

Биокондеитрат получают из отходо зернопроизводства.

В состав среды для выращивания дрожжей входят следующие компоненты, г/л:

Рисовая шелуха

(NH4).aS04 . MgS04 7НеО

NaCl

. Водопроводная вода

100 3

0,7 0,5 1

0,1

1 л (рН 5,6-6,0)

стерилизуют среду при 100-110°С, 1 атм в течение 20 мин.

Выращивают дрожжи Candida ps. П§ в 100-литровом ферментере при заполнении средой в количестве 50,0 л, внесении посевного материала 10-15% перемешивании 500 об/мин, подаче воздуха 0,5 л/мин, температуре 30,0 t1 °С в течение 24 ч.

Готовый биоконцентрат представляет собой густую суспензию, содержащую в среде .аминокислоты, мг%; Цистин0,6

Лизин.5,3

Гистидин3,1

Аргинин4,4

Аспарагин-серин5,0

Триптофан :2,7

Вали н4,5

Лейцин5,1

Глицерин3,-2

Глютаминовая кислота 7,9 Треонин4, 1

Аланин4,9

Тирозин3,2

Метионин1,4

Сумма аминокислот составляет 55,5 мг %.

Для приготовления водного экстракта биоконцентрата берут 500 мл биоконцентрата и 500 мл водопроводной воды. Кипятят 30 мин и фильтруют через ватно-марлейый фильтр. Фильтрат 2 раза разводят водопроводной водой и стерилизуют при 1 атм 15 мин.

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

Аминокислотный состав водного экстракта биоконцентрата следующий, мг %: Цистин.2,1

Лизин 1,6

Гистидин 1,2

Аргинин0,9

Серин1,9

Аспарагин1 2

Валин1,8

Триптофан2,9

Глютамииовая

кислота4,1

Треонин1,0

Аланин3,9

Тирозин2,3

Метионин1,3

Лейцин3,3

Гли ци н1,7

Сумма аминокислот составляет 30,1 мг %,

Пример 1 . Культуру хранят до посева на скошенном МПА в пробирках, залитых вазелиновым маслом при 3-4°С, пересевают петлей в пробирке с бульоном и выращивают на круговой качалке при 150 об/ьшн в течение 48ч. Выращенной культурой инокулируют 40 колб со 100 мл питательной среды. Посевной материал в объеме -4 л вносят в 100-литровый ферментер с 40 л питательной среды. Ферментацию проводят при 34t1,, перемешивания 400 об/мин в течение 24-30 ч.

Питательная среда имеет следующий состав, г/л:

Сульфат аммония Молочная кислота Глюкоза

, MgS04 7Н20 NaCl

Водный экстракт биоконцентрата дрожжей Candida sp. ng-4

5,0 10,0 20,0 1,0 0,3 3,0

10,0

Дистиллированная вода До 1 л (рН

8,0)

Выход алкалоида составляет 15,5t i4,3 мг/л среды.

П р и м е р 2. Питательная среда имеет следующий состав ингредиентов,г/л:

Сульфат аммония9,6

Молочная кислота11 7

I Глюкоза30,0

Ki; P041,5

MgS04. 7niO0,5

Хлористый натрий-5,0

13

Водный экстракт био- концентрата25,0

Ди с тил лир ова н на я водаДо 1

л (рН

8,0)

Ферментация проводилась в тех же условиях, что в примере 1.

Выход целевого продукта составляет 36,4±10,5 мг/л среды.

П р и м е р 3. Питательная среда содержит следующий состав ингредиентов, г/л:

Сульфат аммония14,3

Молочная кислота13,5

Глюкоза40,0

КН4Р042,0

7HiO0,7

Хлористый натрий7,0

Водный эстракт био-

концентрата .50,0

Дистиллированная

вода До 1 л (рН

8,0

Режим ферментации такой же, как и в примере 1.

Выход алкалоида составляет 19t ±5,5 мг/л среды.

При использовании известной среды выход алкалоида 5,0-20,0 мг/л среды при длительности ферментации не менее 72 ч.

Использование данной питательной среды позволяет ускорить получение

1

5

)

1406155

алкалоида при сохранении стабильности алкалоидообразования, а при оптимальном и максимальном соотноше- с НИИ компонентов превышается выход целевого продукта.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания Pseudomonas aeruginasa-пррдуцента алкалоидов фенилтиазолового ряда, содержащая сульфат аммония, молочную кислоту, глюкозу, фосфорнокислый од- нозамещенный калий, сернокислый маг-. НИИ и дистиллированную воду, о т л и- чающаяся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, она дополнительно содержит хлористый натрий и водный экстракт биоконцентрата дрожжей Candida pp. ng-4 при следующем количественном соотнощении компонентов, г/л:

Сульфат аммония5,0-14,3

Молочная кислота10,0-13,5

Глюкоза20,0-40,0

1 Фосфорнокислый

однозамещенный калий 1,0-2,0 Сернокислый магний0,3-0,7

Хлористый натрий3,0-7,0

Водный экстракт биоконцентрата дрожжей Candida sp. ng-410,0-50,0

Дистиллированная вода До 1 л