Способ получения элимоклавина Советский патент 1981 года по МПК A61K35/78 

культур данного института (Claviceps sp. ср. II) и Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (Claviceps sp. ИБФМ-Р-401). Морфологические и физиолого-биохимичеCKire признаки гриба Claviceps sp. ИБФМ-Р-401 Колонии на глюкозокартофельном агаре на 14 сутки культивирования достигают 50 мм в диаметре, белые, обратная сторона колоний пурпурного оттенка, пигмент такого же цвета диффундирует в агар. Растущий край - ровный, новерхность колонии - войлочная. Центральная часть колонии с возрастом приобретает бел ево-пурпурный оттенок, становится бархатистой. При культивировании на лабораторной среде (Т2) состава, г: сахароза 100; DL-acиарагин 5; Са(ЫОз)2-4Н20 1; КН2РО4 0,25; MgS04-7H2 0,25; дрожжевой экстракт 0,1; КС1 0,12; FeS04-7H2O 0,015; агар-агар 20; вода водопроводная до 1 л; НС1 до рН среды 5,2 штамм образует белый воздушный мицелий и дает конидпальное спороношение типа Sphacelia. Конидиеносцы налочковидные, простые, бесцветные, 11,2-14,4X3,2 р,. Конидии одноклеточные, бесцветные, элипсоидной формы 4,8-8X3,2 i. При выращивании щтамма Claviceps sp. ИБФМ-Р-401 в качестве источника углерода могут быть использованы следующие углеводы и спирты: глюкоза, сахароза, арабиноза, фруктоза, сорбит, маннит, инозит, в качестве источника азота-аммиак, соли аммония, аспарагин, дрожжевой экстракт. Пример. Условия культивирования гриба Claviceps sp. ИБФМ-Р-401. Культуру Claviceps sp. ИБФМ-Р-401 поддерживают в пробирках со скошенной агаризованной средой Т2. Выращивание осуществляют в течение 12 дней при 24°С. Полученную таким образом культуру высевают в колбы объемом 750 мл со 150 мл среды следующего состава, г: глюкоза 100; лимонная кислота 10; КН2РО4 0,5; MgS047Н20 0,3; дрожжевой экстракт 0,1; PeS04-7H2O 0,007; ZnSO4-7H2O 0,006; водопроводная вода до 1 л, значение рН среды доводят концентрированным аммиаком до 5,2. Колбы с засеянными средами помещают на качалку с 170-180 об/мин при 24°С на 6 суток. Полученную культуру используют для инокуляции колб емкостью 750 мл, содержащих 150 мл среды состава, г: сахароза 300; лимонная кислота 15; КН2РО4 0,5; MgS04-7H2O 0,25; дрожжевой экстракт 0,1; КС1 0,12; PeS04-7H2O 0,007, ZnS04-7H2O 0,006; вода водопроводная до 1 л; значение рН среды доводят до 5,2 концентрированным аммиаком. Культивирование проводят на качалке при 24°С в течеHjjg дней. Содержание алкалоидов в культуралыюй жидкости, онределенное спектрофотометрически, составляет 1,22 г/л. Выделсиие и очистка элимоклавина. 3,3 л культуральной жидкости отфильтроБывают через фильтровальную бумагу в вакууме. Нативный раствор подщелачивают концентрированным а.ммиаком до рН 7,5 и экстрагируют порциями по 1 л хлороформом 8 раз. Для ускорения разделения слоев используют центрифугирование на центрифуге К-70 (5000 об/мин, Т 20 мин). Коитроль за полнотой экстрации осуществляют с помощью реактива Ван Урка. Объединенный хлороформный экстракт высущивают пад прокаленным Na2S04, упаривают в вакууме. Выхо1 суммарной смеси алкалоидов 2,79 г (69%). Для отделения элнмоклавина суммарную смесь обрабатывают 100 мл кнпящего метаиола, охлаждают раствор и отфильтровывают осадок. В осадке по хроматографическпм и спектроскопическим данным - элимоклавин (содержание основного BcniecTBa не менее 90%). Выход 1,74 г. Дополнительно хроматографией после разделения маточника на окиси алюминия (V степень активности, элюепт-хлороформ), а затем на силикагеле (элюент- СПС1з: СНзОН : конц. NH40H 90 : 10 : 1) выделяют 250 мг элимоклавина. Таким образом, культивирование гриба Claviceps sp. ИБФМ-Р-401 позволяет значнтельно сократить время проведения процесса (в 2-2,5 раза). Кроме того, гриб Claviceps sp. ИБФМ-Р-401 обладает относительной селективностью в отношении продуцирования элимоклавина. Содержание элимоклавина в выделяемой смеси алкалоидов 70-75%. Это облегчает выделение и очистку целевого продукта. Формула изобретеиия 1. Способ получения элимоклавина, преусматривающий глубинное культивирование гриба-продуцента при аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и минеральные соли, выделение и очистку целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени культивирования, в качестве родуцента используют щтамм Claviceps sp. ИБФМ-Р-401. 2. Способ по п. 1, отличающийся ем, что штамм Claviceps sp. ИБФМ-Р-401 ыращивают на питательной среде следуюего состава, г/л: Сахароза250-300 Лимонная кислота10-15 Дрожжевой экстракт 0,1-0,2 КН2РО40,25-0,50 MgS04-7H200,25-0,50 ZnS04-7H2O0,003-0,007 PeS04-7H2O0,005-0,010 5б

KCl0,1-0,2Источники информации,

Водопроводная водаДо 1 лпринятые во внимание при экспертизе

рН среды доводят концентрированным1. А. Hofmann, R. Brunner, Н. Kobel,

аммиаком до 5,2.А. Brack new Alkaloide aus der saprophyti3. Способ no П. 1, ОТЛ ИЧ a ЮЩИЙСЯ тем,schen Kultur des Multer kornpilzes von

что культивирование штамма Claviceps sp.Pennisetum typhoideum Rich Helvetica

ИБФМ-Р-401 ведут в течение 10-12 сут.Chimica Acta, 1957, 40, 7, 1358-1373.

735010