Штамм фага бактерий вида YeRSINIa еNтеRоLIтIса для получения антифаговой сыворотки 1 типа Советский патент 1988 года по МПК C12N7/00 

4;:

о

У

Изобретение относится к медицин- ской вирусологии и микробиологии, а именно к классификации вирулентных фагов кишечных иерсиний. Целью изобретения является новый штамм вирулентного бактериофага И2, который может быть использован для получения высокоактивной сыворотки для дифференциации родственных фагов кишечных иерсиний. Штамм J. enteroQolitica вьщелен из объектов окружающей среды. Депонирован в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-130. (Л

ел

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к классификации вирулентных фагов кишечных иерсиний,

Целью изобретения является штамм вирулентного бактериофага И-2 (ф-130 J. enterocolitica, предназначенный для получения высокоактивной антифаговой сьшоротки для дифференциации родственных фагов кишечных иерсиний. Фаг И-2 получен из сточных вод. Штамм хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-130 и характе- ризуется следующими признаками.

Морфологические признаки. Корпускулы фага И-2 имеют гексогональную головку размером 700 х 700 А, соединенную с отростком сложного строения заканчивающегося базальной пласт н- кой. Длина отростка 1000 +. 20 А, ширина 175 ± 20 А.

Биологические свойства. На агаре Хоттингера при посеве двуслойным ме- тодом величина негативных пятен равна О, 1 мм в диаметре, колонии проз- рачные, край ровный.

Титр фага, определенный по лити- ческому действию, равен п х 10 БОЕ/ /МП - п X 10 БОЕ/МЛ.

В бульоне Хоттингера при посевной дозе п X 10 микробных клеток на 1 мп среды, множественности 0,1, инкубации при 24 С в течение 4-5 ч фаг на- капливается в количестве до п х X 10® БОЕ/МП.

Фаг термостабилен. Инактивация начинается при . Полное разрушение нуклеотида происходит при 65 С в те- чение 1ч.

Спектр действия. Фаг И-2 лизирует 47,2% штаммов J. enterocolitica и не лизирует остальные штаммы Jersinia, а также штаммы семейства Enterobacte- riaceae.

Антигенные свойства. При иммунизации кроликов фагом И-2 с адъювантом Фрейнда образуются специфические антитела. Полученная антисыворотка нейтрапизует фаг с константой нейтрализации 262.

Пример. Колбу с бульоном Хоттингера засевают соответствующей . культурой и выращивают при 24 С на качалке. По достижении концентрации клеток 2-5 х 10 кл/мл культуру заражают фагом с множественностью 0,1. Через 4 ч аэрации лизат обрабатывают

хлороформом, оставляют на ночь при 4-8 С и последовательно центрифугируют вначале 30 мин при 3000 об/мин, затем 1 ч при 20000 g.

Для получения антисыворотки 1 мл смеси, содержащей 0,5 мл фага с концентрацией 2-10 корпускул, и 1,5 мл полного адъюванта Фрейнда вводят внутримьш1ечно в задние лапки кролика. Через 30 дней кроликов иммунизируют повторно внутривенным введением той же дозы фага без адъюванта. Сыворотку готовят из крови, взятой на 40-й день от начала иммунизации, и испытывают в разведении 1:10Эи 1:200.

Для постановки реакции нейтрализации по методу Адамса фаг разводят питательным бульоном до титра 1 х X 10 частиц/мл. 0,1 мл такого бактериофага добавляют к 0,9 мл соответствующего разведения сыворотки. Через 10-минутные интервалы к 0,1 мл , смеси фаг-сыворотка добавляют 9,9 мл бульона для прекращения реакции.0,1 мл полученного разведения высевают в чашки методом агаровых слоев .Одновременно ставят бессывороточный контроль .

При постановке реакции нейтрализации клонированных фагов кишечных иерсиний (21 клон) с антифаговой сывороткой к фагу И-2 были получены ре зультаты от 3-5 опытов. Константы нейтрализации вирулентных клонов фагов J. enterocolitica антифаговой сывороткой к фагу И-2 следующие: И-1

101; И-2 262; и-3 о; и-4 о; и-5 о; и-6 0; и-7 о; и-8 0; и-9 37; и-10 0; и-11 о; И-12 о; и-13 о; и-14 о; и-15 о; и-16 о; И-17 о; y-i о; у-2 оУ-4 Oj У-5 о, У-6 о, причем вирулентные фаги J. enterocolitica, обозначенные через букву И и соответствующий порядковый номер, выделены в Тбилисском НИИБСе. Вирулентные фаги J. enterocolitica, обозначенные через букву У и соответствующий порядковый номер, выделены в Уфимском НИИВСе.

Константа нейтрализации сыворотки с гомологичным фагом (К) составляет 262, с фагом И-1 - 101, с фагом И-9 - 37, что позволяет объединить в один серотип - 1. Остальные фаги не инактивируются данной антифаговой сывороткой. Формула изобретения

Штамм фага бактерий вида Jersinia enterocolitica ТНИИВС (f Ф-130 для получения антифаговой сыворотки I типа.