Штамм @ @ @ -1,используемый для внутривидовой дифференциации иерсиний чумы Советский патент 1986 года по МПК C12N7/00 

Описание патента на изобретение SU1106834A1

X)

DO 4i

V

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике чумы для целей внутривидовой дифференциации иерсиний чумы, а также в генетических и микробиологических экспериментах..

Известны псевдотуберкулезный и ч-|)Гмный диагностические бактериофаги Д.Г1Я дифференциации подвидов чумного М1дкробао

Однако известные бактериофап лизируют 98-99%- штаммов псевдотуберкулезного микроба и 57% музейный культур возбудителя чумы, что приводит к диагностическим ошибкам.

Целью изобретения является получение бактериофага с узким спектром литической активности в отношении отдельных групп штаммов возбудителя чумы и повьшение качества дифференциации бактерий из различных природных очагов чумы.

Поставленная цель достигается использованием штамма Phagum pestis М-1.

Для получения фага были изучены на наличие фагов, активных в отношении бактерий чумы, 150 свежевьщеленных и музейных штаммов E.coli.

Один из изученных фильтратов (К235) образовывал на штамме .J.pestis 400(290) (Закавказское высокогорье) единичные мелкие неправильной формы относительно прозрачные негативные колонии.

С целью вьщеления однородной популяции фага проведена селекция негативных колоний. Чистая линия фага М-1 бьта получена путем 10-кратного пассирования отдельных негативных колоний на штамму,I.Pestis 400(290).

Бактериофаг М-1 депонирован в лаборатории.холерных фагов с музеем института 1икроб за № 101 .

Штамм М-1 чумного умеренного фага имеет следуюш 1е морфологические и физиологические характеристики.

Частица фага М-1 имеет головку гексагонапьной формы размером 51,4 ±2,3 им, отросток длиною 1 4,4tl ,6 нм, шириной 14,2tO,4 нм и сокращающийся чехол (длина в состоянии сокращения 50±1,8 и ширина 2011,7 нм, что дает основание отнести этот фаг к Т морфологической группе).

Бактериофаг М-1 образует относительно прозрачные колонии диаметром

342

0,5-1 мм, отличающиеся от крупных (4-8 мм) негативных колоний известного псевдотуберкулезного фага.

Одиночный цикл развития на щтам ме I.Pestis 400(290) характеризуется следующими показателями: константа скорости адсорбции 2,410 мл/мин, латентный период 90-100 мин, средний урожай 8,4 фаговых частиц на 1 бактериальную клетку.

В табл. приведена серологическая характеристика фага М-1.

По серологическим свойствам бактериофаг М-1 относится к II серотипу чумных фагов (табл.1).

Диапазон и специфичность действия фага М-1 изучены на 985 штаммах возбудителя чумы, 184 культурах псевдотуберкулезного микроба и 57 щтаммах возбудителя кишечного иерсиниоза. Испытания проведены в сравнении с псевдотуберкулезным диагностическим фагом (табл.2).

В табл. 2.приведена литическая активность чумных бактериофагов М-1, Л-143 с и псевдотуберкулезного диагностического в отношении штаммов бактерий рода lersinia.

Пример. Фаг М-1 репродуцируется на клетках штамма Т.Pestis 400(290) в бульоне Хоттингера, рН7,2

При посевной дозе 2-3-10 клеток на 1 мл среды и множественности инфекции 0,1-0,4 при инкубации с постоянным шюттелированием в течение 16-18 ч при 28 С накапливается до п«10 фаговых частиц на 1 мл.

Для получения препарата фага М-1 18-часовую бульонную культуру штамма I.Pestis 400(290) вносят в свежий бульон Хоттингера из расчета конечной концентрации клеток на 1 мл; после 6 ч подращивания при 28 С

с постоянным шюттелированием и дос9

тижением культурой плотности 2-310 клеток на 1 мл добавляют фаг М-1 из расчета множественности инфекции 0,10,4. Через 16-18 ч шюттелирования

при 28 С к фаголизату добавляют хлороформ до 2% по объему. Фаголизат с добавленным хлороформом выдерживают 1,5-2 ч при комнатной температуре (20-24.С) и 10-12 ч в холодильнике

(4-6 С).Затем фаголизат фильтруют через бактериальные фильтры марки Ф-3, Ф-5. Полученный фильтрат разливают по ампулам и контролируют на специфическую и общую стерильность и активность.

Фаг М-1, подобно типовым фагам других видов, используют /щя фаготипирования штаммов возбудителя чумы в дифференцирующем рабочем титре (ДРТ), ДРТ фага определяется следующим.образом: 18-часовую бульонную индикйторную культуру I.Pestis 400(290) в рбъеме 0,3 мл .вносят в пробирку с 4,5 мл расплавленного и остуженного до 0,7%-ного агара Хоттингера(,2), перемешивают и содержимое пробирки выливают на поверхность агаровой пластинки (1,2%-ный агар Хоттингера, рН 7,2).После застывания, второго слоя на его поверхность петлей или штампом наносят десятикратные

разведения фага М-1. После подсыхания капель посевы инкубируют при 28 С в течение 18-20 4i За дифференцирующий рабочий титр принимают то разведение, в котором фаг М-1 образует на месте нанесения не менее 10 негативных колоний.

Изучение чувствительности исследуемых культур к фагу М-1 проводится так же, как и определение дифференцирующего рабочего титра.

Использование фага М-1 в практике лабораторного исследования позволит повысить эффективность эпизоотологических, микробиологических, генетических исследований, направленных на борьбу с возбудителями чумы-.

Таблица 1

Похожие патенты SU1106834A1

название год авторы номер документа
Штамм РнаGUм реSтIS для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы 1987
  • Новосельцев Николай Николаевич
  • Марченков Виктор Иванович
SU1578194A1
ШТАММ БАКТЕРИЙ Yersinia enterocolitica, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ИНДИКАТОРНОЙ КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ УМЕРЕННЫХ БАКТЕРИОФАГОВ ЛИЗОГЕННЫХ ШТАММОВ О1, О3, О12 СЕРОВАРОВ 2010
  • Кудрякова Татьяна Александровна
  • Македонова Людмила Дмитриевна
  • Качкина Галина Витальевна
  • Гончаренко Елена Владимировна
RU2425872C1
НАБОР ШТАММОВ БАКТЕРИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОБУЧЕНИЯ ВОПРОСАМ МИКРОБИОЛОГИИ И МЕТОДАМ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ 2016
  • Сазанова Елена Владимировна
  • Малюкова Татьяна Анатольевна
  • Попов Юрий Алексеевич
  • Куклев Василий Евгеньевич
  • Малахаева Алина Николаевна
  • Кутырев Владимир Викторович
RU2642322C1
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ YERSINIA ENTEROCOLITICA 2011
  • Кудрякова Татьяна Александровна
  • Гончаренко Елена Владимировна
  • Македонова Людмила Дмитриевна
  • Гаевская Наталья Евгеньевна
  • Качкина Галина Витальевна
RU2460802C1
ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ-ШТАММА, РЕЗИСТЕНТНОГО К ЧУМНОМУ БАКТЕРИОФАГУ Л-413 "С" 2000
  • Царева Н.С.
  • Зайцев А.А.
  • Брюханова Г.Д.
  • Щедрин В.И.
  • Шерстюк М.В.
RU2203316C2
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ КИШЕЧНОГО ИЕРСИНЕОЗА БАКТЕРИОФАГОМ YERSINIA ENTEROCOLITICA 2021 (ФК-115) 2021
  • Гаевская Наталья Евгеньевна
  • Аноприенко Анна Олеговна
  • Тюрина Анна Владимировна
  • Погожова Марина Павловна
RU2787399C1
ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS SUBSP.PESTIS КМ 1190 (И-3244), СОДЕРЖАЩИЙ ПЛАЗМИДУ pYX 16, ДЛЯ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЧУМНОГО МИКРОБА 1996
  • Балахонов С.В.
  • Логачев А.И.
  • Иннокентьева Т.И.
RU2118362C1
Способ выявления чумного микроба 1990
  • Апарин Геннадий Петрович
  • Вершинина Татьяна Ивановна
SU1756347A1
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЧУМНОГО И ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБОВ С ОДНОВРЕМЕННОЙ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЕЙ ШТАММОВ ЧУМНОГО МИКРОБА 2007
  • Булгакова Елена Германовна
  • Гаева Анна Вячеславовна
  • Сухоносов Илья Юрьевич
  • Краснов Ярослав Михайлович
  • Гусева Наталья Петровна
  • Кутырев Владимир Викторович
RU2332464C1
Штамм бактерий JeRSINIa реSтIS, предназначенный для проведения генетических и эпизоотологических наблюдений 1989
  • Сулейманов Бахтияр Мукашевич
  • Атчабаров Бахыт Бахиевич
  • Исин Жамиль Мауленович
  • Сатыбалдиев Нурлан Абенович
  • Рахманкулов Рашид Рахматулович
  • Майканов Нурбек Смагулович
SU1712405A1

Реферат патента 1986 года Штамм @ @ @ -1,используемый для внутривидовой дифференциации иерсиний чумы

Штамм Phagum pestis M-l 101. (коллекция фагов Всесоюзного научноисследовательского противочумного института Микроб), используемый для внутривидовой дифференциации иер- синий чумы. § (Л

Формула изобретения SU 1 106 834 A1

Антифаговая I. серотипа Антифаговая II серотипа Антифаговая М-1Примечание. Числитель - % нейтрализованных фаговых корпускул; знаменатель - константа нейтрализации.

Возбуди- Закавказский

тель равнИнночумы предгорный 97

Закавказский

высокогорный 242 78,4 99,5

0/98/300

98/83,72

99,6/441,6 97,2/283,4

Таблица 2

98,9

100

100

Прикаспийский

101 степной

Продолжение табл. 2

100

100

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1986 года SU1106834A1

Ларина B.C., Мельников Н.Ф., Тимофеева Л.А
и др
Сравнительная характеристика активных фаговых корпускул чумных и псевдотуберкулезного фагов
Сб.
Проблемы ОСИ, Саратов, № 4, 1977, с.13.

SU 1 106 834 A1

Авторы

Гольдфарб Л.М.

Анисимов П.И.

Плотников О.П.

Кондрашин Ю.И.

Попов Ю.А.

Коннов Н.П.

Тарасова В.Е.

Даты

1986-03-23Публикация

1983-04-08Подача