СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННОГО ТРИТИЕМ ДЕЗОКСИАДЕНОЗИНА Советский патент 1995 года по МПК C07B59/00 

Изобретение относится к способу получения меченного тритием дезоксиаденозина, который находит применение в биохимии и молекулярной биохимии, а также как предшественник в синтезе других тритийсодержащих компонентов нуклеиновых кислот.

Целью изобретения является повышение молярной активности меченного тритием дезоксиаденозина.

П р и м е р. 3,0 мг (10,6 мкмоль) 2', 8-ангидро-8-меркапто-арабинофуранозиладенина растворяют при небольшом нагревании в 3 мл дистиллированной воды, добавляют 0,75 мл 0,14 М раствора Na₂CO₃ (105 мкмоль) и вносят 225 мг катализатора 5% Pd/BaSO₄. Раствор упаривают досуха на ротационном испарителе, сушат 1,5 ч в вакууме над Р₂О₅ при комнатной температуре и 30 мин при 85^оС для удаления кристаллизационной воды из карбоната натрия.

В реакционную колбу вместимостью 10 см³ вводят ³Н₂ активностью 925 ТБк 25 Ки при давлении 50 кПа и выдерживают при температуре 170^оС в течение 1,5 ч.

По окончании процесса меченный препарат смывают с катализатора горячей водой и отделяют от катализатора фильтрованием в вакууме. Лабильный тритий удаляют 3-кратным уравновешиванием с 5 мл воды с последующей отгонкой.

Выделение целевых продуктов проводят последовательным элюированием водой на колонках с Молселектом G-10 и силикагелем "Woelm". Для этого реакционную смесь растворяют в 3 мл дистиллированной воды, нейтрализуют избыток Na₂CO₃ раствором HCl с концентрацией 0,1 моль/л до рН 7 (по индикаторной бумаге) и наносят на колонку с Молселектом G-10. Размеры колонки: h 400 мм, d 20 мм, V_{носителя} 75 см³. Скорость элюирования 40 см³/ч. Собирают фракцию от 126 до 148 мл, содержащую 2'-дезокси(2,2', 8-3Н)-аденозин.

При необходимости проводят дополнительную очистку на колонке с силикагелем "Woelm". Размеры колонки: h 250 мм, d 8 мм, V_{силикагеля} 10 см³. Перед нанесением на колонку раствор, содержащий целевой продукт, упаривают до объема 1 см³. Элюирование ведут со скоростью 30 см³/ч.

2'-Дезокси(2,2', 8-³Н)-аденозин идентифицировали по УФ-спектрам при рН 7 и 2 и по хроматографическому поведению на силуфольных пластинках в системах растворителей: вода и хлороформ-этанол-вода (20: 7: 0,5), где 2'-дезокси (2,2', 8-³Н)-аденозин имел R_f, совпадающие с R_f немеченого продукта.

В результате получают 9,25 ГБк (250 мКи) 2'-дезокси-(2,2', 8-³Н)-аденозина 30% молярной активностью (А_мол.) 3150 ТБк/моль (85 кКи/моль). В качестве побочного продукта выделен (2,8-³Н)-аденин с А_мол. 1990 тБк/моль (54 кКи/моль).

Уменьшение температуры процесса снижает скорость реакций десульфирования и изотопного обмена, а увеличение температуры вызывает протекание гидролиза гликозидной связи и загрязнение продукта примесными мечеными соединениями, увеличение давления ³Н₂ сопряжено с возможностью разгерметизации реакционного сосуда при нагревании. Отклонение ее от указанных значений соотношения исходного соединения катализатора и карбоната натрия приводит или к снижению молярной активности целевого продукта или к уменьшению его выхода. Указанные отклонения отражены в таблице.

Таким образом, получаемый по предлагаемому способу меченный тритием дезоксиаденозин имеет молярную активность 2220-3219 ТБк/моль и содержит трехкратную метку (в положениях 2,2' и 8).

Предлагаемый способ позволяет увеличить молярную активность целевого продукта в 4-5 раз и ввести метку не только в гетероциклическое основание, но и в углеводный фрагмент.

Изобретение касается производства меченых тритием гетероциклических веществ, в частности получения меченного тритием дезоксиаденозина (АД), который применяют в биохимии и молекулярной биологии или в синтезе меченных тритием соединений. Цель повышение молярной активности АД. Получение последнего ведут каталитическим твердофазным гидрогенолизом газообразным тритием 2′,8 -ангидро-8-меркапто-арабинофуранозиладенина (АФ) при 150 170°С в присутствии Na₂CO₃ и давлении 50 50 КПа и массовом соотношении АФ, катализатора [КТ] и Na₂CO₃ 1 75 4. В качестве КТ используют палладий на сульфате бария. Эти условия позволяют увеличить молярную активность АД в 4 5 раз [2220
3219ТБ к/моль] при выходе 30 47% 1 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННОГО ТРИТИЕМ ДЕЗОКСИАДЕНОЗИНА путем твердофазного каталитического гидрогенолиза газообразным тритием производного дезоксиаденозина в присутствии палладиевого катализатора, отличающийся тем, что, с целью увеличения молярной активности целевого продукта, в качестве производного дезоксиаденозина используют 2′ 8-ангидро-8-меркапто-арабинофуранозиладенин, в качестве катализатора используют Pd/BaSO₄ и ведут процесс при 150 170^oС в присутствии Na₂CO₃ при давлении тритиевого газа 50 55 кПа и массовом соотношении исходного соединения, катализатора и карбоната натрия 1 75 4.