СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ 2`-ДЕЗОКСИУРИДИНОВ Советский патент 1994 года по МПК C07B59/00 C07H19/73 A61K49/00 A61K31/70 

Предлагается новый способ получения новых соединений - меченных тритием 2'-дезоксиуридинов общей формулы 1
где R - водород или тритий, которые могут найти применение в биохимии и молекулярной биологии.

Меченный тритием 2'-дезоксиуридин относится к нуклеозидам пиримидинового ряда. Он может использоваться в качестве донора дезоксирибозной группы в реакции ферментативного дезоксирибозилирования тимина и превращения его в тимидин, который является предшественником в синтезе ДНК и вследствие этого находит широкое применение в биохимических исследованиях. Получение 2'-дезоксиуридина, меченного тритием по дезоксирибозному остатку и урацилу, позволит расширить область его применения.

Известен способ получения 2'-дезоксиуридина, меченного тритием в урацильное ядро [2'-дезокси-(5-³Н)уридина] , с молярной активностью 890-980 ГБк/ммоль путем реакции каталитического дегалоидирования 5-бром- или 5-иод-2'-дезоксиуридина в атмосфере газообразного трития над 5% Pd/BaSO₄ в 0,1 н. КОН или над Pd/CaCO₃ в водном диоксане [1].

Однако этим способом получают 2'-дезоксиуридины, меченные тритием только в урацильное кольцо.

Известен способ получения 2'-дезоксиуридина каталитическим дегалоидированием 3', 5'-ди-0-ацетил-2'-бром-2'-дезоксиуридина в водно-метанольном растворе в присутствии ацетата натрия над катализатором Pd/BaSO₄ (при мольном соотношении галоидпроизводное: катализатор 20:1) в атмосфере газообразного водорода.

Однако этим методом при использовании вместо водорода трития получен 2'-дезокси-(2'-³Н)уридин с молярной активностью лишь 170 ГБк/ммоль (по данным авторов), что существенно ограничивает сферу применения данного соединения.

Целью изобретения является разработка нового способа получения новых, меченных тритием, 2'-дезоксиуридинов с высокой молярной активностью.

Эта цель достигается описываемым способом получения меченных тритием 2'-дезоксиуридинов общей формулы 1, включающим дегалоидирование тритием бромпроизводного 2'-дезоксиуридина общей формулы 2
где R' водород или бром, на палладиевом катализаторе при соотношении бромпроизводного 2'-дезоксиуридина и катализатора 1:4-5 в водно-метанольном растворе в присутствии ацетата натрия.

Данным способом были получены 2'-дезоксиуридины, меченные тритием в дезоксирибозном остатке и в дезоксирибозном остатке и в гетероцикле одновременно с молярной активностью 970 и 1850 г ГБк/ммоль соответственно.

П р и м е р 1. В реакционную колбу емкостью 1,5 мл помещают 20 мг (65 мкмоль) 2'-бром-2'-дезоксиуридина, 16 мг (195 мкмоль) ацетата натрия, 30 мг (300 ммоль) палладиевого катализатора, 1 мл 50%-ного (по объему) метанола и перемешивают в атмосфере газообразного трития до прекращения поглощения газа (около 2 ч) при комнатной температуре и давлении 900-1000 гПа.

По окончании реакции катализатор отделяют от реакционной смеси фильтрованием, фильтраты упаривают досуха при пониженном давлении на ротационном испарителе. К осадку добавляют 5 мл дистиллированной воды и вновь упаривают досуха. Операцию повторяют 3-4 раза для полного удаления лабильного трития.

Сухой остаток растворяют в 2 мл воды, наносят на поверхность колонки с сефадексом G = 10 (d = 18 мм, h = 550 мм, общий объем сефадекса 120 мл) и проводят элюирование водой со скоростью 30-40 мл/ч. После того, как с колонки элюированы неорганические соли и радиоактивная примесь, не поглощающая в УФ-области спектра (фракции 5-50 мл), элюируется 2'-дезокси-(2'-³Н)уридин (фракции 54-69 мл).

Выход 2'-дезокси-(2'-³Н)уридина составляет 61% в расчете на исходный 2'-бром-2'-дезоксиуридин, молярная активность 970 ГБк/ммоль.

Характеристика УФ-спектра поглощения при рН = 2 (0,021 н. HCl): λ_макс= 262 нм, D250/D260 = 0,74, D280/D260 = 0,35; при рН = 12 (0,01 н. NaOH): λ_макс= 262 нм, D250/D260 = 0,80, D280/D260 = 0,29.

Для хранения готовят раствор 2-дезокси-(2-³Н)уридина в 50%-ном (по объему) водном этаноле с объемной активностью 37-185 МБк/мл.

Радиохимическая чистота данного препарата не ниже 95% (определяли с помощью тонкослойной хроматографии на силуфоле в системе растворителей (этилацетат - этанол 5:1) и хроматографии на бумаге Ватман N 1 в системе растворителей (трет-бутанол-метилэтилкетон-вода-аммиак 4:3:2:1).

П р и м е р 2. В реакционную колбу емкостью 1,0 мл помещают 10 мг (26 мкмоль) 2', 5-дибром-2'-дезоксиуридина, 13 мг (156 мкмоль) ацетата натрия, 24,7 мг (245 мкмоль) палладиевого катализатора, 0,5 мл 50%-ного (по объему) метанола и перемешивают в атмосфере газообразного трития до прекращения поглощения газа (около 2 ч) при комнатной температуре и давлении 900-1000 гПа. Дальнейшую обработку реакционной смеси и выделение 2'-дезокси-(2',5-³Н)уридина на колонке с сефадексом G-10 проводят, как в примере 1. Выход 2'-дезокси-(2', 5-³Н)уридина составил 52% в расчете на исходный 2',5-дибром-2'-дезоксиуридин, молярная активность 1850 ГБк/ммоль.

Характеристика УФ-спектра поглощения при рН = 2 (0,01 н.HCl): λ_макс= 262 нм, D250/D260 = 0,74, D280/D260 = 0,38; при рН = 12 (0,01 н. NaOH): λ_макс= 262 нм, D250/D260 = 0,80, D280/D260 = 0,29.

Для хранения готовят раствор (2',5-³Н)дезоксиуридина в 50%-ном (по объему) этаноле с объемной активностью 37-185 МБк/мл.

Радиохимическая чистота данного препарата не ниже 95% (определена в условиях, описанных в примере 1).

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ 2'-ДЕЗОКСИУРИДИНОВ общей формулы

где R - водород или тритий,
отличающийся тем, что бромпроизводное 2^ъ-дезоксиуридина общей формулы

где R¹ - водород или бром,
подвергают дегалоидированию тритием на палладиевом катализаторе при соотношении бромпроизводного 2^ъ-дезоксиуридина и катализатора 1 : 4 - 5 в водно-метанольном растворе в присутствии ацетата натрия.