Способ получения производных синергистинов или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1988 года по МПК C07D498/14 C07D213/65 C07D273/00 

OV-N

хЧ.

НК- СНгСНз 0

о о А/8 Г

х XI г т

СНгСНз ,

O..NH

Г

i

СО

с

Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности способа получения производных синергис- тинов (пег) общей формулы XH-CH R, где X - радикал общей формулы

Ч

Н

где R - Н, диме.тиламиногруппа; R j 4-пиперидилтиогруппа, замещенная С,- Сд-алкилом; С -Сз-алкилтиогруппа, замещенная одной или двумя ди-С -С--ал- киламиногруппами (они могут быть замещены меркаптогруппой или пиперази- HOBbw циклом, имеющим С -С}-алкилы)-, или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих противомикробной активностью, которые могут бь1ть использованы в медицине. Цель изобретения- создание новых активных веществ указанного класса, обладающих лучшей

растворимостью в воде. Синтез ПГС ведут реакцией соединения R/f- Н и X - СН , где R ,2. и X - см. вьше, в среде метанола и хлороформа при 20 С (20 ч) с последующим превращением полученного продукта в случае необходимости в фармацевтически приемлемую соль. Испытания показывают, что ПСГ в 10-100 более растворимы в воде, чем известные синергистины, при сохранении низкой токсичности (LDjo 380-900 или 71000 мг/кг подкожно) и сравнимой активности. 3 табл.

4 N5

Ю

О)

см

314

Готовят водньш раствор 5(5 -3 диметил амин опропилтиометилпри- стинамицина 1/ (продукта АА), исходя из: продукт АА 30 мг; 0,1 н. соляная кислота до 0,3 см,

Зс -Метиленпристинамицин I может быть приготовлен следующим образом.

К раствору 12 г 5(/ -диметиламино- метиленпристинамицина IA в 230 см тетрагидрофурана, содержащего 1,2смЗ трифторуксусной кислоты, прибавляют 0,43 г цианборгидрида натрия. Полученный раствор перемешивают 4 ч при 20°С, затем концентрируют досуха при пониженном давлении (2,7 кПа). . при 30°С Полученный остаток очищают. флаш -Х1 оматогргфией (элюент: хлороформ-метанол 95-9 по объему), фракции 20 . 5с/ -метиленвиргиниамицина S и 0,52 г,

25

30

4-15 концентрируют досуха при пониженном давлении (2,7 кПа).при 30°С. Таким образом получают 5,5 г 5с/ -ме- тиленпристинамицина I., в виде белых кристаллов, плавящихся при 245 С.

Спектр ЯМР: 0,55 (дд, 1Н, 5jb,}; 2,40 (Д, 1Н, 5,); 3,55 (ЛД, 1K,5/}j); 5,25 (м, 2Н, 5d + 5 , ); 5,30 и

Н 6,10 (2с, ); 7,85 (дд, 1Н,

Н 1Н).

5с -Диметиламинометиленпристина:ми-. цин Iд может быть получен следующим образом.

К раствору 46 г пристинамицина 1д в 460 см 1,2 дихлорэтана прибавляют 230 см третичнобутокси-бис-(диметил- амино)метана, полученньш раствор перемешивают 18 ч при 20° С. Реакцион- 40, ную смесь разбавляют 1 л метштенхло- рида, потом 3 раза промывают 3 л всего 0,4%-ного водного раствора хлористого аммония. Органическую фа35

:3-диметиламинопропантиола после очис тки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 90-10 по объему) и концентрирования досуха фракций 13- 25 при пониженном давлении (2,7 кПа)- при 30°С получают 0,3 г 5-(3-диметиламинопропилтиометилвир- гиниамицина S в виде белого порошка, плавящегося при 142 С.

Спектр ЯМР: 0,45 (дд, 1Н, 5/3); Ь90 (м, 2Н, -SCHiCH CH NC ); 2,40 X CHj (С, 6Н, ); 2,60 (м, 4Н,

СНз

-S-CH CHjCHa-N -С ); 3,45 (д, 1Н, 5,); 4,85 (м, ЗН, 5); 5,25 (дд, 1Н, 5 ); 7,78 (дд, 1Н, 1HJ.

Готовят 10%-ный раствор ,м- метиламинопропилтиометилвиргиниами- цина S (продукт АВ) в виде гидрохлорида: продукт АВ 0,1 г; соляная кислота до 1 см.

5 -Метиленвиргиниамицин S может быть цолучен по методике, описанной

зу сушат над сульфатом магния, филь- 45 примере 1 для 5с/ -метиленпристинамицина 1д, но исходя из 2 г 5с/ -диме- тиламинометиленвиргиниамицина S и 74 мг цианборгидрина натрия. После очистки флаш -хроматографией (элю50 ент: хлороформ-метанол 98-2 по объему) и концентрирования досуха при пониженном давлении (2,7 кПа) при 30°С получают 1 г 5с метиленвиргиниамицина в вдп;е бежевого порошка,

55 плавящегося при 190°С.

Спектр ЯМР: 0,35 (дд, 1Н, 5/3-2); 2,45 (дд, 1Н, 5;3,); 3,55 (дд, 1Н, 55г); 3,25 (дд, 1Н, ); 5.5 См. 1Н, 5,30 и 6,15 (2с, 2Н,

труют, потом концентрируют досуха при пониженном давлении (2,7 кПа) при 30 С, Полученный остаток тщательно растирают с 600 см дистиллированной воды, смесь фильтруют и сушат твердый продукт при пониженном давлении (2,7 кПа) при 20°С. Получают 41 1 сырого 5-диметиламинометш1ен- пристинамицина 1.д з виде бежевого .. продукта. Полученный продукт достаточно качественный и его можно использовать в последующих стадиях.

Продукт может быть очищен следующим образом.

Очищают 23,5 г 5 Г-днметиламиноме- тиленпристинамицина 1 флаш -хрома- тографией (элюент: хлороформ-метанол 98-2 по объему). Объединяют фракции 16-25 и концентрируют досуха при пониженном давлении (2,7 кПа) при 30 С.

Таким образом получают 12 г 5с/ -диме- тиламинометиленпристинамицина 1 в виде бежевого порошка, плавящегося при 1954,

Спектр ЯМР: 0,9 (т, ЗН, 2у); 1,0 (дд, 1Н, 5Р); 2,50 (д, 1Н, 5,); 3,10 (С, 6Н, -N(CH5)2); 3,70 (д, 1Н, ); 5,50 (д, 1Н, 5,); 7,40 (с, 1Н С1Ш(СНз)2); 7,75 (дд, 1Н, 1Н). .- - - .

П р и м е р 2, Работают по методике примеоа 1, но исходя из 0,9 г

3-диметиламинопропантиола после очис тки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 90-10 по объему) и концентрирования досуха фракций 13- 25 при пониженном давлении (2,7 кПа)- при 30°С получают 0,3 г 5-(3-диметиламинопропилтиометилвир- гиниамицина S в виде белого порошка, плавящегося при 142 С.

Спектр ЯМР: 0,45 (дд, 1Н, 5/3); Ь90 (м, 2Н, -SCHiCH CH NC ); 2,40 X CHj (С, 6Н, ); 2,60 (м, 4Н,

СНз

-S-CH CHjCHa-N -С ); 3,45 (д, 1Н, 5,); 4,85 (м, ЗН, 5); 5,25 (дд, 1Н, 5 ); 7,78 (дд, 1Н, 1HJ.

Готовят 10%-ный раствор ,м- метиламинопропилтиометилвиргиниами- цина S (продукт АВ) в виде гидрохлорида: продукт АВ 0,1 г; соляная кислота до 1 см.

5 -Метиленвиргиниамицин S может быть цолучен по методике, описанной

примере 1 для 5с/ -метиленпристинаLJ

н

); 7,75 (дд, 1Н, 1Н).

14212606

НИИ (2,7 кПа) при получают 1,9 г (4-метил-1-пиперазинил) пропил - тиометилпристинамицина Ij

1д В виде бе- лого порошка, -плавящегося при 156 С,

5с/ -Диметиламинометиленвиргиниами- ции S может быть получен по методике примера 1 для Зс -диметиламиномети- ленпристинамицина 1 , но исходя из 2 г виргиниамицина S и 10 см бис- диметиламино-третичнобутоксиметана, а после очистки флаш -хроматографи- :ей (элюент; хлороформ-метанол (98-2 по объему) и концентрирования досуха ;фракций 9-12 при пониженном давлении .(2,7 кПа) при 30°С получают 0,8 г 5с диметиламинометиленвиргиниамици- на S в виде, желтого порошка, плавящегося при 175°С,

Спектр ЯМР: 0,9 (м, 4Н, 2 j + 5/ij) 3,05 (с, 6Н, СН-М(СНз)2); 3,65 (д, 1Н, ); 4,85 (д, 1Н, 5 ,); 5,15 (дд, 1H, ); 7,10-7,40 (м, аромати- ка + CH-N С ); 7,70 (дд, 1Н, 1Н).

Примерз. Работают по методике примера 1, но исходя из 6 г 5 - метиленпристинамицина 1у и 4 см 2- (4-метил-1-пиперазинил) этантиола, после очистки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 97-3 по объему) и концентрирования фракций 8-20 при пониженном давлении :(2,7 кПа) при получают 2,6 г (4-метил-1-пиперазинил)этил :тиометилпристинамицина 1 в виде белых кристаллов, плавящихся при 21 & С.

Спектр 5IMP: 0,06 (дд, 1Н, Sf), 2,27 (с, ЗН, :;М-СНз); 2,40-2,80

СНоСН,,

(м, 11Н, N -1- 5ft); CKjCK

5,05 (дд, 1Н, 5f,); 5,27 (м, 2Н, 5fl+ 4о/); 7,85 (мт, ,8 ; 1Н 1-й изомер); 7,95 (мт, 1НхО,2 : 1Н 2-й изомер).

Готовят 5%-ный раствор 5((4- метилпиперазинил)этил тиометилпристи намицина 1д (продукт АС) в виде гидрохлорида состава: продукт АС 0,1 г; 0,1 н,соляная .кислота 0,96 см ; дистиллированная вода до 2 см ),

Пример4. Работают по методике примера 1, но исходя из( 2 г 5 - метиленпристинамицина I j и 3 см 3- (4-метил-1-пиперазинил)-пропантиола, после очистки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 90-10 по объему) и концентрирования досуха 10-25 фракций при пониженном давлеНИИ (2,7 кПа) при получают 1,9 г (4-метил-1-пиперазинил) пропил - тиометилпристинамицина Ij

1д В виде бе- лого порошка, -плавящегося при 156 С,

Спектр ЯМР: 0,65 (дд, 1Н, 5/%); 2,30 (с, ЗН, N-CH); 2,50 (м, 13Н,

N- + -ЗСН-г, 5/5,);

-CHjN

СНо СН

х0

2

5,27 (м, 2Н, 5а(+ 4о); 7,85 (дд, 1Н« 0,8 : 1Н 1-й изомер); 7,95 (дд, 1Н 0,2 : 1Н 2-й изомер).

Готовят 10%-ный водный раствор 5i/ -СЗ-(4-метил-1-пиперазинил) пpoпилJ- тиометилпристинамицина 1 (продукт АД) в виде гидрохлорида состава: продукт АД 0,1 г; 0,5 н.соляная кислота 0,38 см ; вода дистиллированная до 1 см .

П р и м е р 5. Работают по методике примера 1, но исходя из 4 г 5S- метиленпристинамицина 1д и 4 см бис- 1,3-диметиламинопропантиола-2, после очистки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 95-9 по объему) и концентрирования досуха фракций 20-60 при пониженном давлении (2,7 кПа) при получают 0,59 г 5о-Сбис-1,3-диметиламино)-2-пропилJ тиометилпристинамицина IA в виде бе- ч лого порошка, плавящегося при .

Спектр ЯМР: 0,63 (дд, 1Н, 5 fb)-; 2,40 (с, 6Н, -Ы(СНз).г); 2,50 (м, ЮН

. CH,NC

5

0

5

-СН

CHjN

+ Н(СНз)2; .97 (с, 1Н,

5е,); 5,30 (м, 2Н, 5d + 7,85 (мт, 1Н 0,85 1Н 1-й изомер); 7,95 (мт, 1Н.0,15 1Н 2-й изомер).

Готовят 7,5%-ный раствор (водный) 5с/ - бис-( 1,3-диметиламино)-2-пропил - тиометилпристинамицина 1д (продукт АЕ) в виде гидрохлорида следующего состава: продукт АЕ 0,03 г; 0,1 н. соляная кислота 0,3 см ; дистиллированная вода до 0,4 см .

Бис-1,3-диметиламинопропантиол-2 может быть получен, как приведено в . примере 9,

П р и м е р 6. Работают по методике примера 1, но исходя из 3 г 5еГ-метиленпристинамицина 1 и 0,97 г 1-ме- тил-4-меркаптопиперидина, после очистки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 95:5 по объему) и концентрирования досуха фракций 107 -1Д21

16 при пониженном давлении (2,7 кПа) при получают 1,1 г 5/-(1-метил- 4-пиперидил)-тиометилпристинамицина I. в виде белого порошка, плавящего- g ся при 260 С.

ЯМР спектр: 0,6 (дд, 1Н, );

™г

2 (м, 4Н, -S- ( ,N-); 2,20 (с.

, -S-i -N-CHp; 2,35 (м, 1Н,

10

5/1

,); 2,90 (м, 4H,);

СН; СН2

15

5,30 (м, 2Н, ); 7,85 (дд, 1Н, 1Н).

Готовят 5%-ный водный раствор 5сГ- (1-метил-4-пиперидил)тиометилпристи- намицина 1 (продукт А ) в виде гидрохлорида следующего состава: продукт AF 0,04 г; 0,1 н. соляная кислота 0,3 дистиллированная вода до 0,6 смз.

П р и м е р 7. Работают по методике примера 1, но исходя из 2 г Зс/ -ме- тиленпристинамицина I,, и 0,66 г 2-ди- этиламиноэтантиола, после очистки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 95-5 по объему) и концентрирования досуха фракций 9-18 при пониженном давлении (2,7 кПа) при 30°С получают 0,8 г 51/-(2-диэтил- аминоэтил) тиометилпристинамицина 1д в виде белого порошка, плавящегося при 230°С.

Спектр ЯМР: 0,65 (дд, 1Н, 5/5); 2,38 (д, 1Н, 5/5); 2,3-2,8 (м, 8Н,

CHj -SCH-jCH N ; 3,15 (дд; 1Н, -

сн

); 3,35 (дд, 1Н, );5,01 (дд, 1Н, 5Е); 7,81 (дд, 1НхО,9 1Н) 1-й изомер); 7,90 (д, 1Н хО,1 IH 2-й изомер).

Готовят 5%-ный водный раствор 5°- (2-диэтиламиноэтил)тиометилпристинамицина 1д (продукт AF) в виде гидрохлорида следующего состава: продукт А 30 мг; 0,1 н, соляная кислота 0,29 вода до 0,6 см,

Пример8. Работают по методике примера 1, но исходя из 4,36 г 5с/ -метиленпристинамицина ,2г 1-диэтиламинопропантиола-2, получают после очистки флаш -хроматографией (элюент: хлороформ-метанол 96-4 по объему) и концентрирования досуха

g

0

15

0

30

25

5

Q

g

260

фракций 20-25 при пониженном давлении (2,7 кПа) при 30°С 1 г 5 /-диэтил- амино-2-пропил) трюметилпристинамици- на 1 в виде бежевого порошка, плавящегося при 90°С.

Спектр ЯМР: 0,64 (дд, 1Н, );

1-1,2 (м, CHj-CHC и ); 2,36

/СНг- (д, 1Н, 5,); 2,3-2,7 (м, 6Н, CH-N )

,15 (дд, 1Н, -CH-S-); 3,35 (дд, 1Н, CH2-S-); 5,02 (дд, 1Н, 5е,); 7,85 (м, 1НхО,9 1Нб 1-й изомер); 7,93 (м, 1Н,хО,1 1Н 2-й изомер).

Готовят 4%-ньш водньй раствор 5с/ - (1-диэтиламино-2-пропил)тиометилпристинамицина 1 (продукт AFj) в виде гидрохлорида следующего состава: продукт AF 30 мг; 0,1 н. соляная кислота 0,29 смз ; вода до 0,75 см .- ;

П р и м е р 9. Работают по методике, описанной в примере 1, но исходя из 3,2 г 5о-мет иленпристинамицина 1 и 2,8 г N,N-биc-(2-меркаптоэтш1)-Н метиламина, получают после очистки флаш -хроматографией (злюент: мети- ленхлорид-метанол 98-2 по объему) и концентрирования досуха фракций 7-20 при пониженном давлении (2,7 кПа) при 1 г 5сС-5;2- К-(2-меркаптоэтш1)-М- метиламино этил тиометилпристинамицина 1д в виде белого порошка, плавящегося при .

Спектр ЯМР: 0,61 (дд, 1Н, 5/ь); 2,29 (с, ЗН, М-СНэ); 2,38 (д, 1Н, 5/i,); 2,3-2,7 (м, 8Н, -S-CH CH N ); 3,15 (дд, 1Н, ); 3,35 (дд, 1Н, -CHjS-); 5,03 (дд, 1Н, 5,); 7,83 (дд, ,9 1Н 1-й изомер); 7,93 (дд, 1Н cO, l 1Н 2-й изомер) .

Готовят 1%-ный водный раствор 5«А- (2-меркаптозтил)-К-метиламино - этил тиометилпристинамицина 1/ (продукт АРз) в виде гидрохлорида: продукт AFj 20 мг; 0,1 н, соляная кислота 0,38 дистиллированная вода до 2 см,

Пример 10. Работают по мето-. дике примера 1, но исходя из 7,7 г 5-метиленпристинамицина 1у и 9 г бис- 1,4-(2-меркаптоэтил) пиперазина, по.г лучают после очистки флаш -хромато- графией Сзлюент: метилен-хлорид-метанол 95-5 по объему) и концентрирования досуха фракций 12-40 при понижен9U2126010

ном давлении (2,7 кПа) при 30°С 4,2 г мого соединения. Пластины инокулиру- (2-меркаптоэтил) пиперазинил - ют множественным инокулятором, кото- этил тиометилпристинамицина 1я Б виде рый разделяет пятно 10 колоний,, фор- желтого порошка, плавящегося -при ц 165°С.

Спектр ЯМР: 0,61 (дд. 1Н. 5 f3i): 2,37 (дд, 1Н, 5,); 2,30-2,80 (м, 18Н,

мируя блоки микроорганизмов в tryptic soy broth, инкубированной в течение 18 ч при и растворенной в 1/100 той же средой.

X

СН ,jCH 2

-S-CH -CH -N N-CH CHjSH); CHjCHj

3,17 (дд, 1Н, -CHj-S-); 3,35 (дд,; 1Н, -CH,-S-); 5,03 (дд, 1Н, 5,); 7,85 (м, 1Н,хО,85 1Н 1-й изомер); 7,95 (м, 10Н XOJ5 1Н 2-й изомер),

Готовят 2%-ный водный растрор. J (2-меркаптоэтил)пиперазинил J этил тиометилпристинамидина 1 в виде гидрохлорида (продукт AF): продукт AF 20 мг; 0,1 н. соляная кисота 0,36 дистиллированная вода до 1 см.

Пример 11, Работая, как в примере 2, но исходя из 22 г 5сА-ме- тиленвиргиниамицина S и 9 г 1-(4-ме- тил-1-пиперазинил)-этантиола и после очистки методом импульсной хроматографии (элюент: метиленхлорид-мета- НОЛ 95-5 по объему) и концентрирования досуха фракций при приведенном давлении (2,7 кПа) при получают 0,6 г 2-(4-метил-1-пипера- зинил) (-тиометил-5-виргини- амицин в форме бледно-желтого порошка, плавящегося при 135 С,

спектр ЯМР: 0,37 (дд, 1Н, 5/5); 2,30 (с, ЗН, К-СНз); 2,30-2,70

СН/2 СН о

(м, 13Н, , N +

1

+ 5/i,); 3,16 (дд, 2Н, ); 5,03 (тд, 1Н, 5Е,); 5,37 (дд, 1Н, 4о/); 7,79 (м, 1Н, Г Нб).

Готовят водный 10%-ный раствор 2-(4-метил-1-пиперазинил)-этил -5сА- тиоэтилвиргиниамицина-S (соединение AAR) в форме хлоргидрата; соединение AAR 10 мг; хлороводородная кислота до ОJ1 мл„

Биологическая активность; На серию пластин, каждая из которых содержит известное количество (20 см) культуральной среды (Muller - Higto- nagar), наносят 1/10 этого объема серию геометрически прогрессирующих (степень 2) разбавлений исследуемого соединения. Пластины инокулиру- ют множественным инокулятором, кото- рый разделяет пятно 10 колоний,, фор- ц

0

15

20

мируя блоки микроорганизмов в tryptic soy broth, инкубированной в течение 18 ч при и растворенной в 1/100 той же средой.

После инокуляции пластины бьити

О

инкубированы в течение 24 ч при 37 С. Минимальная ингибирующая концентрация является самой низкой концентрацией, при которой микроорганизмы ингибируются (результаты приведены в табл, 2),

Действие в отношение противобрю- шинной инфекции у мышей. Мышам бьшо введено внутрибрюшинно 0,5 см-- -взболтанной культуры микроорганизмов 18- часовой выдержки в среде Brain Heart enfussion (Difсо), размещенной с 5% hog raucin, Инокулирование вызывает смерть контролируемых животных в течение от 24 до 48 ч, 25 Испытываемая композиция была дваж- i ды введена подкожно с интервалом в 5 ч в день инокуляции, причем первая доза бьша введена по icтeчeнии 1 ч после инокуляции с микроорганизмом Обычная доза содержала 50 „

50%-ная лечебная доза (,) является дозой испытываемого соединения, которое при приеме способствует выживанию }/2 животных в течение периода испытаний (8 дней).

Результаты приведены в табл. 2иЗ.

Токсичность пристинамицина 1 при оральном введении мьш1ам составляет 4450 мг/кг.

30

35

5

0

5

У известных соединений нельзя измерить токсичность при подкожном введении, поскольку этот продукт нерастворим. Измерение DL50 Р- подкожном введении возможно только при введении суспензии соединений в небольших количествах, в то время как измерение токсичности, которое требует большого количестЁа продукта, безрезультатно из-за того, что суспензия не ресорбируется при ее введении.

Проведенные испытания показали, что соединения, полученные в условиях предлагаемого способа, по активности и токсичности находятся на уровне известных синергистинов, однако по растворимости в воде в 10- 100 раз превосходят известные синер- гистины, например виргиниамицин S,

Формула изобретения 50 где R имеет указанные значения;

.с последующим превращением полученСпособ получения производных си ного продукта в случае, необходимости .нергистинов общей формулы . в фармацевтически приемлемую соль.